陈蕾，姜林

（新疆维吾尔自治区区中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000）

消脂护肝片中总黄酮的含量测定

陈蕾*，姜林

（新疆维吾尔自治区区中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000）

目的：建立消脂护肝片中总黄酮的含量测定方法。方法：采用分光光度法，以芦丁为对照品，对其进行络合显色，在510 nm波长处测定吸光度，从而测定消脂护肝片中总黄酮的含量。结果：线性范围在0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7），平均回收率为97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）。结论：该法简便易行、重现性好、结果可靠，可用于该制剂的质量控制。

消脂护肝片；总黄酮；分光光度法

消脂护肝片为新疆维吾尔自治区区中医医院院内制剂。由郁金、赤芍、白芍、丹参、山楂、决明子、瓜蒌、海藻、昆布、香附、鸡内金、党参、西红花13味中药组成，具有疏肝、行气、活血的功能，用于高血脂症、脂肪肝、早期肝纤维化。主要化学成分有黄酮类、苷类、有机酸、生物碱类、多糖等。该制剂原质量标准除片剂检查通项外，只有芍药苷的薄层色谱。本实验采用分光光度法对总黄酮进行含量测定，通过对消脂护肝片中总黄酮的含量测定，为该制剂的质量标准提供定量依据。现将结果报道如下。

1 仪器与试药

UV-cintra20紫外分光光度计（澳大利亚GBC scientific Equipment），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号100080-200707），消脂护肝片（批号080707，081223，、090511），水为本院实验中心超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备［1-2］

精密称取芦丁对照品40 mg，置100 mL容量瓶中，加入甲醇50 mL溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.4 mg·mL－1的对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备［3-4］

精密称取样品1 g，加入70%乙醇50mL，超声提取30 min（功率250 W，频率59 KHz），放冷，过滤待用，作为供试品溶液。

2.3 波长的选择［5-6］

对芦丁对照品溶液和供试品溶液从400～800 nm进行扫描，得到紫外－可见吸光图谱，见图1。从图1可知510 nm为最大吸收波长。

图1 芦丁及供试品溶液的紫外-可见图谱

2.4 标准曲线的制备［7-8］

精密量取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于25 mL容量瓶中，各加水至6 mL。加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，使混匀，放置6 min；加入10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min；加入氢氧化钠试液10 mL，再加入水至刻度，摇匀，放置15 min。在510 nm的波长处测定吸收度。以吸收度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算得回归方程Y＝0.053 7X＋0.001 0（r＝0.999 7），表明芦丁对照品溶液在0.008～0.08 mg·mL－1呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于配制后0，10，20，30，40，50，60，90 min，依照“2.4”项方法测定吸光度，计算RSD＝2.33%，结果表明溶液制备后90 min稳定。

2.6 精密度试验

取同一供试品溶液6份，依照“2.4”项方法测定吸光度，计算RSD＝1.39%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取供试品溶液1份，依照“2.4”项方法重复测定吸光度值6次，计算RSD＝0.40%，结果表明重复性良好。

2.8 重现性试验

制备同一浓度供试品溶液6份，依照“2.4”项方法测定吸光度，计算RSD＝0.98%，结果表明重现性良好。

2.9 加样回收率试验

精密称取样品1.0 g，按2.2项下方法制备成供试品溶液，分别精密量取供试品溶液1mL，共6份，每份分别加入一定量芦丁对照品，按2.4项下方法测定吸光度，计算回收率，结果见表1。

表1 芦丁对照品加样回收率

2.10 样品含量测定

取批号080707，081223，090511的消脂护肝片，分别按2.2项下方法制备成供试品溶液，各精密量取1 mL按2.4项下方法测定吸光度，代入回归方程计算消脂护肝片中总黄酮含量，结果见表2。

表2 样品中总黄酮含量测定

根据以上结果，确定该制剂中总黄酮含量应不低于35 mg·g－1。

3 讨论

目前，文献报道总黄酮的含量测定方法［1-9］，主要有紫外分光光度法、HPLC、荧光光度法等。本试验采用分光光度法测定消脂护肝片中总黄酮的含量，简便易行、重现性好、结果可靠。本实验以芦丁为对照品，经波长扫描确定最大吸收波长510 nm为检测波长。

黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇等溶剂，甲醇毒性大，且浸透能力强，提取范围广，杂质较多，故采用乙醇做溶剂提取消脂护肝片中总黄酮。通过比较超声提取、回流提取，结果表明超声提取效率明显高于回流提取，且超声提取时间短，操作方便，而且不用加热，避免高温对黄酮结构的影响，故采用超声提取法。

在实验中，我们通过考察样品、芦丁对照品在400～800 nm波长范围的光谱图，结果样品与芦丁对照品的吸收光谱在510 nm为一平峰，故选择510 nm为测定波长。在实验中我们发现供试品溶液的显色受温度影响且随时间有变化，因此比色测定应平行操作，并按照规定时间进行。黄酮类化合物母核上多带有酚羟基，对光和空气中的氧很敏感，其溶液长时间久置后吸光度会下降，因此，待测液不宜久放，并避光低温保存。

［1］邵彩云.蒙药文冠木不同部位总黄酮的含量测定［J］.中国民族医药杂志，2005，11（1）：28-29.

［2］刘斌，石任兵，周素蓉.苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研究［J］.中国实验方剂学杂志，2004，10（6）：24-26.

［3］黄永林，赵志国，文永新.不同部位艾纳香中总黄酮的含量测定［J］.广西植物，2006，26（4）：453-455.

［4］黄永林，阮俊，文永新，等.不同部位紫玉盘总黄酮的含量测定［J］.时珍国医国药，2006，17（10）：1900-1901.

［5］宋永强，湛乐刚.分光光度法测定裸花紫珠片中总黄酮含量［J］.海南医学，2005，16（6）：152.

［6］谢鸣，彭镶心，刘超，等.紫外分光光度法侧定夏枯草微丸中总黄酮的含量［J］.西南民族大学学报，2006，32（1）：136.

［7］郭亚健，范丽，王晓强.关于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨［J］.药物分析杂志，2002，22（2）：97-99.

［8］马陶陶，张群林，李俊，等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨［J］.时珍国医国药，2008，19（1）：54-56.

［9］杨书良.HPLC测定双果胶囊中总黄酮的含量［J］.中国中药杂志，2004，29（6）：586.

Determination of Total Flavones in Xiaozhihugan Tablets

Chen Lei，Jiang Lin
（Traditional Chinese Medical Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang830000，China）

Objective：To establish ultraviolet sepctrophotometry for the determination of total flavones in Xiaozhihugan tablets.Methods：Quercetin was selected as reference material，and the samples were determined at510 nm.Results：The linear range for quercetin was 0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7）.The recovery rate was 97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）.Conclusion：This method is easy to handle with good accuracy and reproducibility，and is suitable for the quality control of Xiaozhihugan tablets.

Xiaozhihugan tablets；Total Flavones；Sepctrophotometry

*陈蕾，E-mail：leibaobao＠sina.cn

2010-06-05）