王腾浩, 秦玉梅, 张根华, 邓少平＊

(1.浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江杭州 310035;2.常熟理工学院生物与食品工程学院,江苏常熟 215500)

味蕾细胞的Percoll梯度离心纯化技术研究

王腾浩1, 秦玉梅1, 张根华2, 邓少平＊1

(1.浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江杭州 310035;2.常熟理工学院生物与食品工程学院,江苏常熟 215500)

以ICR小鼠的菌状味蕾细胞为研究对象,利用Percoll梯度离心技术纯化小鼠菌状味蕾细胞,通过台盼蓝染色和免疫组织化染色方法分别比较纯化前后的味蕾细胞存活率与纯度的变化,应用透射电镜从超微结构鉴定味蕾细胞。结果显示:通过不连续的Percoll密度梯度离心法对味蕾细胞进行纯化,细胞分层效果明显,主要位于体积分数20%与40%的Percoll工作液之间;免疫组化结果表明:纯化后味蕾细胞的纯度显著提高,从10%提高到65%(P<0.01),台盼蓝染色结果显示:纯化后细胞活度达94%,电镜则从超微结构上证实了纯化的细胞为味蕾细胞。

味蕾细胞;纯化技术;Percoll;超微结构

味蕾是哺乳动物味觉的主要感觉器,主要分布在舌、上软腭、咽、喉和食道上部[1]。舌上皮中有4种不同空间分布的舌乳头(lingual papille):丝状乳头(filiform papillae,FI)、菌状乳头(fungiform papillae,FF)、叶状乳头(foliate papillae,FL)和轮廓状乳头(circumvallate papillae,CV),其中FF、CV、FL乳头因含味蕾而被称为味乳头(gustatory papillae)[2]。FF乳头主要位于舌前部三分之二的区域,哺乳动物的每个FF乳头含一到多个味蕾[3]。每个味蕾有50～150个细胞组成,这些细胞根据其超微结构特征将这些细胞分为4种类型[4]:Ⅰ型细胞(暗细胞)、Ⅱ型细胞(亮细胞)、Ⅲ型细胞(中间细胞)和Ⅳ型细胞(基细胞)。其中Ⅱ型和Ⅲ型细胞被认为是味觉感受细胞,已成为味觉生物学研究的热点。随着味蕾细胞分离方法的建立和发展,味蕾细胞的研究已经取得长足的进展。……