苏永恒,张榕杰,冶保献

1)河南省疾病预防控制中心理化实验室郑州 450016 2)郑州大学化学系郑州 450001△男,1979年12月生,本科,主管技师,研究方向:卫生检验,E-mail:uplc@hotmail.com

多菌灵,化学名称为2-(甲氧基甲酰氨基)-苯并咪唑,属于苯并咪唑类药物[1],广泛应用于蔬菜、水果等农作物的病害防治工作。多菌灵化学性质稳定,能被植物的种子、根和叶吸收,残效期较长,对人、畜均有一定毒性,可引起抽搐、精神恍惚、恶心、呕吐、胸闷和头晕等中毒症状[2],因此研究测定多菌灵残留的方法很有必要。目前对于多菌灵的提取富集方法主要有:液液萃取法[3]、固相萃取法[4-5]和二氧化碳超临界萃取法[6]等;测定方法主要有分光光度法[7]、毛细管电泳法[4]、气相色谱法[8]、液相色谱法[9]及液相色谱-质谱法[10-11]等,而对于采用固相萃取前处理方法以及液相色谱-质谱/质谱测定相结合的方法尚未见报道。作者根据多菌灵的性质,建立了一种简单、快速和灵敏的测定蔬菜、水果中残留多菌灵的液相色谱-质谱/质谱分析方法,并应用于实际样品中多菌灵残留量的测定,取得了满意的结果。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂 ACQUITY UPLC-Quattro Premier XE超高效液相色谱-质谱/质谱仪(UPLC-MS/MS,美国Waters公司),配有电喷雾离子源(ESI);固相萃取装置,离心机等。Oasis HLB固相萃取柱(美国Waters公司),用前依次用3 m L甲醇和3m L水进行活化。多菌灵标准品(德国Dr.Ehrenstorfer GmbH),甲醇、乙腈均为色谱纯试剂(美国Fisher公司)。

1.2 前处理方法 取市售的茄子、苹果的可食部分粉碎,匀浆,加入甲醇振荡提取,离心后,取上清液通过经活化过的Oasis HLB固相萃取柱富集净化后,先用3mL水洗,弃去洗脱液,再用3 mL甲醇洗脱,收集洗脱液,滤膜过滤后上UPLC-MS/MS仪测定。1.3 UPLC-MS/MS测定条件 色谱条件:色谱柱为Waters UPLCBEH(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为水:乙腈(体积比为60:40),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样体积为5.0μL。质谱条件:ESI,正离子电离模式电离。质谱扫描方式:多反应离子监测(MRM)。毛细管电压为3.0 kV,离子源温度为 120℃,脱溶剂气温度为 350℃,脱溶剂气流量为600 L/h,碰撞气流量为0.25 mL/m in。

2 结果与讨论

2.1 固相萃取柱的选择 通过加标富集的方法测试J.T.Baker C18(500 mg,6 m L)、Oasis HLB(60 mg,3 mL)、Cleanert PEP(60mg,3m L)、ProElut PXC (60mg,3m L)和OasisMCX(60mg,3mL)等几种固相萃取柱的净化富集效果。在弱酸性条件下,C18柱的回收率为67%～78%,PXC、MCX和PEP的回收率达到80%～96%,而Oasis HLB对多菌灵的回收率达到 95%～102%。多菌灵为弱碱性化合物,弱酸性条件下性质稳定,因此选用Oasis HLB固相萃取柱作为测定多菌灵时的前处理固相萃取柱。

2.2 色谱条件的优化

2.2.1 色谱柱的选择 选择包括普通C18、阳离子交换十八烷基硅胶柱(1:4)和Waters UPLC BEH色谱柱在内的几种常用的商品色谱柱来进行筛选,实验结果发现 C18柱分离多菌灵时出现明显托尾现象,而用阳离子交换十八烷基硅胶柱(1:4)和Waters UPLC BEH时能得到最为理想的峰型,其中以Waters UPLC BEH C18色谱柱的响应值为最高,故最终选择Waters UPLC BEH色谱柱来分离多菌灵。

2.2.2 流动相的选择 对常用的挥发盐水溶液-乙腈、水-乙腈流动相体系进行了比较,结果发现 2种流动性体系都能对多菌灵进行有效地分离,而采用水-乙腈做流动相时多菌灵的响应值更高。这可能是由于质谱采用的 ESI电离源为正离子电离模式,多菌灵在乙腈-水体系中比在缓冲盐中更容易电离,有利于正离子的形成。

2.3 质谱条件的优化 采用流动注射的方式,分别对毛细管电压、源温度、脱溶剂气温度、脱溶剂气流量、锥孔电压以及碰撞能量等质谱参数进行了优化。多菌灵测定质谱参数见表 1,多菌灵子离子质谱图和多菌灵空白样品加标总离子图见图 1、2。

表1 多菌灵MRM模式测定质谱参数

2.4 方法的线性和检出限 称取10.0 mg多菌灵标准品,用甲醇溶解于10.0m L容量瓶中,得到1.0 g/L的标准储备液,使用时用甲醇稀释成 0.005～1.000 mg/L的标准工作液,按标准溶液质量浓度由低到高注射进入液相色谱-质谱/质谱测定,以质量浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线,结果显示,峰面积与多菌灵质量浓度在0.005～1.000mg/L范围具有良好的线性关系,仪器检测限为1.0μg/L,线性回归方程为Y=668 971X-461.701,R2=0.999 2。

2.5 方法的准确度和精密度 以回收实验的加标回收率表示准确度,相对标准偏差(RSD)表示方法的精密度。根据上述方法对 3种基质(茄子、苹果、桔子)的空白阴性样品分别进行3个水平(20、50及 100μg/kg)的加标实验,每个水平设6个平行,结果见表2。

表2 蔬菜、水果中多菌灵加标回收率和RSD(n=6)

2.6 实际样品测定 根据上述方法,随即抽取市场上的茄子和苹果 2种样品 12份进行测定,具体测定结果见表3。

表3 茄子和苹果实际样品中多菌灵测定结果 μg/kg

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