刘广岚 周士福 孟 东 贾泽斌

乳腺癌是严重威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一。近年来发病率有明显的上升趋势，肿瘤的发生、发展是多因素、多步骤的复杂过程，其预后是与多种指标有关，而研究这些指标在肿瘤细胞中的表达，有助于判断乳癌的预后和指导治疗。我们通过检测ER、PR、cerbB-2和Ki-67在乳腺癌组织的表达，以探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取江苏省无锡市第四人民医院2008年6月～2009年12月，行根治术的乳腺癌组织标本107例。患者均为女性，年龄23～82岁，中位年龄53岁。其中导管内癌15例，浸润性导管癌82例，乳腺鳞癌10例。腋窝淋巴结转移61例，无淋巴结转移46例。TNM分期:0～Ⅰ期36例，Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期25例。均经两位以上病理医师分别阅片，取得一致意见后重新认定。所有标本均经4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别行HE染色和免疫组化检测。

1.2 试剂与方法

ER、PR单克隆抗体及S-P免疫组化相关试剂盒均购自北京中山金桥生物技术有限公司。采用S-P二步法免疫组化染色。切片厚约4μm，脱蜡，梯度酒精水化，高压锅热处理5～8 min进行抗原修复，PBS冲洗，3%过氧化氢阻断过氧化物酶，马血清封闭，加用一抗，4℃冰箱孵育过夜，加生物素标记的二抗，室温下30 min后PBS充分洗涤，加入S-P复合物孵育20～30 min;PBS洗3次，每次2 min;DAB显色，苏木精复染。自来水冲洗返蓝，梯度酒精脱水，中性树胶封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性片作为阳性对照。

1.3 结果判定

免疫组化阳性判断标准，ER、PR、Ki-67阳性细胞:细胞核有棕黄色颗粒，凡5个高倍视野阳性细胞数＞10%为阳性，否则为阴性。CerbB-2阳性为胞膜及胞质着色:阳性细胞按无着色、阳性细胞数＜1/3、1/3～2/3和 ＞2/3分别记为0、1、2、3分;阳性细胞着色强度按无着色、黄色、棕黄色和棕褐色分别记为0、1、2、3分。以两项打分之和判断其结果，≥3分为阳性。临床评估指标包括肿瘤病理类型和大小，是否有腋窝淋巴结转移及累及数目和大小。组织学分级按照WHO乳腺癌的组织学分类(2003)，根据腺管形成、细胞分化及核分裂等3项9分的评定标准，进行组织学分级，分为Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级。乳腺癌病理分期标准为2002年第六版AJCC分期标准。结果判断均由两名高年资病理科医生统一核准。

1.4 统计学分析

应用SPSS 13.0统计软件分析，样本率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman检验。

2 结果

2.1 ER、PR、cerbB-2和 Ki-67表达与乳腺癌组织临床病理特征的关系

ER、PR、cerbB-2和 Ki-67阳性表达率分别为56.1%、82.2%、71.0%和 67.3%;ER、PR 阳性表达与乳腺癌患者年龄、病理组织学类型、肿瘤大小无相关性，与淋巴结转移和临床分期相关。cerbB-2和Ki-67与有无淋巴结转移和肿瘤pTNM分期显著相关(P均＜0.05)，见表1 和表2。

2.2 ER、PR和Ki-67与cerbB-2表达的关系

ER与PR表达呈正相关，P=0.000;与Ki-67表达呈负相关，P=0.000。PR与 cerbB-2、Ki-67表达呈负相关，P 均 ＜0.05。

表1 ER、PR和cerbB-2、Ki-67表达与乳腺癌临床病理特征的关系(例，%)

表2 ER、PR和cerbB-2、Ki-67表达与乳腺癌临床病理特征的关系(例、%)

3 讨论

乳腺癌是1种多因素疾病，在其发生、发展过程中伴随多种基因和蛋白的改变。相关研究［1，2］表明，乳腺癌与生物分子标志物 ER、PR、CerbB-2等有相关性。这些生物分子标志物在乳腺癌的发生发展中发挥作用，对判断肿瘤的预后及指导内分泌治疗有重要的临床意义［1，2］。通过对这些生物标志物的研究，可以更深入地认识乳腺癌的生物学行为。这些生物学指标如ER、PR、CerbB-2、Ki-67等阳性表达率文献报道不一［3］。目前将乳腺癌的生长和增殖受性激素调控的，称激素依赖性乳腺癌即ER(+)、PR(+);如果癌细胞丢失了受体，该乳腺癌的生长和增殖不再受性激素调控，则称非激素依赖性乳腺癌即 ER(－)、PR(－)［4］。ER作为1种蛋白质对雌激素有高度亲和力。ER可以反映乳腺癌细胞对雌激素的敏感性，ER阳性乳腺癌分化相对较高，预后好，对内分泌治疗敏感。雌激素与受体结合诱导产生了PR，因此，ER、PR可作为临床常用的内分泌治疗的指标。较多的临床报道显示乳腺癌内分泌治疗的有效率仅为20% ～30% ，很少能达到完全缓解(CR)。进一步研究证实，受体状况不明的乳腺癌患者，其内分泌治疗的有效率仅为30%;ER阳性患者有效率达到50% ～60%，而ER阴性患者的有效率为5% ～8%;ER、PR均为阳性者其内分泌治疗的有效率为70%［5］。本组107例乳腺癌患者的激素受体测定结果，ER阳性表达率56.1%、PR阳性表达率82.2%，经统计学分析显示ER、PR阳性表达与乳腺癌患者年龄、病理组织学类型、肿瘤大小无相关性，而两者阳性表达率与肿瘤淋巴结转移和临床分期相关。另外，相关分析显示，ER、PR与cerbB-2、Ki-67是呈负相关的。

cerbB-2基因作为乳腺癌常用基因标志之一，是1种跨膜糖蛋白，其分子量是185 kD［6］，该蛋白与表皮生长因子受体(EGFR)具有高度的同源性，故又称为人类表皮生长因子相关基因［7］，cerbB-2过表达会激活癌基因，癌变细胞内癌基因数量、性质从而发生改变。体内外研究显示cerbB-2过度表达可促进肿瘤发生［8，9］。有研究表明，cerbB-2高表达提示乳腺癌细胞的高转移潜能，表现出较强的侵袭性临床病理特征，cerbB-2也可使细胞整合素和黏合素功能异常，增强癌细胞转移能力。目前cerbB-2已被公认为是与乳腺癌发生发展密切相关的原癌基因，参与调控细胞的生长、增殖及分化，其产物过度表达常提示恶性程度高、预后差。Slamon等认为乳腺癌患者cerbB-2阳性细胞越多，染色越强，死亡、复发和转移的几率也越高。本实验研究显示，cerbB-2在乳腺癌组织中阳性表达率为71%，其阳性表达与腋窝淋巴结转移、临床病理分期显著相关，相关分析显示，cerbB-2阳性与腋窝淋巴结转移、临床病理分期呈显著正相关，可以说明cerbB-2与淋巴结转移相关，其阳性表达率越高者，淋巴结转移率越高，这与Learn报道［10］的相似。cerbB-2与乳腺癌患者年龄、肿块大小、组织学分级无相关性。

Ki-67是目前较为肯定的核增殖标记物，它开始表达于细胞周期的G1期，在S期及G2期表达增强，至M期达高峰，在细胞分裂晚期很快消失。由于其半衰期短，故已成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标。研究表明Ki-67表达能可靠而迅速地反映恶性肿瘤增殖率，与多种恶性肿瘤的发展、转移及预后有关［11，12］。本组结果示，Ki-67与乳腺癌患者年龄、肿块大小、组织学分级无相关性，而与肿瘤病理分期、淋巴结转移呈显著正相关。相关研究［13］对68项研究进行meta分析，发现早期乳腺癌淋巴结阳性者Ki-67高表达比例增高，预后较差，提示Ki-67有促使肿瘤向淋巴结转移的能力。Ki-67增殖指数高低与多种肿瘤的分化程度、浸润、转移及预后密切相关。

综上所述，cerbB-2、Ki-67可以表达于乳腺癌组织中，而表达强度随乳腺癌恶性程度的增高而增强，ER、PR和cerbB-2、Ki-67的联合检测，可能有助于客观评估乳腺癌的生物学行为，用来指导临床用药和预测预后。因此，在临床工作中，对于乳腺癌患者要常规检测雌、孕激素受体、cerbB-2、Ki-67表达水平。

［1］ Setiawan VW，Monroe KR，Wilkens L，et al.Breast Cancer risk factors defined by estrogen and progesteronereceptor status:themultiethnic cohort study〔J〕.Am J Epidemiol，2009，169:1251.

［2］ Demonty G，Bernard-Marty C，Puglisi F，et al.Progress and new standards of care in themanagement of HER-2 positive breast cancer〔J〕.Eur JCancer，2007，43:497.

［3］ Walker RA.Immunohistochemicalmarkers as predictive tools for breast cancer〔J〕.JClin Pathol，2007，9:231.

［4］ 季晨阳.乳腺癌肿瘤标志物的临床应用和研究进展〔J〕.实用医学杂志，2000，16(7):304.

［5］ 周道平，王 彬，邢晓皖.Ki-67、p53蛋白在乳腺癌组织的表达及临床意义〔J〕.实用肿瘤杂志，2009，24(2):136.

［6］ 裴 劼，翟笃明.104例乳腺癌cerbB-2、P53、ER、PR的表达及其临床意义〔J〕.中国实验诊断学，2007，11(10):1385.

［7］ Michael PD.Clinical significance of HER-2/neu overexpression:Part I〔J〕.Principles ＆ Practice of Oncology，1999，13:1.

［8］ 李宝江，朱志华，王军业，等.Ki-67、P53、VEGF和cerbB-2在乳腺癌组织中表达的相关性研究及其临床意义〔J〕.癌症，2004，23(10):1176.

［9］ 陈 军，王懿龄.cerbB-2、P53、nm23在乳腺癌中表达的临床意义〔J〕.中国实验诊断学，2007，11(1):132.

［10］ learn PA，Yeh IT，Mc NuttM，et a1.HER-2/neu expression as a predictor of response to neoadjuvant docetaxel in patientswith operable breast carcinoma〔J〕.Cancer，2005，103(11):2252.

［11］ Liu M，Lawson G，Delos M，et a1.Predictive value of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki-67 in biopsies ofhead and neck carcinomas for identify lymph node metastasis:comparison with clinical and radiologic examinations〔J〕.Head Neck，2003，25(4):280.

［12］ Tut VM，Braithwaite AL，Angus B，et a1.Cyclin D expression in transitional cell carlinoma of the bladder，correlation with p53，waft，PRb and Ki-67〔J〕.Br JCancer，2001，84(2):270.

［13］ De Azambuja E，Cardoso F，de Castro G J r，et al.Ki-67 as prognosticmarker in early breast cancer:a meta-analysis of published studies involving 12，155 patients〔J〕.Br JCancer，2007，96(10):1504.