广西中医学院药学院 杨海玲

河南中医学院药学院 张振凌

湘潭职业技术学院 李俊雅

河南省信阳市食品药品检验所 张红伟

河南中医学院药学院 王一硕

河南省不同产区桔梗饮片HPLC指纹图谱研究*

广西中医学院药学院 杨海玲

河南中医学院药学院 张振凌

湘潭职业技术学院 李俊雅

河南省信阳市食品药品检验所 张红伟

河南中医学院药学院 王一硕

桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodongrandiflorum（Jacq.）A.DC.的干燥根。始载于《神农本草经》，列为下品。具有宣肺利咽、祛痰排脓的功效，临床可用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛等证，属临床常用中药。为了探讨不同产地对桔梗饮片质量的影响，本文采用高效液相法对河南省不同产区桔梗饮片指纹图谱进行比较研究，以便结合药效实验为进一步揭示其药效物质基础，建立其饮片质量标准提供科学依据。

一、材料与仪器

1.样品来源。桔梗饮片为河南禹州、南阳桐柏及洛阳栾川产地的中试及放大生产实验样品，见表1。

表1 样品来源

二、方法与结果

检测波长210nm，分析时间120min，进样量20L。

2.对照品溶液的制备。精密称取对照品桔梗皂苷D适量，置2mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，即得1.00mg.ml-1的对照品溶液。

3.供试品溶液的制备。精密称取样品粉末（过50目筛）2g，加甲醇50mL，水浴加热回流30min，滤过，滤液至蒸发皿中，于水浴锅上挥去溶剂后用50%色谱甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。

4.测定方法。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20L，注入色谱仪，结果见图1，图2，结果表明，溶剂对桔梗饮片指纹图谱无干扰。

图1 桔梗皂苷D对照品色谱

图2 桔梗饮片供试品溶液色谱

5.方法学考察。

（1）精密度试验。取同一供试品溶液20L，连续进样5次，结果表明8个共有峰的相对保留时间RSD均小于1.0%，相对峰面积RSD均小于2.7%，说明供试品溶液精密度良好。

（2）稳定性试验。取同一供试品溶液，分别在0，3，6，9，12，24h内进样20L，结果表明8个共有峰的相对保留时间RSD均小于1.0%，相对峰面积RSD均小于3.0%，说明供试品溶液稳定性良好。

（3）重复性试验。精密称取桔梗（南阳桐柏中）粉末5份，各2g，分别制备供试品溶液进行分析。结果表明8个共有峰的相对保留时间RSD均小于0.34%，相对峰面积RSD均小于3.4%。说明本法测定的重复性良好。

6.桔梗饮片HPLC指纹图谱的建立。分别取上述10批桔梗饮片，制备供试品溶液；分别精密吸取20L，注入液相色谱仪，按色谱条件测定，记录指纹图谱。根据测定结果，确定了8个共有色谱峰，对其顺序编号为1～8，其中8号色谱峰为桔梗皂苷D参照峰。桔梗饮片1～8号中位数相关系数依次为0.963，0.977，1.000，0.740、0.773，0.740，0.707，0.735，0.780，0.781，色谱图见图3、图4。

图310 批桔梗HPLC指纹图谱比较（2D）

三、小结与讨论

1.本研究首次建立河南产桔梗饮片HPLC指纹图谱，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版对不同产地的桔梗饮片的HPLC指纹图谱进行相似度评价。结果表明其指纹图谱相互间较为吻合，虽然样品的个体存在一定差异，特征峰的相对含量存在一定的差异，但整体轮廓均符合共有特征。同时从饮片整体色谱图入手，选取了8个特征峰构成了桔梗的指纹图谱，以共有模式作为河南产桔梗的鉴别标准，能提供更全面的质量控制信息。实验证明该方法操作性强，重现性好，可作为桔梗内在质量控制的评价方法。

2.实验中对提取方法（回流提取法、超声提取法、超声沉淀法），检测器（普通紫外、紫外二极管阵列监测器及检测波长）进行了考察，最终确定了供试品溶液的制备方法和样品检测的色谱条件。

3.对河南省内禹州、栾川、桐柏3个主要产区的桔梗指纹图谱的研究结果表明，桐柏产桔梗较其余2个产区的桔梗相似度为最高，且桐柏产的桔梗桐柏（中）饮片桔梗皂苷D峰面积较大，含量也较高，这可能与河南桐柏当地桔梗采收选择在秋季地上部位枯萎时采收有一定关系。因此，这就再次充分肯定了“桐桔梗”的道地性和优越性。另外，本实验采取的样品均为河南几个主要产区不同药材，故样品具有代表性，能较好地反映桔梗饮片指纹图谱研究的全面性。

图4 桔梗饮片共有模式

河南省重大科技攻关项目（0522030200）。