王金莉,李 丽

(辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州121001)

抗菌药物在临床治疗鸡大肠杆菌病中的长期应用,使耐药菌株不断出现,头孢噻呋作为第一个动物专用的第三代头孢类抗生素,也有产生耐药性的报道,为了延长头孢噻呋在兽医临床的使用时间,减少耐药性的产生,增强药效,降低用药成本,我院动物药学实验室选用协同关系好的头孢噻呋与TMP配伍,按照4∶1比例制成复方头孢噻呋。本试验中测定复方头孢噻呋对鸡大肠杆菌最小抑菌浓度,以及对人工诱发的鸡大肠杆菌病进行试验性治疗,并与头孢噻呋的疗效进行比较,为兽医临床合理应用复方头孢噻呋,提高疗效提供基础数据。

1 试验材料

1.1 药品 复方头孢噻呋,由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提供。头孢噻呋,由天津市生机生物技术有限公司提供,含量98%以上。

1.2 菌种 O1、O2、O78型及本地分离株7株,共 10株鸡大肠杆菌菌株,由辽宁凯为生物技术有限公司提供。

1.3 试验动物 蛋鸡鸡雏300只,雌雄各半,由辽宁医学院畜牧兽医学院养鸡场提供,试验时10日龄,舍内隔离笼养,按常规饲喂全价饲料,自由采食及饮水,不用任何药物或疫苗免疫。

2 试验方法

2.1 复方头孢噻呋的最小抑菌浓度(MIC)测定采用试管两倍稀释法[1]做最小抑菌浓度(MIC)抑菌试验,相同过程重复三次,求平均值。接种菌量为9×105CFU/mL[2],测定复方头孢噻呋对鸡大肠杆菌的MIC值,和头孢噻呋的MIC值对比。

2.2 人工诱发鸡大肠杆菌病

2.2.1 试验分组 选择体重相近的健康鸡300只随机分成6组,分组情况见表1。

2.2.2 人工染毒 各试验组每只鸡分别按每100 g体重胸肌注射鸡大肠杆菌6×109CFU/mL菌液0.25 mL,约含1.5亿个菌[3]。健康对照组鸡经胸肌注射无菌生理盐水0.25 mL。在接种前和接种后观察鸡的临床症状,对死鸡进行剖检,取肝、脾及心作细菌分离培养及鉴定,以确定是否成功诱发疾病。

2.3 试验性药物治疗

2.3.1 给药治疗 感染鸡在接种鸡大肠杆菌6 h左右开始出现临床症状,此时按表1对各组鸡进行治疗。

表1 复方头孢噻呋对人工诱发鸡大肠杆菌病的试验鸡分组及给药情况

2.3.2 疗效评价 第1次给药后15 d为观察期,每天观察各组鸡的各种临床表现,记录死亡数。对死鸡进行尸体剖检,取肝、脾及心作细菌分离培养及鉴定,以确定死因。计算死亡率、治愈率、有效率、相对增重率[3],在试验开始和试验结束时称量每只鸡的体重,并予以记录。

2.3.3 数据分析 利用生物学统计方法进行显著性检验,其中死亡率、有效率和治愈率用卡方检验,平均增重及增重率进行t检验。

2.4 安全性试验 试验是以推荐剂量的5倍(0.25 g/L)对30只健康鸡饮水给药,每天2次,连续给药3 d,观察期为第1次用药后的15 d。

3 试验结果

3.1 复方头孢噻呋的最小抑菌浓度(MIC)测定结果 复方头孢噻呋和头孢噻呋对鸡大肠杆菌株O1、O2、O78以及临床分离7株鸡大肠杆菌的MIC值,见表2。

表2 复方头孢噻呋和头孢噻呋的最小抑菌浓度(MIC)结果 (μg/m L)

由表2可见,复方头孢噻呋的最小抑菌浓度(MIC)值为0.085μg/mL与头孢噻呋单独使用的最小抑菌浓度(MIC)值0.65μg/mL相比,差异极显著(P＜0.01)。

3.2 人工诱发鸡大肠杆菌病的结果 感染对照组50只雏鸡有42只在接种鸡大肠杆菌后1～5 d出现死亡。这42只鸡表现出食欲、饮欲下降或废绝,闭眼昏睡,拉稀粪等临床症状。剖检可见气囊炎、肝周炎和心包炎等病变。从肝脏、脾脏及心脏均分离出大量典型的大肠杆菌,表明成功诱发疾病。

3.3 试验性药物治疗结果 感染大肠杆菌病的鸡经不同剂量的复方头孢噻呋或头孢噻呋给药后,与感染对照组比较,能较迅速地减轻临诊症状,一般在给药2～3 d后,大多数鸡食欲基本恢复正常。给药后15 d内,各组鸡的疗效结果见表3。

表3 复方头孢噻呋对人工诱发鸡大肠杆菌病的疗效

复方头孢噻呋高、中、低剂量组和头孢噻呋对照组死亡率分别为0%、4%、18%和16%,均显著低于感染对照组的84%,差异极显著(P＜0.01)。各用药组相比较,复方头孢噻呋高剂量组死亡率为0,复方头孢噻呋中剂量组和头孢噻呋对照组死亡率均较低,而复方头孢噻呋低剂量组的死亡率高于头孢噻呋对照组。

由表3可见,复方头孢噻呋高剂量组、中剂量组治愈率和有效率较高,均超过90%。头孢噻呋对照组的治愈率和有效率相对较低,复方头孢噻呋低剂量组的治愈率和有效率最低,均低于90%。

在增重上,复方头孢噻呋高剂量组、中剂量组最高,其次为头孢噻呋低剂量组,3个剂量组的相对增重率均高于头孢噻呋对照组,差异显著(P＜0.05)。上述4个组相对增重率均显著高于感染对照组,差异极显著(P＜0.01)。感染对照组相对增重率显著低于健康对照组,差异极显著(P＜0.01)。

4 讨论

通过最小抑菌浓度(MIC)测定方法,比较复方头孢噻呋和头孢噻呋对鸡大肠杆菌O1、O2、O78,以及临床分离的7株鸡大肠杆菌抑菌效果,结果表明,复方头孢噻呋对鸡大肠杆菌的抑菌效果(MIC为0.085μg/mL)极显著优于头孢噻呋(MIC为0.65μg/mL)单独用药。因此,TMP作为抗菌增效剂,增强了头孢噻呋的抗菌活性,同时两者组成复方头孢噻呋可减少头孢噻呋的使用量,降低生产成本。

对治疗试验中的死亡率、治愈率、有效率及增重几项指标进行统计学分析,复方头孢噻呋高、中、低剂量组和头孢噻呋对照组死亡率均显著低于感染对照组,而治愈率和有效率显著高于感染对照组,差异均极显著(P＜0.01),因此不同剂量组的复方头孢噻呋和头孢噻呋对鸡大肠杆菌病均有疗效。安全性试验 用药期间,试验鸡未观察到任何不良反应,无鸡只死亡。

复方头孢噻呋高、中剂量组均优于头孢噻呋对照组,差异显著(P＜0.05)。复方头孢噻呋低剂量组同头孢噻呋对照组比较,死亡率较高,治愈率和有效率较低。复方头孢噻呋高、中剂量组的各项指标比较,差异不显著(P＞0.05),因此,综合上述几项指标分析,在临床上治疗鸡的大肠杆菌病,复方头孢噻呋的给药剂量选择中剂量组的复方头孢噻呋(0.05 g/L)较为合理,对鸡的增重率为95.4%,同时治愈率达96%,达到较好的治疗效果。

[1] 赵振升,白东英,吴朝阳,等.甲氧苄定与抗菌药物联合抗菌作用效果试验[J].黑龙江畜牧兽医,2005(1)：60-61.

[2] 戴自英.临床抗菌药理学[M].北京：人民卫生出版社,1985：16-19.

[3] 曾振灵,刘建新,王志强,等.单诺沙星对人工诱发鸡大肠杆菌病的药效试验[J].畜牧与兽医,2000(3)：17-18.