郝文波,李 宏,邓小英,廖小青,李 明,罗树红

恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5 F1段的克隆、表达及初步鉴定*

郝文波,李 宏,邓小英,廖小青,李 明,罗树红

目的克隆表达恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5(PfRh5)F1片段,并评价其抗原性。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pET28a(+)中,构建PfRh5F1/pET28a原核表达载体。IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,并用Western Blot检测其抗原性。结果成功构建了PfRh5F1/pET28a原核表达系统,并在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,表达产物能被恶性疟原虫感染患者血清识别,而不能被间日疟原虫感染患者及正常人血清识别。结论恶性疟原虫PfRh5 F1段在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。

恶性疟原虫;网状细胞结合蛋白同源体5;克隆;表达

恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体 5(PfRh5)是恶性疟原虫(P f)PfRh家族的一个新成员,位于裂殖子顶端的棒状体内,最近研究发现该蛋白是参与Pf入侵的一个重要蛋白,可与红细胞上尚未识别的一个新的糖基化的受体结合〔1-2〕,而且该蛋白对虫体的生存具有关键作用〔3〕。本实验克隆表达了PfRh5蛋白的F1段(K31-F174),该片段预测与红细胞上受体结合相关,为进一步研究该蛋白在红细胞入侵中的功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒与菌株 载体pET28a为Pharmacia产品、大肠杆菌宿主菌Rosetta为本室保存。

1.1.2 虫株与抗体 恶性疟原虫HCC1/HN株由本室保种;恶性疟原虫和间日疟原虫病人血清由云南省西双版纳傣族自治州疾病预防控制中心提供;H RP标记的羊抗人IgG抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。……