金光泽, 段作营, 张莲芬, 金坚, 李华钟＊

(1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室;2.江南大学医药学院,江苏无锡 214122)

重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达

金光泽1, 段作营1, 张莲芬2, 金坚2, 李华钟＊1

(1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室;2.江南大学医药学院,江苏无锡 214122)

构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白(HSA)的编码基因连接为融合蛋白HSA-IL2m的编码基因。克隆到表达质粒pPIC9K中,电击转化P.pastorisGS115感受态细胞,获得重组P.pastorisGS115/pPHIm基因工程菌。摇瓶发酵获得分泌表达产物。结果:Western blot鉴定结果显示该融合蛋白与IL-2、HSA的抗体都能发生免疫反应。经脱盐、冻干制备的粗蛋白的IL-2生物学活性为1.51×106IU/mg。结论:在P.pastorisGS115中成功表达了具有人白介素-2生物学活性的HSA-IL2m融合蛋白。

突变型人白介素-2;人血清白蛋白;毕赤酵母;融合蛋白

白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),又称T细胞生长因子,1976年由Morgan等首先在外周血淋巴细胞中发现[1],是辅助T细胞分泌的淋巴因子,在免疫系统中发挥着重要的作用。它是中国第一个基因工程生产的蛋白质药物[2],临床上可用于恶性肿瘤治疗、感染性疾病的治疗、镇痛等[3]。由于IL-2在人体内的半衰期很短,临床多采用高剂量频繁给药,这不仅增加患者的经济负担更有可能产生不良副作用[4]。为了克服上述缺点,作者利用人血清白蛋白融合技……