江建铭,徐建中,任江剑

(浙江省中药研究所,浙江杭州 310023)

夏枯草 (Prunella vulgarisL.)为唇形科夏枯草属多年生草本植物,以干燥果穗入药,其性寒、味苦辛,具有清肝明目、消肿散结等功效,主治头痛眩晕、目赤肿痛、瘰疬、瘿瘤、乳痈等症[1],临床应用广泛,已被我国 2005年版药典收载。

中药材适宜采收期的确定首先要考虑其有效成分含量高低,其次要兼顾产量因素,但对夏枯草等以有性繁殖器官作为药材商品、生产上又以种子繁育的这类中药材而言,确定适宜采收期还要考虑其对种子质量的影响,以利提供优质良种和保障翌年生产的高产、稳产。目前,对夏枯草适宜采收期的研究报道较少,罗目和[2]等开展了试验,但采收期的确定以夏枯草成熟阶段相隔相同的天数 (10 d)为指标。由于夏枯草果穗成熟进程受天气影响较大,相同的时间在不同产地与年份之间果穗成熟进程完全不同,因此,以相隔天数为指标对生产上的指导意义不大。本试验以夏枯草果穗成熟由下而上逐渐变黄这一发育特性为依据,以果穗发黄 (成熟)程度为指标,考查不同采收期对果穗熊果酸含量及种子质量的影响,以确定最佳的采收期。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料来自于种植条件相同的试验基地。果穗按基部初见黄色、果穗发黄≤1/4、2/4、3/4,全黄及全黄后 7 d分别采摘,采后及时晒干、脱粒。将果穗与种子分别放置于不同的干燥器中备用,各 6份试验样品。试验材料经浙江省中药研究所教授级高级工程师俞旭平鉴定为唇形科 (Labiatae)夏枯草属(Prunella)植物夏枯草的干燥果穗和种子。

1.2 方法

1.2.1 采收期对果穗质量的影响

本试验以 2005版药典 (一部)所列的夏枯草果穗质量指标成分熊果酸 (C30H48O3)为评价果穗质量优劣的考查对象[3]。熊果酸含量测定采用高效液相色谱仪法,高效液相色谱仪为安捷伦 1100,具体方法如下:

(1)色谱条件:色谱柱:迪马公司 Diamonsil C18分析柱 (4.6 mm ×250 mm ×5μm);流动相:0.04 mol·L-1磷酸二氢钠(用5%磷酸调节pH至2.80):乙腈 (体积比为 20∶80);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:215 nm;柱温:35℃;进样量:20μL。

(2)对照品标准溶液的制备:精密称取熊果酸标准样品 (购于中国药品生物检定所,批号为110742-200516)2.57 mg,置于 25 mL容量瓶中,甲醇溶解并稀释至刻度,得含熊果酸 0.102 8 mg·mL-1的对照品标准溶液。

(3)标准曲线绘制:精密吸取熊果酸对照品溶液 2、5、10、15、20、25、30、40μL,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵座标,熊果酸进样量为横座标,绘制标准曲线,并计算回归方程:Y=542.626 3X-7.214 3相关系数 r=0.999 98,表明熊果酸在0.2μg～40μg范围内具有良好的线性关系。

(4)精密度试验:精密吸取熊果酸对照品溶液,重复进样 5次,每次 20μL,考察测定的精密度,熊果酸峰面积积分值分别为 1 096.6、1 092.8、1 089.9、1 107.5、1 100.1,平均值为 1 097.38,相对标准偏差为 0.62%,表明本方法精密度较高。

(5)稳定性试验:取同一标准品溶液,室温下放置,分别在 0 h、24 h进样 20μL测定,熊果酸峰面积积分平均值分别为 1 095.9、1 097.4,表明样品溶液在室温下比较稳定。

(6)重复性试验:取同一批号的夏枯草 6份,依上述条件测定含量,样品熊果酸含量分别为2.519 7%、2.489 6%、2.704 7%、2.659 5%、2.667 8%、2.613 2%,相对标准偏差为 3.32%,表明本方法的重复性较好。

(7)加样回收率试验:取已知含量的夏枯草样品,分别添加熊果酸对照品后,同上述条件做 5次平行试验,测定结果详见表1。

由表1可知熊果酸回收率 RSD为 2.14%,表明本方法回收性良好。

表1 加样回收率试验测定结果

(8)供试品溶液的制备:精密称取干燥恒重的夏枯草样品粉末(过二号筛)2 g,置索氏提取器中,加入乙醚 50 mL,浸泡过夜,加热回流 6 h,蒸干溶剂,残渣用石油醚 (60～90℃)浸泡 2次,每次15 mL,每次 2 min,倾出石油醚液,残渣挥干残留溶剂,用甲醇溶解并转移至 10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度。精密量取 1 mL,置 10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

1.2.2 采收期对种子质量的影响

本试验主要以种子大小 (千粒重)和发芽率来评价种子质量。

(1)千粒重测定:参照 2000《农作物种子检验规程》实施指南[4]中类似植物千粒重检验方法。将经充分混匀的试验样品种子分别随机数取 100粒,8个重复,分别称重,经标准差及变异系数检验后,折算成千粒重。

(2)发芽率测定:从收集的种子中,各处理随机数取 100粒,均匀地放入已置双层滤纸的培养皿中,加入适量的水分。将培养皿置于 GTOP-2688智能型光照培养箱,在 15℃,光强 1 000 lx,每天光照10 h下发芽,15 d后统计发芽率。每样品 (处理)3次重复。

2 结果与分析

2.1 采收期对果穗质量的影响

精密吸取各样品溶液 20μL,在相同的实验条件测得各试验样品的熊果酸含量介于 0.252 3%～0.403 7%之间 (详见表2)。

从表2可清楚看出,不同的采收期之间,夏枯草果穗熊果酸含量存在明显的变化,其含量随果穗成熟度的增加而提高,至全黄时熊果酸含量达最高值0.403 7%;同时,可以发现前期增加较为缓慢,处理3(半黄)仅比处理 1(基部初见黄)提高 8.4%;当果穗变黄程度大于一半后,果穗内熊果酸积累明显加速,处理 5(全黄)比处理 3(半黄)的熊果酸含量增加 47.6%。果穗全黄后如不及时采摘,熊果酸含量会呈现一个明显的下降趋势,全黄后 7 d(处理 6)果穗内熊果酸的含量仅为全黄时 (处理 5)的 67.8%,表明夏枯草果穗的采收应在果穗全黄后及时采摘,此时熊果酸含量最高,质量最好。

表2 夏枯草果穗不同采收期熊果酸含量变化

2.2 采收期对种子质量的影响

本试验主要考查了夏枯草果穗不同采收期对种子大小 (千粒重)和发芽率的影响,各样品测定结果详见表3。从表3可知,夏枯草种子千粒重与发芽率匀随果穗成熟度的增加呈明显的上升趋势,至果穗全黄 (处理 5)基本达最大值,千粒重比早收的 4个处理提高 4.6%～58.9%;发芽率提高 16.6%～59.6%,此后,种子千粒重和发芽率无明显变化。发芽率差异显著性测定也表明为,处理 5、6之间无明显差异,与其它处理之间存在极显著差异,表明夏枯草果穗全黄后采收,种子质量最佳。

表3 夏枯草果穗不同采收期对种子千粒重与发芽率的影响

3 结 论

夏枯草为多年生草本植物,顶生假穗状花序(果穗)具有由下而上依次开花、结果和变黄 (成熟)的生长发育特性。从本试验果穗熊果酸含量、种子千粒重和发芽率随果穗成熟度的增加而逐渐提高,至果穗完全变黄 (成熟)时达最大值的结果来看,与其果穗生长发育特性相一致,表明夏枯草的采收时期必须在果穗完全变黄 (成熟)后,同时,从果穗熊果酸含量积累动态变化规律来看,过迟采收 (全黄后 7 d)其含量会明显下降,这与罗目和[2]报道的夏枯草果穗熊果酸含量前期增加、后期减少的结果一致。因此,夏枯草果穗采收应在果穗全黄后及时采摘。

本试验以果穗发黄程度为指标,直观性较强,易掌握,对生产实践具有较好的指导意义。

[1] 中国医学科学院药用植物资源开发研究所.中药志第 5册[M].北京:人民卫生出版社,1994:289.

[2] 罗目和,周日宝,童巧珍,等.规范化栽培夏枯草果穗的最佳采收期研究[J].湖南中医学院学报,2005,25(1):12.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2005版一部[S].北京:化学工业出版社,2005:197.

[4] 支巨振,邓光联,颜启传,等.农作物种子检验规程实施指南[M].北京:中国标准出版社,2000:126.