李作生 李保庆 王国臣

p21和p27基因是调控细胞周期的相关基因。在细胞周期的G1/S期的调控中，通过与cyclin－cdk复合物结合抑制Rb蛋白磷酸化，从而诱导细胞周期阻滞，因而被认为是抑癌基因。p21基因外显子 3的 3’非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)第20碱基对存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)，核苷酸出现 C→T 突变(3’UTR 多态性)，p27基因第109密码子存在V109G多态性，核苷酸出现T→G突变。研究表明p21和p27基因多态性与口腔鳞癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤的发病风险有关［1－3］。本研究检测了华北煤炭医学院附属医院胸外科和河北医科大学第四医院2003年1月至2006年1月女性人群中非小细胞肺癌(non－small cell lung carcinoma，NSCLC)遗传易感性及淋巴结转移与p21和p27基因单核苷酸多态性SNPs的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例组选取110例NSCLC病例，经手术或支气管镜检查证实。年龄27～76岁，平均年龄57.1岁。对照组124例，年龄29～70岁，平均年龄54.9岁，无肿瘤及遗传病史。

1.2 外周血白细胞DNA提取 研究对象均抽取外周静脉血5 ml，经枸橼酸钠抗凝，于4℃冰箱保存，并于采血后1周内提取外周血白细胞DNA。DNA提取采用蛋白酶K消化－饱和氯化钠盐析法。

1.3 p21、p27 SNPs基因分型 p21、p27基因型检测应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析(polymerase chain reaction－restriction fragment length polymorphism，PCR－RFLP)方法进行。p21 SNP 扩增引物为 5’－GAATTTGCCGTTGGGTCAAG－3’(上游引物)和 5’－AGGAGAACACGGGATGAGGAG－3’(下游引物)［3］。p27 SNP 扩增引物为5’－TGCAGACCCGGGAGAAAG－3’(上游引物)和 5’－CCGCTAACCCCGTCTGG－3’(下游引物)［3］。PCR反应体系均为25 μl，其中模板 DNA 100 ng，10× PCR缓冲液 2.5 μl，Taq－DNA 聚合酶2.5 U，MgCl22.0mm ol/L，dNTPs 0.2mmol/L，上、下游引物各0.2 μmol/L。PCR反应条件为:94℃预变性 10 min，94℃ 45 s，58℃ 45 s(p21)或 60℃ 45 s(p27)，72℃ 60 s，35 个循环后，72℃ 延伸 7 min。取 8 μl PCR产物进行限制性内切酶消化，经3%琼脂糖凝胶电泳分析基因型。p21基因的PCR产物经限制性内切酶PstⅠ37℃酶切后，C/C基因型产物为133、256和479 bp 3个DNA片段，T/T基因型表现为133 bp和735 bp 2个片段，C/T杂合型表现为133、256、479、735 bp 4个片段(图1)。……