闻娣娣， 钱晓燕， 王小平， 杨世林， 朱永明*

（1.苏州大学医学部药学院，江苏苏州 215123;2.苏州大学医学部实验中心，江苏苏州 215123）

蓖麻油为大戟科植物蓖麻Ricinus communisL.的成熟种子经榨取并精制得到的脂肪油。蓖麻油其主要成分为蓖麻油酸（顺式-12-羟基十八碳-9-烯酸，分子式C18H34O3），含量最高，其他还有棕榈酸、硬脂酸、蓖麻油酸、油酸、亚油酸等脂肪酸［1，2］。蓖麻油经济价值高，它是药用泻剂，有润肠通便之功效，用于肠燥便秘;还用作助染剂、润滑剂、增塑刑、乳化刑和制造涂料、油漆、皂类及油墨的原料［3，4］。近年来，人们采用蓖麻油煎蛋的方法取得了较好的引产效果。作为控制蓖麻油质量的标准，在《中国药典》2005版Ⅰ部中缺乏专属性较强的鉴别项目和主要成分的含量测定方法，难于对蓖麻油的质量进行有效控制。因此，针对其不足，借鉴相关资料［5-10］，我们以TLC和GC法对蓖麻油进行了研究，为蓖麻油质量控制提供依据。

1 仪器、试剂和材料

仪器:日本岛津GC-2010气相色谱仪（FID检测器）;AT-FFAP弹性石英毛细管柱（30.0 m×0.32 mm×0.5 μm，中科院兰州化学物理研究所）;市售硅胶G薄层板（批号20080622，青岛海洋化工厂）;DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）;微量天平（上海精密科学仪器有限公司）。

试剂:氢氧化钾、甲醇、氯化钠、无水硫酸钠、石油醚 （60－90℃）、乙醚、甲酸、乙酸、乙酸乙酯（AR，国药集团化学试剂有限公司）;三氟化硼乙醚溶液（化学纯，国药集团化学试剂有限公司）;正己烷（HPLC，批号08060366，国药集团化学试剂有限公司）。

材料:5个批次市售蓖麻油样品（批号080503、080505、080512、080601、20080505）;蓖麻油酸甲酯标准品（纯度99.0%，批号066K1223，美国SIGMA公司提供）。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

取蓖麻油约40 mg置于50 mL的圆底烧瓶中，加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液5 mL，在60℃水浴中搅拌回流30 min，至油滴全部消失，皂化完全。再加入4 mL三氟化硼-甲醇（1∶3，V/V）于圆底烧瓶中，搅拌回流5 min，充分甲酯化反应;冷却到室温后，精密加入正己烷5 mL，充分振摇，再加入饱和氯化钠溶液适量，待溶液分层后取上清液（正己烷层）于10 mL具塞试管中，加适量无水硫酸钠除去痕量的水，此正己烷溶液作为供试品溶液。另取蓖麻油酸甲酯对照品，加正己烷制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2005年Ⅰ版附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以A1石油醚（60－90℃）-乙醚-甲酸（110∶45∶5）和A2正己烷-乙醚-乙酸（100∶35∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，碘显色。供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色斑点。结果见图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

图1 蓖麻油中蓖麻油酸的薄层鉴别

岛津 GC-2010气相色谱仪，GC-Solution工作站;色谱柱:AT-FFAP弹性石英毛细管柱（30.0 m×0.32 mm×0.5 μm）;柱温为恒温220℃，保持30 min;进样口（SPL）温度为260℃，检测器（FID）温度为280℃;载气为高纯N2，纯度≥99.999%，流量为2.50 mL/min;氢气（辅助气）:40.0 mL/min;空气（助燃气）:400.0 mL/min;分流比为10∶1;进样量1 μL。在上述色谱条件下，蓖麻油酸甲酯得到很好的分离，空白溶液、蓖麻油酸甲酯对照品及蓖麻油供试品的图谱见图2。

图2 空白溶液（A）、蓖麻油酸甲酯对照品（B）和蓖麻油供试品（C）的GC图

2.2.2 对照品溶液的制备

精密吸取蓖麻油酸甲酯对照品适量，以正己烷溶解成0.658 48 mg/mL溶液，密封，置4℃冰箱保存，备用。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密称取蓖麻油约40 mg置于50 mL的圆底烧瓶中，加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液5 mL，在60℃水浴中搅拌回流30 min，至油滴全部消失，皂化完全。再加入4 mL三氟化硼-甲醇（1∶3，V/V）于圆底烧瓶中，搅拌回流5 min，充分甲酯化反应;冷却到室温后，精密加入正己烷5 mL，充分振摇，再加入饱和氯化钠溶液适量，待溶液分层后取上清液（正己烷层）于10 mL具塞试管中，再加适量无水硫酸钠除去痕量的水，精密量取上述溶液1 mL，置10 mL量瓶中，用正己烷稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.4 线性关系考察

精密吸取蓖麻油酸甲酯对照品适量，按2.2.2项下方法配制成含蓖麻油酸甲酯0.082 31、0.164 62、0.329 24、0.658 48、0.823 1、1.316 96 mg/mL的6种浓度溶液。照《中国药典》2005版Ⅰ部附录ⅥE气相色谱法试验，分别吸取1 μL进样，按2.2.1项方法测定，以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，得回归方程:Y=1 465 432.83X－36 249.5，r=0.999 7。结果表明，在浓度0.082 31～1.316 96 mg/mL范围内，线性关系良好。

2.2.5 精密度试验

精密量取浓度为0.164 62、0.658 48、1.316 96 mg/mL的蓖麻油酸甲酯对照品溶液，每个浓度3份，按2.2.1项下方法，精密吸取1 μL进样，每份重复进针3次，经计算高、中、低浓度峰面积RSD结果均较好，平均峰面积RSD为0.59%，表明精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

取蓖麻酸样品（批号080505），按2.2.3项下方法制备供试品溶液，配置成浓度为0.950 4 mg/mL的供试液，精密吸取1 μL，按2.2.1项下方法测定，分别于0、1、2、4、6、8 h 进样，峰面积分别为802 765、811 352、809 121、816 760、824 297、826 947、805 906，得到其峰面积RSD=1.12%，结果表明在8 h内供试品溶液呈稳定状态。

2.2.7 重复性试验

精密称取同一批蓖麻油样品5份（批号080505），按2.2.3项下方法制备得到供试品溶液，精密吸取1 μL，按2.2.1项下方法测定，重复进样5次，峰 面 积 分 别 为 104 729、102 350、104 719、104 073、102 632，计算峰面积RSD为1.1%，结果表明该方法具有良好的重复性。

2.2.8 回收率试验

采用加样回收法，取080505批次的蓖麻酸 （含蓖麻油酸61.43%）约20 mg，共6份，精密称定，精密量取浓度为1.646 2 mg/mL的蓖麻油酸甲酯对照品溶液10 mL，6份，分别加入上述6份样品中，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，精密吸取此溶液1 μL进样，按2.2.1项下方法测定，计算，得蓖麻油酸甲酯的平均回收率为97.24%，RSD为1.24%（n=6），表明该测定方法可靠。结果见表1。

表1 蓖麻油酸加样回收率试验结果（n=6）Tab.1 The recovery rate of ricinoleic acid（n=6）

2.2.9 样品含量测定

取5个批次的蓖麻酸样品（批号 080503、080505、080512、080601、20080505），按2.2.3 项下方法制备供试品溶液，每批平行做三份，按照上述2.2.1项气相色谱条件进行测定，取1 μL供试液注入气相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算蓖麻酸中蓖麻油酸的含量，结果见表2。

表2 蓖麻酸中蓖麻油酸的含量（n=3）Tab.2 The ricinoleic acid contents in Castor Oil（n=3）

3 讨论

3.1 本试验所建立的薄层鉴别法简便、准确、重现性好。TLC法考察了两种展开剂石油醚（60～90℃）-乙醚-甲酸（110 ∶45 ∶5）和正己烷-乙醚-乙酸（100∶35∶3）均得到了理想的分离效果;通过碘、磷钼酸、硫酸乙醇三种显色剂比较，碘显色简便，不需要加热处理，并且斑点清晰，分离度好。

3.2 文中采用固定柱温220℃，系统分离度好，基线平稳，保留时间也缩短为19 min左右。

3.3 麻油酸的含量计算 蓖麻油中的蓖麻油酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸等脂肪酸一般以脂肪酸甘三酯形式存在，本试验将各脂肪酸甘三酯经皂化、甲酯化后测定其衍生物脂肪酸甲酯的含量。蓖麻油酸的分子量298;蓖麻油酸甲酯的分子量为312。故计算样品中蓖麻油酸的含量时需乘以系数0.955（298/312）。

3.4 通过GC-MS联用技术，经质谱库检索结合人工谱图识别鉴定出样品中其它峰从左到右依次为棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚麻酸甲酯、花生酸甲酯、二十碳一烯酸甲酯。按照面积归一化法计算，蓖麻油的主要成分为蓖麻油酸，含量达80%以上，占绝大部分，作为蓖麻油质量标准的依据;其它脂肪酸不到20%，其中油酸、亚油酸含量变化范围分别为3.55% ～4.57%和4.70% ～5.46%;少量的棕榈酸、硬脂酸和脂酸含量变化范围分别为0.98% ～1.24%和0.92% ～1.12%;极少量的花生酸、二十烷一烯酸含量变化范围分别为0.40% ～0.53%和0.21% ～0.43%。

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