乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与HBV血清学标志组合的关系

2010-06-07彭及良温秀明许瑞环沈磁石何春辉

中国医药导报 2010年17期

彭及良，温秀明，许瑞环，沈磁石，何春辉

（1.广东省深圳市龙岗区血站，广东深圳 518172；2.广东省深圳市龙岗中心医院，广东深圳 518116）

近年来随着分子生物学技术的发展及其在临床应用方面的推广，应用实时荧光定量聚合酶链反应检测 HBV病毒载量已成为目前临床诊断 HBV感染的常用指标，进一步提高了检测的质量。同时采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎病毒HBV标志（HBV-M）简便易行，一直为许多临床科室使用。临床上有必要把此两种方法的检测结果联合起来进行分析，指导临床应用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2009年6～9月来我院住院及门诊的423例患者，年龄13～66岁。所有标本用无菌管留取血样3 ml，于3 h内分离血清，并冻存于20℃冰箱。

1.2 主要试剂

HBV-DNA定量诊断试剂由深圳市匹基生物技术公司提供。HBV-M测定用酶联免疫吸附试验（ELISA），试剂由上海科华生物工程公司提供。

1.3 检测方法

1.3.1 ELISA法按试剂说明书进行。

1.3.2 荧光定量PCR法检测HBV-DNA①样本处理，取待测血清或血浆样本以及试剂及试剂盒中的对照各100μl，分别加到0.5 ml离心管中，100μl DNA提取液1，振荡混匀，13 000 r/min离心 10 s，25μl DNA 提取液 2，振荡 10 s，200 r/min 离心 10 s，100℃干浴或沸水浴 10 s，13 000 r/min离心10 s，保留上清备用。②反应体系为40μl：37.6μl PCR反应液、0.4μl Taq酶、0.06μl VNG及2μl提取物。③循环条件为：37℃ 5 min、94℃ 1 min、95℃ 5 s，60℃ 30 s 42 个循环。荧光信号收集在60℃。

1.3.3 污染的控制标本的处理、试剂的配制、上样及PCR扩增检测严格分室进行，每次检测均设强阳性、临界阳性、阴性、质控试剂参照品。