杜军伟,王远志,陈创夫,葛阳春,唐利燕

2.新疆民族与地方高发病教育部重点实验室,石河子832003

实时定量PCR检测siRNA对小鼠巨噬细胞中FTH1基因表达的抑制作用*

杜军伟1,2,王远志2,陈创夫2,葛阳春1,2,唐利燕1,2

目的通过实时定量PCR(real-time PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(siRNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于FT H1(ferritin heavy chain 1,FTH1)基因表达mRNA的siRNA,经TurboFectTMin vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总 RNA,逆转录为cDNA。以 3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FT H1基因mRNA的量。结果3种siRNA处理的小鼠巨噬细胞中FT H1基因的表达抑制率最高为97.60%。结论实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径。

实时定量PCR;siRNA;小鼠RAW264.7巨噬细胞;FT H1

2.新疆民族与地方高发病教育部重点实验室,石河子832003

布鲁氏菌病是严重危害畜牧业的动物源性传染性疾病,主要感染反刍动物和人类〔1〕。其病原为布鲁氏菌(Brucella),是一种兼性细胞内寄生的致病菌,人感染后常表现为持续性感染,可引发生殖系统损伤、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等,甚至会丧失劳动能力〔2〕。家畜感染后造成流产、空怀等〔3〕,给畜牧业生产造成严重经济损失。巨噬细胞是布鲁氏菌生存和繁殖的靶细胞。IV型分泌系统(VirB)是布鲁氏菌毒力基因,与布鲁氏菌在宿主细胞内生存、复制有关。VirB区段包括 12个基因,形成一个操纵子。VirB系统的结构功能研究显示:VirB2和VirB5位于细菌表面,形成菌毛样结构〔4-5〕。王远志等〔6〕运用酵母双杂交技术从绵羊种布鲁氏菌019株……