窦 霞，毕宇安， 王振中，吴 云， 陈宝来，尚 强， 萧 伟

（江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001）

利胆溶石软胶囊为江苏康缘药业股份有限公司研制的中药复方新药，由香葵油、薄荷油等药味组成，具有清热利湿、利胆排石之功效，临床用于胆道结石、胆道感染等病症。为了更全面、有效的控制产品内在质量，提高本品的质量控制水平，保证临床用药的安全及疗效，参照国家食品药品监督管理局颁布的中药指纹图谱研究的技术要求，建立了利胆溶石软胶囊的气相指纹图谱。因为制剂中主要成分薄荷脑、香叶醇等均为挥发性成分，所以我们采用气相色谱法进行研究。结果表明，本实验所建立的指纹图谱方法，重现性好，操作简单，同时也为其他复方中药指纹图谱的研究提供了研究思路［1，2］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 6890气相色谱仪，FID检测器。

1.2 试药 试剂为分析纯。薄荷醇对照品，中国药品生物制品检定所(批号:0774-9904，含量测定用)；香叶醇对照品，美国SIGMA公司(批号:G-5135)。利胆溶石软胶囊由江苏康缘药业股份有限公司生产(批号:071101)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent 6890气相色谱仪；用5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱(HP-5:30 m×0.32 mm×0.25 μm)；进样口温度:240℃；检测器温度(FID):240℃；分流比:50∶1；程序升温:初始温度50℃，保持5 min，以每分钟2℃升至80℃，保持5 min，以每分钟2℃升至120℃，保持6 min，再以每分钟10℃升至210℃，保持3 min，测定；载气流速:1.5 ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算，应不低于30000。

2.2 参照物的选择 考虑利胆溶石软胶囊主要成分为薄荷脑和香叶醇，且薄荷脑含量高，所占峰面积较大，保留时间也较为适中，所以我们选择薄荷脑作为参照物。

2.3 参照物溶液的制备 取薄荷脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备 取利胆溶石软胶囊10粒，内容物混匀，取约50 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验:取样品(批号:071101)，按供试品溶液的制备方法制备供试品，连续进样6次进行测定。记录色谱图，经中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范软件(版本2004A)计算，6张图谱之间的相似度均为1.000，说明测定方法精密度良好。

2.5.2 稳定性试验:取样品(批号:071101)，按供试品溶液制备方法制备供试品，分别在 0、3、6、9、12、24 h 测定，计算出相似度均为1.000，说明供试品溶液在24 h稳定。

2.5.3 重复性试验:取样品(批号:071101)6份，按供试品溶液制备方法制备供试品，进行测定，记录色谱图，计算出相似度均为1.000。

2.6 指纹图谱的建立

2.6.1 样品测定:取10批利胆溶石软胶囊，按供试品的制备方法处理，同时取参照物溶液10 μL记录色谱图。将10批利胆溶石软胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范软件(版本2004A)，对保留时间7～53 min(溶剂峰剪切:0～7 min、53～60 min)的色谱峰进行多点校正后，自动匹配，色谱图见图1，生成对照指纹图谱(见图2)，共标定12个共有峰，其中薄荷醇为参照峰(S)。各批利胆溶石软胶囊样品与对照指纹图谱比较相似度在0.969～0.990，平均为0.979，RSD为0.73%，见表1。以7号峰(薄荷醇)作为指纹图谱的参比峰，计算各共有指纹峰相对于参比峰的相对保留时间和相对峰面积的比值。结果见表2、3。

图1 10批利胆溶石软胶囊GC指纹图谱测定色谱图

图2 利胆溶石软胶囊气相指纹图谱

表1 10批利胆溶石软胶囊相似度测定结果

表2 利胆溶石软胶囊指纹图谱中共有峰的相对保留时间

表3 利胆溶石软胶囊指纹图谱中共有峰的相对峰面积

2.6.2 指纹图谱中主要色谱峰的组成药味归属:在相同色谱条件下，测定了两个原料的指纹图谱。薄荷油原料以薄荷脑(7号峰)为参照进行测定，共有10个色谱峰，香葵油原料以香叶醇(8号峰)作为参照进行测定，共有5个色谱峰。通过对原料及成品的指纹图谱中各色谱峰相对保留时间的比较分析，结果表明，1、2、3、4、5、6、7(S)、8、9、12 号峰来源于薄荷油，其中7(S)峰为薄荷脑；5、6、8、10、11号峰来源于香叶油，其中8号峰为香叶醇，；5，6，8号峰薄荷油及香葵油均有。见图2～4。

图3 薄荷油气相指纹图谱

图4 香葵油气相指纹图谱

3 讨论

3.1 升温程序的选择 考察了不同的气相色谱分析条件，柱温是色谱条件的重要参数，它对各组分分离的影响很大，为此摸索了以下3种程序升温条件:(1)起始50℃(维持5 min)，3℃/min升至80℃(维持5 min)，3℃/min升至120℃(维持3 min)，再以10℃/min升至210℃(维持10 min)；(2)起始50℃(维持5 min)，2℃/min升至80℃(维持5 min)，2℃/min升至120℃(维持3 min)，再以10℃/min升至210℃(维持3 min)；(3)起始50℃(维持5 min)，1℃/min升至80℃(维持5 min)，1℃/min升至120℃(维持3 min)，再以20℃/min升至210℃(维持3 min)。结果表明程序(2)分离较好，保留时间适中，峰形好。因此选程序(2)作为利胆溶石软胶囊指纹图谱测定的升温程序。

3.2 毛细管色谱柱的选择 选用二根不同生产厂家的毛细管色谱柱，均为5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱:Agilent HP-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；Phenomenex ZB-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；进行试验筛选，比较分离度和柱效，结果两根色谱柱分离效果均较好。

［1］国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求［S］.(暂行).2000.

［2］国家药典委员会.中药注射剂指纹图谱实验研究技术指南［S］(试行).2002.

［3］中国药典［S］.一部.2005.