易亮衡,秦永伟,陈金铃,朱丹丹,何兴新,段义农

2.湖北省黄石市疾病预防控制中心,黄石 435000

大鼠源肺孢子菌p55基因片段真核表达质粒的构建及表达*

易亮衡1,2,秦永伟1,陈金铃1,朱丹丹1,何兴新1,段义农1

目的构建大鼠源肺孢子菌抗原p55基因片段真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞COS-7中的有效表达。方法以含有p55全长基因的质粒为模板,通过PCR扩增p55基因片段,克隆至pGEM-T载体中,经酶切后再将p55基因重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入COS-7细胞,RT-PCR检测其基因转录情况,SDS-PAGE鉴定其表达相应的目的蛋白质情况。结果成功扩增了p55基因片段,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,RT-PCR和SDSPAGE方法证实该片段能在COS-7细胞中有效表达目的蛋白质。结论成功构建了大鼠源肺孢子菌p55基因片段的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究奠定了基础。

大鼠源肺孢子菌;p55基因;真核表达

2.湖北省黄石市疾病预防控制中心,黄石 435000

肺孢子菌(Pneumocystis)是一类重要的机会性致病真菌,广泛存在于人和哺乳动物肺组织内,可以引起肺孢子菌肺炎(Pneumocystispneumonia,PCP)。PCP目前已成为艾滋病患者最常见的机会性感染,并是其致死的主要原因〔1〕。此外,恶性肿瘤、器官移植术后、恶性营养不良、大量的免疫抑制剂、抗肿瘤药物的应用以及放射线照射等造成机体免疫功能低下也极易诱发本病〔2〕。PCP一旦发生,病情进展迅速,病死率极高,不经治疗几乎100%死亡,故越来越受到国内外的重视。……