王运中，陶云珍，吾金彪，丁云芳

(苏州大学附属儿童医院检验科，江苏 苏州 215003)

流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae，HI)是儿童呼吸道感染的重要致病菌之一，还可引起脑膜炎、败血症、心包炎、蜂窝组织炎等侵袭性感染。随着抗生素在临床上的广泛使用，HI对β-内酰胺类抗生素耐药以及多重耐药株的出现，给临床治疗带来了一定的困难。为了解本地区HI的流行趋势及其耐药情况，对2007年1月～2009年12月入住我院的急性呼吸道感染患儿的HI分布及其耐药性进行研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 .1菌株来源 2007.1～2009.12入住呼吸科急性呼吸道感染患儿，采用无菌负压吸痰器采集标本，经培养分离而得。

1.1 .2 HI选择性培养基 以哥伦比亚琼脂(OXOID公司产品)为基础制备巧克力平板，浇注平板前(约50℃)加入万古霉素(50mg/l)。

1.1 .3 HI药敏培养基及抗生素纸片 采用HI专用药敏培养基HTM(基础琼脂及添加剂SR158E)，抗生素纸片均为OXOID公司产品，分别为：复方新诺明(SMZ/TMP)、阿奇霉素(AZM)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林/舒巴坦(SAM)、环丙沙星(CIP)、氯霉素(CL)、美洛培南(MEM)、四环素(TE)、头孢呋辛(CXM)、头孢克洛(CEC)、头孢曲松(CRO)、头孢他啶(CAZ)。 质控菌株为HIATCC49247。

1.1 .4 Nitrocefin纸片为美国BBL公司产品。

1.1 .5 Vitek-NHI试卡：购自上海祥和公司。

1.2 方法

1.2 .1菌株分离及鉴定 将标本接种于血平板和巧克力平板， 置35℃、5%CO2环境下培养18～24h，如血平板上不生长，在巧克力平板上生长，透明或半透明、湿润、中等大小的菌落，染色镜检为革兰阴性短小杆菌，则考虑为嗜血杆菌，进一步做因子需求试验，可疑者用Vitek-NHI试卡鉴定证实。

1.2 .2β-内酰胺酶测定 用头孢硝噻酚(Nitrocefin)显色反应法测定β-内酰胺酶。

1.2 .3药敏试验 采用K-B法，结果按CLSI2009标准判读。

2 结果

2.1 HI感染的阳性率 共收集到呼吸科急性呼吸道感染患者痰标本5670份，共检出HI191株，总阳性率3.4%，其中2007～2009年阳性率分别为3.3%(55/1693)、2.6%(50/1957)、4.3%(86/2020)。

2.2 HI感染的年龄分布 共检出HI感染191例(男 122例， 女69例)， 其中＜3岁152例，3～5岁30例，＞5岁9例，＜3岁年龄组占总阳性例数79.6%。

2.3 HI感染的季节分布见表1。

表1 HI感染的季节分布

2.4 β-内酰胺酶检出分布 191株HI检出β-内酰胺酶阳性65株，总阳性率34.0%，其中07～09年产 酶 率 分 别 为 34.6%(19/55)、34.0%(17/50)、33.7%(29/86)。

2.5 HI对常用抗生素的耐药情况见表2。

表2 HI对常用抗生素的耐药率(%)

2.6 HI对常用抗生素的多重耐药情况 检出多重耐药株34株，多重耐药率为17.8%。具体耐药模式见表3。

表3 34株多重耐药HI对常用抗生素的多重耐药模式

3 讨论

HI是小儿急性呼吸道感染的主要病原菌之一，由于其常寄居于人的上呼吸道，可通过呼吸道在人与人之间传播，因此也是我国儿童社区获得性肺炎的重要病原菌之一。在本研究中，连续3年HI的总分离率为3.4%，07～09年分别为3.3%、2.6%、4.3%，高于钟天鹰等[1]报道2.5%的检出率，低于杨亚静等[2]报道11.9%的分离率，但与王传清等[3]报道呼吸道感染HI4.5%的阳性率较接近。HI引起的儿童呼吸道感染主要发生于3岁以下年龄组，占总阳性数的79.6%，这可能由于3岁以下婴幼儿的免疫系统发育尚未健全，缺乏对HI的抵抗力，使得HI易于在呼吸道定植有关。从季节分布看，HI引起的呼吸道感染主要发生于冬春季，占总阳性数的63.9%，以春季最高，其次是冬季、夏季，秋季最低。这主要与寒冷季节儿童局部呼吸道粘膜防御下降以及室内通风不良等因素有关。

随着抗生素在临床上的广泛使用，全球HI的耐药性也不断增加。氨苄西林作为治疗HI感染的一线用药，其耐药形势不容乐观，自从1972年首次在欧洲报道耐药以来，世界各国相继有其耐药的报道，在我国不同地区报道有所差别，在3.2～50.0%之间[4]。本研究显示，2007～2009年，氨苄西林耐药率在33.7～41.8%，明显高于本地区2001～2003年15.6%的研究结果[4]，亦高于 广州地区30.0%与欧洲16.8%的结果[5，6]。从其耐药机制看，HI对氨苄西林耐药主要是产生β-内酰胺酶，且主要以质粒介导的TEM型为主[7]，本研究未发现β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药株。三年中HI的总产酶率为34.0%，高于本地区2001～2003年16.3%的结果[4]。

药敏结果显示，HI对SMZ/TMP耐药最为严重，其次是氨苄西林、四环素、头孢克洛、氯霉素，而对其他抗生素的耐药率均小于5%，但我们发现阿奇霉素耐药率有逐年增高趋势，其耐药性值得关注。在本研究中共检出HI多重耐药株34株，多重耐药率为17.8%，且主要为氨苄西林合并其他抗生素耐药，这可能与质粒介导的β-内酰胺酶耐药基因同时又携带其他抗生素的耐药基因有关。从其耐药模式看，主要以AMP+SMZ/TMP+CL+TE耐药为主，其次是AMP+SMZ/TMP+CEC和AMP+SMZ/TMP+CEC+TE耐药，而其他几种耐药模式较少，其具体耐药机制有待进一步探讨。

[1]钟天鹰,迟富丽,王惠云,等.807株流感嗜血杆菌的血清分型及耐药性的研究[J].中国生化药物杂志,2008,29(3):199-200.

[2]杨亚静,黄 诚,王 莉,等.儿童下呼吸道感染1523例细菌病原分析[J].四川医学,2007,28(1):105-106.

[3]王传清,王艺,王晓红,等.2000至2006年复旦大学附属儿科医院呼吸道感染患儿4种常见细菌分离率及耐药趋势[J].中国循证儿科杂志,2007,2(3):197-204.

[4]陶云珍,诸丽娟,闵兰芳,等.儿童感染流感嗜血杆菌的耐药性分析[J].中国抗感染化疗杂志,2004,4(6):337-339.

[5]Fluit AC,Florijn A,Verhoef J,et al.Susceptibility of European beta-lactamase-positive and-negative Haemophilus influenzae isolates from the periods 1997/1998 and 2002/2003[J].Antimicrob chemother,2005,56(1):133-138.

[6]黄旭强,肖作源,邓 力,等.2003-2004年广州地区儿童肺炎链球菌、流感嗜血杆菌抗生素敏感性调查[J].中华儿科杂志,2006,44(6):441-444.

[7]Karlowsky JA,Verma G,Zhanel GG,et al.Presence of ROB-1 beta-lactamase correlates with Cefalor resistance among recent isolates of Haemophilus influenzae[J].Antimicrob chemother,2000,45:871-875.