陈 樱，邓国华，陈化兰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001)

近年来，有关H5N1亚型高致病性禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)在禽类中爆发及人群中流行的报道已经引起世界范围内的广泛关注。根据世界卫生组织公布的最新数据，至2009年7月1日，全球共发生人感染禽流感病例436例，死亡262例[1]，病死率为60%。紧接着发生甲型H1N1流感，肆虐全球，导致89 921人感染，382人死亡[2]，该型流感病毒虽然致死率不如H5N1亚型禽流感，但其传播速度快，范围广。目前除了支持疗法外，其他可供选择的有效治疗方法非常局限，而且存在一些H5N1亚型AIV对现有抗病毒药物具有耐药性，例如金刚烷胺和金刚乙胺，补充说明的是H5N1亚型病毒对奥塞米韦耐受已有报道[3-4]。除此之外，虽然疫苗对成年人产生保护率在70%～90%之间[5-6]，但是婴儿、儿童、老年人和免疫抑制者感染流感的机率却很高[7-8]，并且疫苗的研制必须根据当时流行毒株的亚型来制备，所花时间为6个月，甚至更长，这些不利因素给流感的预防和控制带来困难。治疗性抗体的研发对流感的预防和治疗有一定的辅助意义，本研究旨在构建抗H5N1亚型AIV的单链抗体(scFv)，并通过噬菌体展示技术，筛选出有活性的scFv，为嵌合抗体或人源化抗体的构建提供可用的可变区片段。

1 材料和方法

1.1 病毒株、细胞株及菌株 AIV A/Duck/ZJ/11/00(H5N1)株由本实验室分离保存；抗H5N1亚型AIV猴源外周淋巴细胞由本实验室制备保存；E.coliJM109菌株由本实验室保存。……