耿 屹，曹荣峰，高晓宇，李守军*，张桂红*

(1.山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109；3.华南农业大学兽医学院，广东广州510642)

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)是猪上呼吸道的一种常在的条件性致病菌，可引起猪的纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的革拉瑟氏病(GIasser's disease)[1-2]。HPS是一种NAD依赖型、不运动的革兰氏阴性细小杆菌，属于巴斯德菌科(Pastteurellaceae)嗜血杆菌属(Haemophilus)。该菌多与其他病原，如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等混合感染，严重危害仔猪和青年猪的健康[3]。近年来由于该病的频繁发生，给养猪业造成严重的损失，因此倍受人们的关注。

HPS主要存在于猪的上呼吸道(鼻腔、扁桃体和气管前段)内[4]。许多HPS菌株具有类似于菌毛的丝状结构，菌毛是上呼吸道黏附因子，黏附后发生侵袭，进入体内[5]，虽然HPS和宿主之间的相互作用还不清楚，但黏附到宿主组织是感染开始时最关键的一步，因此阻断感染的初始阶段，特别是黏附到细胞和定植在黏膜表面，可能是预防感染最有效的策略。

1 材料和方法

1.1 菌株、质粒和细胞 HPS由华南农业大学兽医学院禽病研究室提供；猪HPS阳性血清由华中农业大学惠赠。HRP兔抗猪酶标二抗购自北京博尔森公司。大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α及质粒pET-32a(+)为本实验室保存。

1.2 主要试剂 各种DNA限制性内切酶、T4连接酶、TaqDNA聚合酶、标准相对分子质量Marker均购自TaKaRa公司。DNA胶回收试剂盒和低相对分子质量标准蛋白购自上海生工生物工程公司。硝酸纤维素(NC)膜为Whatmen公司产品；……