陈逸湘　李　忠

摘要 阐述紫云英根瘤菌剂的应用，并从根瘤菌的分离、根瘤菌的鉴定、斜面菌种培养、液体菌种培养、泥炭土的加工处理、成品制备等方面介绍紫云英根瘤菌剂的生产方法，以期为生产高产优质的紫云英绿肥与饲料作物提供参考。

关键词 紫云英；根瘤菌剂；应用；生产

1紫云英根瘤菌剂的应用

为提高农田利用率，增加有机肥效，解决双季稻田肥料问题，促进作物快速生长，种植紫云英绿肥是简易有效的好办法。稻田冬种紫云英可节省后作肥料用量，提高其产量。试验证明：每压青2 000kg紫云英鲜草，可少施尿素10～12kg，增加稻谷375～600 kg/hm²，同时还能增加土壤养分含量，提高土壤肥力。紫云英除用作绿肥外，还能直接或青贮紫云英作饲料。其幼苗还是一种美味的蔬菜。

紫云英通常是在每年9～10月播种，根瘤菌肥料就是在播种时拌种使用的。头一、二年种绿肥，采用紫云英根瘤菌剂接种，能增产20％～30％，效果很显著。接种紫云英根瘤菌，是种植紫云英成败和提高鲜草产量的关键措施。紫云英根瘤菌与紫云英共生，才能固定空气中的氮素，促进植株生长。因此，使用紫云英根瘤菌，特别在首次种植紫云英绿肥的地区，对于提高紫云英绿肥的产量有很大作用。

2紫云英根瘤菌剂的生产方法

2.1根瘤菌的分离

从生长状态良好的紫云英菌株根部选择肥大、饱满、粉红色的根瘤，用水冲洗干净，然后用无菌水冲洗，滤纸洗干后，用75％乙醇浸泡2min，用0.1％氯化汞浸泡2～5min，用无菌水冲洗5～6次，在无菌条件下，用镊子将根瘤压碎。将挤出液接种到斜面试管内，28℃培养，长出菌落之后，进行平板稀释分离，将单菌落接到斜面上。重复进行稀释分离，获得单菌落接种到斜面上保存。此为初步分离的根瘤菌菌株。

斜面培养基配方：蔗糖1％＋K2HPO40.05％＋MgSO4 0.02 ％＋NaCl 0.02％＋CaCO30.3％＋酵母粉0.50％＋微量元素液0.4％＋琼脂2％，pH值7.0。

微量元素液配方：Na2MoO4·2H2O 0.5%+HBO30.5％。

2.2根瘤菌的鉴定

2.2.1纯度检查。观察菌落是否圆形、边缘整齐、稍突起，在含有刚果红的甘露醇-酵母培养基平板上呈乳白色或无色半透明。革兰氏染色后，在显微镜下观察是否为短杆状、无芽胞的革兰氏阴性菌。

2.2.2回接实验。将紫云英种子用75％乙醇浸泡5min，再用0.1％HgCl2浸泡5min，然后用无菌水冲洗4～6次，用滤纸洗干。将消毒过的种子放在灭菌湿滤纸片上，置25～30℃中催芽。把分离到的紫云英根瘤菌在无菌条件下接种到发芽的紫云英种子上，在无氮培养液中培养。每天光照12h，日夜温差5～10℃，保持空气相对湿度在50％～70％。与无接种的植株对比，回接所用的根瘤菌对其寄主紫云英全部结瘤，结瘤固氮性能优良，接种植株干重比对照显著增加。 则可证明供试根瘤菌是紫云英的共生根瘤菌，可用于生产。

2.3斜面菌种培养

将配好的培养基装入克氏瓶中，塞上棉塞，灭菌30min，趁热摆斜面，冷却后接种。在超净台上酒精灯的火焰旁，用接种针挑取原种少许，在斜面上划“之”形，塞上棉塞。置25～28℃下培养3～4d。观察到斜面菌苔丰满，表面湿润光滑，呈粘液状，无色透明或乳白色，无气味，则为正常，可用于进一步生产。

2.4液体菌种培养

配好液体培养基，装入大三角瓶中，每瓶600mL，高压灭菌。冷却后接种。在超净台上酒精灯火焰旁，将无菌水倒入克氏瓶中，再用灼烧过的接种环，把根瘤菌的菌苔从斜面上刮下，轻轻搅拌，成为悬浮液，很快倒入三角瓶中的液体培养基内，包扎好瓶口。在25～28℃下摇瓶培养3～4d。观察到菌液浓稠，闻之有醇香的气味，则可用于拌土生产。

液体培养基配方：蔗糖1％＋K2HPO40.05％＋MgSO40.02％＋NaCl0.02％＋CaCO30.3％＋酵母粉0.50％＋微量元素液0.4％＋豆芽20％+琼脂2％，pH值7.0（先将豆芽放入水中熬煮出汁，去渣后加入其他配料）。

2.5泥炭土的加工处理

根瘤菌一般适宜于湿润、有机质丰富、通气良好的土壤中，泥炭土含有根瘤菌必需的养分，同时泥炭的保水力强，质地疏松，不粘结成块，通气良好，是一种理想的培养基。但是，有时泥炭土过于潮湿，并且含有霉菌，不经加工处理不能直接利用。所以要晒、磨、筛，再经过高温消毒灭菌，才能达到拌种均匀、根瘤菌再繁殖的目的。

2.6成品制备

测定泥炭土的含水量，然后按每千克泥炭土拌加40mL菌液拌合，动作要轻快，拌合要均匀。拌菌后的泥炭土湿度要求达到35％左右，然后将成品装入密封袋。

3紫云英根瘤菌剂施用方法

按500g菌剂可用0.27hm²种子量拌种。将菌剂在清洁地板或容器内，加入适量清洁水，调成糊状，把紫云英种子放入拌匀，稍等晾干，即行播种。注意菌剂应存放在阴凉清洁的地方，当天拌种，当天播完，切忌与农药混用。