徐 凤, 陶文沂＊,2

(1.江南大学生物工程学院,江苏无锡214122;2.江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122)

粘细菌是一类具有复杂多细胞形态的革兰氏阴性菌,它能产生丰富的活性次级代谢物,这些物质不但结构新颖,而且具有其他微生物的代谢物所不具备的活性作用机制[1],尤其是其中的纤维堆囊菌属活性物质的产率更高,达96%。1987年,在纤维堆囊菌中发现与紫杉醇具有相同作用机制的epothilones之后,它更激起人们广泛的研究兴趣[2]。AHB103-1也是一种纤维堆囊菌,作者重点研究了它发酵生产抗癌活性物质的工艺条件和培养基组成,并对它的形态和理化特征也进行了初步的研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌株 纤维堆囊菌AHB103-1,作者所在实验室保藏菌株。

1.1.2 培养基

1)种子培养基[3-4](组分 g/L):土豆淀粉10.0,葡萄糖2.0,酵母粉2.0,脱脂奶粉4.0。

2)发酵培养基:氮源优化培养基(组分g/L):玉米淀粉12.0,各种氮源6.0,甘油5.0,XAD-16大孔树脂20.0。

3)碳源优化培养基(组分 g/L):各种碳源12.0,酵母粉 6.0,甘油 5.0,XAD-16大孔树脂20.0。

4)碳氮比优化培养基(组分 g/L):玉米淀粉12.0,酵母粉 7 个水平(2、4、6、8、10、12、15),甘油5.0,XAD-16大孔树脂20.0。

5)α-CEV Y/4 平皿培养基(组分 g/L):α-纤维素 1.0,安琪活性干酵母 2.5,CaCl21.0,琼脂15.0。

6)各种碳源平皿培养基(组分g/L):碳源(蔗糖、麦芽糖、木糖、纤维二糖、半乳糖、马铃薯淀粉、山梨糖、果糖、α-纤维素、甘露糖)10.0,KNO35.0,琼脂15.0。

7)葡萄糖平皿培养基(组分g/L):葡萄糖分别为 10.0、8.0、6.0、4.0、2.0、1.0,KNO35.0,琼脂15.0。

8)硫铵平皿培养基(组分 g/L):马铃薯淀粉10.0,硫铵 5.0,琼脂 15.0。

除α-CEV Y/4平皿培养基外,以上所有培养基均额外添加以下无机物质(组分g/L):CaCl21.0,MgSO4·7H2O 1.0,Fe(Ⅲ)-Na-EDTA 0.008。

以上各种培养基均用10%KOH调p H至7.2,121℃灭菌20 min。

1.1.3 活性物质筛选培养基 10%小牛血清,90%RPMI1640,2 mmol/L L-谷氨酰胺,100 U青霉素和100 U的链霉素。……