卢志勇，高学军，黄建国，刘晓飞，李学琳

（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030）

蛋氨酸是饲料中含硫氨基酸，在动物营养上有极大的价值。蛋氨酸的测定方法多种多样，主要有离子交换色谱法、氨基酸分析法、紫外分光光度法、高效液相色谱（HPLC）检测法等。但饲料在水解的过程中蛋氨酸会被部分氧化，离子交换色谱法、氨基酸分析法、紫外分光光度法无法准确测出蛋氨酸含量，而常规HPLC检测法在测定时只注重测定水解物中的蛋氨酸，也无法准确计算出蛋氨酸的含量[1]。本试验通过HPLC对蛋氨酸及蛋氨酸氧化物（蛋氨酸砜）进行柱前衍生，测定饲料中的蛋氨酸含量，从而提高对蛋氨酸检测的准确度，为今后饲料蛋氨酸的检测提供了一种准确可靠的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：SPD-10AV高效液相色谱仪（日本岛津生产）；N3000色谱工作站（浙江大学提供）；微型漩涡混合仪（上海精科实业有限公司生产）；KQ-500DE型数控超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司生产）；纯水仪（PALL公司生产）。

试剂：DL-蛋氨酸标准品（色谱纯，天津市光复精细化工研究所生产）；DL-蛋氨酸砜标准品（Alfa Aesar，Stock#B25094），其他试剂均为国产分析纯；Na2CO3-NaHCO3缓冲液（pH 9.0）；30 mg·mL-1CDNB 溶液（2,4-二硝基氯苯溶液）[2]。

1.2 色谱条件

C18不锈钢分离柱 YMC（5 μm 4.6×150 mm）；流动相：含φ＝30%乙腈的0.01 mol·L-1NaAC缓冲液（pH 5.2），取 0.01 mol·L-1pH 5.2 NaAC 缓冲液700 mL与色谱纯乙腈300 mL混合，经0.45 mm微孔滤膜真空抽滤，超声脱气；检测波长350 nm；柱温 25℃；流速 0.8 mL·min-1。衍生后的试剂经0.22 μm滤膜过滤后直接上样，体积10 μL，测定其中蛋氨酸含量。

1.3 样品液的准备

称取含蛋白质10～20 mg的试样（约50～100 mg，准确至 0.1 mg），按照 GB/T 18246-2000中酸水解法进行水解。……