林慧文　李斯明　郑爱华　张紫萍

[摘要] 目的:以胶原蛋白为主要原料,配以中药苦参、板蓝根,通过适当的方法,制备一种用于宫颈创面止血、消炎并能加速创面愈合的新型栓剂材料。方法:制备高纯度的胶原蛋白溶液,栓剂基质,加入中药苦参、板蓝根制成栓剂,然后进行理化性能检测及质量监测、毒理学试验和药效学试验,并对其止血、消炎性能进行评价。结果:该栓剂质量稳定, pH值为5.5,毒理学试验均为阴性。药效学动物试验显示一期愈合率为90%,平均愈合时间为5～6 d。实验组与对照组相比较,止血和愈合的效果比较具差异有统计学意义(P<0.01)。结论:参蓝胶原栓,既可止血、抗菌消炎,又有利于创面愈合、缩短愈合时间,具有临床应用价值。

[关键词] 胶原蛋白;止血;消炎

[中图分类号]R944.23

[文献标识码]B

[文章编号]1674-4721(2009)08(a)-150-02

宫颈病变是常见的妇科疾病,EPPL术是治疗宫颈病变的重要手段。但因创面大,愈合时间长,存在有局部出血、感染等并发症,是目前面临及亟需解决的问题。

胶原是动物体内含量最多的蛋白质,是创面愈合与修复中的重要物质,能促使上皮细胞覆盖伤口,完成组织的重建。因此,设计以胶原蛋白为主要原料,配以中药苦参、板蓝根制备一种阴道栓剂,具有止血、抗菌和促进伤口愈合作用,可用于宫颈炎治疗后及ELLP的创面愈合。

1 材料与方法

1.1胶原蛋白原料的制备

以牛筋腱为主要原料,去除牛筋表皮、肌肉脂肪等杂质,利用的盐水脱脂、去血清等成分,捣碎,然后用0.5 mol/L的醋酸和胃蛋白酶溶解,盐析,再酸溶,用水透析至中性得到胶原蛋白原液(由广州市红十字会医院、广州市创伤外科研究所研制并提供),冷冻干燥后备用。

1.2栓剂基质组方的改进

主要采用甘油明胶水溶性基质,确定基质中明胶、甘油、添加物甘露醇的最佳比例,控制基质含水量为10%。

1.3 中药板蓝根、苦参浓缩提取制备

取适量板蓝根、苦参分别粉碎成粗粉,混合均匀,加水煎煮两次,第一次1.5 h,第二次1 h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18～1.23(60～80℃),待冷至40℃左右,缓慢加入乙醇使含醇量达70%,充分搅拌,静置12 h,过滤,浓缩到糊状物,备用。

1.4参蓝胶原栓剂的制备方法

冻干胶原蛋白经无菌稀醋酸溶解后,用无菌蒸馏水透析至中性;取处方量明胶加入适量纯水浸渍12 h,加入甘油,置沸水浴上加热约10 min,趁热用纱布过滤,在滤液中加入适量板蓝根、苦参浓缩液,待35℃左右加入胶原蛋白,入栓剂模具中,待凝即得。共制得栓剂50粒供性能检测和动物实验使用。

1.5参蓝胶原栓剂的理化性能及质量监测

酸度测定:取本品3 粒,加水30 ml ,使溶解,依法测定(《中国药典》2000 年版一部附录XIII B) pH 值。

无菌试验:参照《中华人民共和国药典》中有关的微生物检测方法进行试验,检测样品的微生物含量。

稳定性试验:样品在室温和4℃冰箱中保存,同批样品每个月取2粒进行胶原蛋白的性质检测。

1.6 动物实验

1.6.1 实验动物

新西兰大白兔20只,体重(2.0±0.5) kg,均为雌兔 。将实验动物随机分为对照组和实验组,每组10只,分笼标准喂养,饲料为全价营养兔颗粒饲料。

1.6.2 毒理学实验

根据国际标准ISO10993-1即国家标准GB/T16886.1的规定进行细胞毒性试验、致敏试验、刺激试验、亚急性毒性试验以及遗传毒性试验。

1.6.3药效学试验

两组新西兰雌性大白兔分为实验组和对照组。用速眠新注射液(846)给大白兔肌注(0.02～0.04 ml/kg),麻醉满意后将动物仰绑于手术台 ,剪去术区周围毛约4 cm×6 cm,在阴道内侧选取1 cm×0.5 cm组织两处,形成渗血创面,用制备好的参蓝胶原栓剂贴敷。对照组以凡士林纱布贴敷。

疗效观察:记录止血时间,并定期作菌落计数以及创面面积测量,记录创面愈合时间;分别于术后第7、14天,每组各处死5只大白兔,肉眼观察创面情况,并取阴道内创伤部位组织进行病理组织活检。

2 结果

2.1 参蓝胶原栓剂的理化性能检测及质量监测结果

pH值为5.5。栓剂的质量稳定,稳定性试验显示:栓剂在1～6个月内胶原蛋白的比黏度、蛋白质的性质、含量是稳定的,在6个月以后,比黏度开始下降,蛋白质的含量基本不变,电泳结果表明逐渐有蛋白质降解发生。因此,暂定该栓剂的保存期为40℃以下半年。

2.2 无菌试验结果

参蓝胶原栓剂经过细菌和真菌培养,无细菌和真菌检出。

2.3 毒理学试验

急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验和溶血性试验均为阴性结果。

2.4动物实验结果

一般情况:术后1 d内各组动物纳差,活动量小,反应迟钝,2 d后基本恢复。

肉眼观察:术后两组止血和愈合的效果明显不同 ,实验组以止血和愈合的效果明显一期愈合为9例,占90%;在开始的24 h内,伤口组织周围发生轻度的应急反应,在第2天开始,上皮细胞也从边缘向伤口生长,创面缩小。术后第5~6天伤口愈合完成,对照组止血和愈合的效果有改变的共3例,占30%。随时间延长止血和愈合的效果明显有差异,且创面愈合不整,瘢痕较明显。

2.5统计学分析结果

第一周实验组与对照组相比较,止血和愈合的效果比较具差异有统计学意义(P<0.01),术后 2周分析结果显示第二周实验组与对照组相比较,止血和愈合的效果均具差异有统计学意义(P<0.01)。实验组止血和愈合的效果与对照组比较明显提高。

2.6 组织病理学改变

用光学显微镜(德国LAIKA D2000)观察。术后第一周、第二周与对照组相比,组织学表现为实验组炎性反应明显减少,创缘基底细胞分裂增生,损伤组织修复良好,创面修复情况明显优于对照组。

3 讨论

胶原蛋白是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质,胶原是细胞间质的主要成分,它可以促进上皮细胞及成纤维细胞的增殖和分化,为多种细胞因子的黏附提供基质。对细胞的分化、运动、化学趋向性、结缔组织的修复、关节润滑、伤口愈合、水电解质的分布及血液凝固等均起重要作用,在创伤愈合过程中胶原纤维形成网络和支架,连接细胞,引导细胞迁入组织缺损区,是创面愈合与修复中的重要物质,能促使上皮细胞覆盖伤口,完成组织的重建。特别是Ⅰ型胶原由于其优越的生物相容性和安全性以及来源丰富性,被认为是最有用的生物材料之一[1]。而且胶原蛋白的pH值为4～6,适用于人体的微酸环境[2-6]。

中药板蓝根为十字花科大青叶属植菘蓝根,功效清热解毒,对多种细菌、病毒有抑制和杀灭作用,尤其对大肠杆菌、金黄葡萄球菌作用显着;苦参碱是燥热,杀虫,对多种杆菌与真菌、滴虫有抑制和杀灭作用,并能升高白细胞,加强免疫力[7]。

宫颈炎、宫颈病变是常见的妇科疾病目前,临床用于宫颈糜烂及创面修复的治疗多采用以化学合成药物或中药为主药结合一些基质而制成的栓剂,虽然有一定的疗效,但宫颈创面贴附不紧密,故修复创面的效果欠佳。我们设计以胶原蛋白为主要原料,配合中药板蓝根、苦参碱,通过适当的方法,制备一种胶原蛋白参蓝阴道栓剂。试验结果显示既止血、抗菌消炎,又有利于创面愈合、缩短愈合时间,适用于宫颈物理治疗后及LEEP后创面的止血、抗菌消炎,并能促进宫颈愈合。

[参考文献]

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