边 栋,崔 阳,崔 琳,李明雁,李艳华

(东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030)

细菌耐药性一直是全球关注的问题,由于阿莫西林的广泛应用及不合理使用,导致临床常见的病原菌产生严重的耐药性,给动物的健康带来极大的威胁。为此,国外研究人员已经开始研究耐药性抑制剂,如利血平、氰氯苯腙等,虽然对耐药性均有一定的抑制作用,但它们本身的毒性也较大。因此,研究低毒、有效的耐药性抑制剂具有广泛的应用价值和良好的前景,在国际上越来越受到重视。中药是我国特有的天然资源,在治疗感染、逆转肿瘤细胞耐药性等方面显示了独特的作用,这提示我们可以在中药[1]中寻找既有对耐药菌株有效又无毒副作用或毒副作用较低的药物。连翘属金丝桃属藤黄科多年生草本植物,全草可入药。连翘具有清热解毒、收敛止血、利湿之功效。

基于尚未见到连翘-阿莫西林复方药物安全性评价的报道,故按照农业部新兽药一般毒性试验技术要求[2]进行了其急性毒性试验和亚急性毒性试验研究,为开发新药提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 清洁级昆明系小鼠80只,体重20±2 g,雌雄各半,购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.2 试验药物 阿莫西林原粉购自武汉凯通精细化工有限责任公司,连翘原粉购自四川省什邡市宏升植物原料有限公司。

1.3 化学试剂 用于测定 GPT、GOT、AKP、肌酐和尿素氮的试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.4 试验仪器 BT224S型电子天平,WD-9403C型紫外分光光度计,DH6000A型恒温箱。

1.5 试验方法

1.5.1 急性毒性试验预试验 每次分别取两只小鼠,根据上下法[2],首次给予2 000 mg/kg药物,如果全死则降低剂量,如果全活则增加剂量,观察出现的症状并记录死亡数,找出引起0%及100%死亡率的剂量。因给予4 000 mg/kg浓度药物时,死亡率仍为0%,只能测得最大耐受量。

1.5.2 亚急性毒性试验 将小鼠80只随机分为4组(高剂量组、中剂量组、低剂量组及对照组)[3],每组20只,雌雄各半,前3组分别给予浓度为40 g/kg、13.33 g/kg和4 g/kg的药物,对照组不加药物。各组均自由采食。分别在给药第7天和第14天时,对各组小鼠进行器官系数[4]、器官含水量、血常规检验、肝功与肾功能检查。

2 试验结果与分析

2.1 性毒性试验结果 小鼠未出现因药物作用而导致的死亡。测得最大耐受量为40 g/kg。

2.2 亚急性试验结果

2.2.1 连翘-阿莫西林复方药物对体重的影响 试验中各组小鼠给药后的表现与急性试验基本一致,给药期间小鼠未出现因药物作用而导致的死亡情况。各组小鼠均有不同幅度的体重增加,各剂量组和对照组小鼠体重进行统计学分析(t检验),结果表明给药后3个剂量组的小鼠体重变化幅度与对照组间差异不显著(P＞0.05)。

2.2.2 小鼠的器官系数与器官含水量 给药后第7天和第14天,各剂量组小鼠的各器官系数差异均不显著(P＞0.05);给药第7天,各剂量组小鼠器官的含水量差异均不显著(P＞0.05);给药第14天,中剂量组的心脏含水量差异显著,其余均不显著。

2.2.3 连翘-阿莫西林复方药物对小鼠血液生理指标的影响 连翘-阿莫西林复方药物对小鼠血液生理指标的影响结果见表1。通过对试验数据进行统计学分析(t检验)表明,3个剂量组小鼠的血红蛋白(Hb)、红细胞数(RBC)、中性粒细胞百分比(wlcr)、淋巴细胞百分比(w-scr)与对照组间差异均不显著(P＞0.05)。

2.2.4 连翘-阿莫西林复方制剂对小鼠血液生化指标的影响 连翘-阿莫西林复方药物对小鼠血液生化指标的影响结果见表2。对试验数据进行统计表明:第14天,高剂量组谷草转氨酶(GOT)差异显著(P＜0.05),其他生化指标未见各剂量组与对照组之间差异有统计学意义(P＞0.05)。

2.2.5 小鼠的病理组织学变化 分别在第7天和第14天对各组小鼠进行病理组织学检查,病理切片结果显示,病理组织变化和数据反应的基本吻合,有少数切片出现淤血现象,无明显的病理变化。

表1 连翘-阿莫西林混合药物对小鼠血液生理指标的影响

表1 连翘-阿莫西林混合药物对小鼠血液生理指标的影响

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表2 连翘-阿莫西林混合药物对小鼠血液生化指标的影响

3 讨论

从连翘-阿莫西林急性毒性试验结果可知,小鼠没有因药物致死现象,未测出半数致死量(LD50),测定最大耐受量,故短期给药安全性很高。

从亚急性毒性试验结果可知,各剂量组体重均增加,但剂量组的体重变化幅度与对照组相比较差异不显著,表明药物对小鼠的食欲及健康状况的影响并不显著。与对照组比较,血红蛋白、红细胞数、白细胞数、中性粒细胞百分数和淋巴细胞百分数同对照组的上述指标比较差异均不显著,因血液成分的检测是检验药物毒性的一个重要指标,故判断药物的毒性比较低。血液生化指标中,除了第14天的谷草转氨酶测定项的高剂量组出现了差异显著(P＜0.05)外,其他各剂量组的血液生化指标均无明显差异,因转氨酶是反映肝脏功能的重要指标,且只有肝脏受到严重伤害时谷草转氨酶才会出现偏高,这表明高剂量长期给药对肝脏的毒性较大,低、中剂量组比较安全。剂量组与对照组的器官系数分析差异不显著,对各剂量组小鼠的脏器,如心、肝、脾、肺、肾、脑的组织切片进行观察,切片显示与上表数据反映相吻合,出现的部分脏器的淤血现象是由于采集时所致,进一步证实了该药物的安全性很高。综上所述,连翘-阿莫西林复方药物的毒性很低,临床用药安全性很高。

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1997.

[2]中华人民共和国农业部.新兽药一般毒性试验技术要求[S].1991.

[3]李江珍.降脂胶囊急性毒性及致突变性研究[J].湖北中医杂志,2000,22(6):48.

[4]GB151931.食品安全性毒理学评价程序和方法[S].2003.