陶树青，王 晴，王 莹，刘贺煜，李郑武，李会成

(1.哈药集团股份有限公司，黑龙江 哈尔滨 150010;2.哈药集团技术中心，黑龙江 哈尔滨 150020)

干扰素(IFN)由具有多种功能的多肽分子组成，具有抗病毒、抗增生和免疫调节作用，在宿主抗病毒和抗肿瘤免疫防御中发挥核心作用[1－3]。胸腺素 α1(thymosin alpha 1，Tα1)是从胸腺素组分 5(TF5)中分离纯化出的由28个氨基酸残基组成的酸性多肽，能增加T细胞 IFN、白细胞介素 －2(IL－2)、白细胞介素 －3(IL－3)等淋巴因子的分泌，以及T细胞表面淋巴因子受体水平[4]。为开发IFN－Tα1融合蛋白药物，替代IFN和Tα1的联合用药，减轻患者的注射疼痛，笔者构建了重组IFN－Tα1融合蛋白，并以小鼠H22肿瘤模型的药效试验来验证其抗肿瘤作用。

1 材料与方法

1.1 动物与试药

SPF级ICR小鼠(上海西普尔必凯实验动物有限公司，合格证号为SCXK1333 2008－0016)，体重18～22 g，雌雄不限。饲养条件为开放式环境，温度18～20℃，日温差不高于3℃，相对湿度50% ～60%，噪音不高于60 dB，氨浓度不高于14 mg/m3，昼夜明暗自然交替。试验用肿瘤瘤株为H22小鼠肝癌细胞。

重组IFN－Tα1融合蛋白，由哈药集团生物工程有限公司通过基因工程技术构建重组质粒表达而得;注射用Tα1(商品名日达仙，1.6 mg/支，美国赛生药品股份有限公司，批号为PA1005);干扰素－α 2b(商品名利分能，哈药集团生物工程有限公司，批号为200805022，规格为 1 ×106IU/支)。

1.2 试验方法

将冻存的小鼠H22肝癌细胞置37℃水浴中，快速融化后以0.2 mL/只注入小鼠腹腔。10 d后，待小鼠长满腹腔积液后，将其处死，取腹腔积液，用生理盐水调至细胞浓度为1×107/mL。再将80只小鼠随机分为8组，每只小鼠右前肢腋下皮下注射0.2 mL该细胞浓度的腹腔积液，接种后4 h在注射腹腔积液处皮下给药。空白对照组(A组)皮下注射等体积生理盐水(NS)，阳性对照IFN组(B组)皮下注射IFN 9×105IU/只，阳性对照Tα1组(C组)皮下注射Tα15 μg/只，IFN － Tα1不同剂量组(D1，D2，D3，D4，D5组)分别皮下注射 IFN －Tα11 ×105，3 ×105，9 ×105，1.8 ×106，3.6 ×106IU/只。20 d后处死小鼠，称取胸腺质量和瘤重，测量瘤体积。

1.3 统计学处理

用SPSS 10.0进行多个样本均数比较的单因素方差分析。

2 结果

处死所有受试小鼠，取胸腺称重，并通过有胸腺肥大的小鼠数量进行评价。结果由表1可见，各组之间胸腺平均质量无明显差异，但胸腺肥大的小鼠数量差异明显，IFN－Tα1各剂量组胸腺肥大小鼠的数量均高于空白对照组和两阳性对照组，且随剂量几呈梯度增长，说明IFN－Tα1具有刺激胸腺增生的作用。空白对照组小鼠平均瘤重(2.80±0.68)g，高于 1 g，表明本次试验肿瘤生长良好。在IFN－Tα1的5个剂量组中，9×105IU/只剂量组(D3组)的肿瘤抑制率最高，为40.2%，其他各给药组均未超过40%。可认为IFN－Tα1对抑制肿瘤有效，且作用效果明显高于单用IFN或Tα1(P＜0.05);其肿瘤抑制率与药物浓度有一定的剂量效应，剂量越大抑制效果越好，但浓度大于9×105IU/只时，肿瘤抑制率不再继续增高，说明用药浓度为 9×105IU/只时已达最大浓度，不需再提高用药剂量。

表1 各组试验结果

3 讨论

胸腺是机体重要的中枢免疫器官，在细胞免疫系统的建立中具有重要作用[5]。正常机体在不同生长发育时期胸腺淋巴细胞是发展变化的。当荷瘤之后，胸腺便发生急性萎缩，其萎缩程度与肿瘤生长的速度呈正相关[6]。IFN α－2b和 Tα1的生物活性相辅相成，前者具有良好的抗病毒作用，后者可促进T细胞及自然杀伤细胞的分化与成熟，并可促进病毒感染细胞表达病毒抗原，有利于感染病毒的清除。经研究发现，两者联合应用对肝炎和肿瘤的临床治疗作用明显强于两药分别单独使用[7]。本研究结果表明，新开发的重组IFN－Tα1融合蛋白有明显的肿瘤抑制作用，且肿瘤抑制率与给药剂量呈正相关性。说明重组IFN－Tα1融合蛋白较IFN和Tα1有更显著的抑瘤作用，可替代IFN和Tα1的联合用药，减轻患者的注射疼痛，从而提高治疗依从性。

[1]曾洁萍，余 勤，梁茂植，等.干扰素抗肿瘤作用研究进展[J].现代预防医学，2008，35(18):3 650 －3 652.

[2]Buti M，Esteban R.Drugs in development for hepatitis B[J].Drugs，2005，65(11):1 451 － 1 460.

[3]Yoshiji H，Noguchi R，Kuriyama S，et al.Combination of interferon and angiotensin － converting enzyme inhibitor， perindopril， suppresses liver carcinogenesis and angiogenesis in mice[J].Oncology Reports，2005，13(3):491－495.

[4]蒋为薇，周 红.胸腺素α1的免疫调节活性及临床应用进展[J].免疫学杂志，2006，22(3):124 －127.

[5]虞研原，丁仁瑞.胸腺素与胸腺肽对免疫活性低下小鼠胸腺细胞增殖反应的比较研究[J].中国生化药物杂志，1989(3):18－20.

[6]虞研原，曹明富.胸腺素对荷瘤小鼠胸腺淋巴细胞有丝分裂指数影响的研究[J].杭州师范学院学报(社会科学版)，1992(3):97－100.

[7]Goldstein AL，Garaci E.Combination Therapiess[M].New York:Springer，1993:39－48.