邢福珊,许信刚,童德文,王志昇,张彦明

(西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100)

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。PCV2可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡,还与仔猪先天性震颤(CT)、成年猪皮炎肾炎综合征(PDNS)和呼吸道疾病综合征(PRDS)有关。PCV2基因组为环状、单链DNA,全长1 767 bp～1 768 bp,PCV2基因组含有11个ORF,分别命名为ORF1～ORF11。研究表明,ORF2编码病毒的核衣壳蛋白(Cap),是主要的免疫原,能诱导中和抗体的产生[1],对猪圆环病毒疫苗的研究有较大的意义。杆状病毒对昆虫细胞的吸附和侵入与病毒的囊膜糖蛋白gp64有重要关系。gp64由N-末端信号肽和成熟蛋白(跨膜区TM和胞质区CTD)组成[1]。gp64被开发成杆状病毒表面展示系统来展示不同的目的蛋白,外源基因片段插入到病毒囊膜蛋白的信号肽与成熟蛋白之间,表达加工时信号肽被切除,形成的N端融合蛋白借助杆状病毒稳定地表达并展示于感染细胞或病毒粒子的表面,筛选得到表达有目的蛋白的重组杆状病毒。目前,杆状病毒表面展示系统已经被开发用于进行基因工程亚单位疫苗的研制[2-3]。本试验基于Cap蛋白是PCV2的主要免疫原,以杆状病毒表面展示系统构建表达PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒,免疫金电子显微镜检测重组Cap蛋白在杆状病毒的囊膜上进行了展示,为进一步研究猪圆环病毒亚单位疫苗奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 质粒、菌株、病毒和细胞 含有PCV2 ORF2基因的质粒pGEM-ORF2由西北农林科技大学动物医学院兽医病理学实验室分离/克隆并……