宋 扬，韩宗玺，邵昱昊，孔宪刚，刘胜旺

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001)

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由IB病毒(IBV)引起的一种鸡急性高度接触性传染病。IBV是冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)第3群禽冠状病毒的代表株[1]。其基因组编码4种结构蛋白：纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)、核衣壳蛋白(N)和小膜蛋白(E)。N蛋白为磷酸化蛋白，由409个氨基酸组成，占病毒蛋白总量的40%，分子量约51 ku[2]。N蛋白具有较高的保守性，据报道，N蛋白中间部分比两端更为保守，各病毒株之间在氨基酸的238位～293位之间高度一致[3]。N蛋白在病毒的复制和转录中起作用，主要作用是与病毒RNA结合形成核衣壳[4]。此外，N蛋白具有良好的免疫原性，可在体内产生高水平的抗体并介导细胞毒性T反应[5]。本研究旨在获得针对IBV N蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)，精确定位IBV N蛋白的抗原表位，在分子水平上揭示N蛋白的抗原结构。

1 材料和方法

1.1 病毒株和质粒 IBV致弱株CK/CH/LDL97Ⅰ由本实验室分离、致弱和保存。原核表达重组质粒pGEX-6p-1-N为本实验室构建并保存。

1.2 实验动物及细胞 BALB/c小鼠购于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心；骨髓瘤细胞SP2/0由本实验室保存。

1.3 主要试剂 培养基DMEM购自Invitrogen公司；弗氏完全佐剂(FCA)、弗氏不完全佐剂(FICA)、聚乙二醇(PEG，MW 1450)、HAT、HT、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG、MAb亚类鉴定试剂盒均购自Sigma公司；胎牛血清购自Hyclone公司；噬菌体展示随机12肽库(Ph.D-12TMPhage Display Peptide Library Kit)购自NEB公司。

1.4 重组N蛋白的制备 重组蛋白的制备按文献[6]的方法进行。

1.5 动……