白屈菜总生物碱缓释片制备工艺研究

2024-04-09王钫键龙杰高娜马小娟李瑞海贾天柱

中国民族民间医药·下半月 2024年2期

王钫键　龙杰　高娜　马小娟　李瑞海　贾天柱

【摘要】目的：以羟丙基甲基纤维素为缓释材料制备白屈菜总生物碱缓释薄膜衣片解决白屈菜有效成分药物浓度不稳定的缺点，并建立可靠的含量测定方法。方法：采用单因素实验对白屈菜总碱缓释薄膜衣片制备工艺进行筛选，以释放度为依据；采用高效液相色谱法（HPLC）建立了白屈菜总碱缓释薄膜衣片中血根碱的含量测定方法。结果：优化的缓释片工艺处方：30%白屈菜总碱提取物、30%HPMC、20%可压性淀粉、10%乳糖、10%微晶纤维素，挤压制粒，加1%硬脂酸镁，压片，即得。结论：该工艺制得白屈菜总碱缓释片释药曲线平缓，缓释效果良好，方法简单易行，所得薄膜衣片外观和可压性良好。

【关键词】白屈菜总碱；缓释片；制备工艺；薄膜衣片

【中图分类号】R283 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2024）04-0013-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.04.zgmzmjyyzz202404004

Study on Preparation Process of Chelidonium Majus Total Alkaloid Sustained-release Tablets

WANG Fangjian LONG Jie GAO Na MA Xiaojuan LI Ruihai* JIA Tianzhu

Abstract：Objective To prepare Chelidonium majus total alkaloid sustained-release film-coated tablets using hydroxypropyl methyl cellulose as sustained-release material to solve the shortcomings of unstable drug concentration of celandine active ingredient， and to establish a reliable content determination method. Methods A single-factor experiment was used to screen the preparation process of celandine total alkali sustained-release film-coated tablets， and the release degree was the basis. A method for determining the content of ethrogen in celandine total alkali sustained-release film-coated tablets was established by high performance liquid chromatography（HPLC）.Results The optimized process of sustained-release tablets was formulated： 30% celandine total alkali extract， 30% HPMC， 20% compressible starch， 10% lactose， 10% microcrystalline cellulose， extruded granulation， plus 1% magnesium stearate， tableting， that is. Conclusion The process yields a gentle slow-release curve of celandine total alkali sustained-release tablets， good sustained release effect， simple and easy method， and good appearance and compressibility of the resulting film-coated tablets.

Key words：Chelidonium Majus Total Alkali; Sustained-release Tablets; Preparation Process; Film-coated Tablets

白屈菜（Chelidonium majus L.）是用于鎮咳、止痛、利尿、解毒的传统中药，最早记载于《救荒本草》，最为人们所熟知的别名为断肠草。生物碱成分是白屈菜的主要有效成分［1］。白屈菜红碱和血根碱的血浆半衰期很短［2］，极大限制了白屈菜的临床应用，缓释制剂能维持平缓血药浓度，减少服药次数，增加患者用药依从性。

实验室前期对白屈菜做了大量研究，建立醋制白屈菜的提取方法以及HPLC法测定白屈菜中生物碱含量的方法［3］。现在前期工作的基础上，以白屈菜总碱缓释薄膜衣片为模型药物，进行薄膜衣片的处方设计和制备工艺研究，并用体外释放度对其进行了科学评价。以期为白屈菜缓释制剂的应用提供工作基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RE-52CS旋转蒸发仪（上海亚荣）；SHZ－Ⅲ 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；RCZ-6N智能溶出仪（黄海药检）；FT-2000AF脆碎度仪（天大天发）；YPD-200C片剂硬度检测仪（黄海药检）；ZP-5B压片机（上海天凡药机制造厂）；ME55电子天平（梅特勒精密电子天平）；小型家用粉碎机（美的）。

1.2 材料白屈菜总生物碱提取物（由本课题组提取分离制备）；血根碱对照品（大连美仑生物）；HMPC K15M（吉林化工）；可溶性淀粉、微晶纤维素（沪试）；乳糖（北京奥博星01-025）；硬脂酸镁（山河药辅）；预混包衣粉（上海卡乐康包衣技术有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（西陇科学）；丙烯酸树脂（南京都莱生物）；乙腈为色谱纯（国药集团），甲醇为色谱纯（大茂），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 白屈菜总生物碱缓释片的含量测定说明白屈菜中的生物碱作为其主要的有效成分在抗炎、抗肿瘤、镇咳平喘、抗氧化等多方面都有作用，其中血根碱和白屈菜红碱在血液中的代谢速度很快，因此把白屈菜总碱做成缓释片。又因为本实验主要考察白屈菜总碱缓释片对于糖尿病的降糖作用，通常以为糖尿病与炎症有关，白屈菜生物碱血根碱抗炎活性最强。故以血根碱作为白屈菜总碱的一个代表性含量检测指标，在接下来白屈菜总生物碱缓释片含量测定和释放度测定中均以血根碱为代表物进行检测。血根碱对照品及供试品溶液应在低温、避光条件下储存。

2.2 液相色谱条件色谱柱：Kromasil ODS-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）中汇达分析柱；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸盐缓冲溶液（B，pH=3），0～12 min，15%A；12～32，15%A→25%A条件进行梯度洗脱；检测波长为270 nm；流速1 mL/min；柱温30 ℃；进样量20 μL。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备精密称取血根碱对照品0.5 mg，置于2 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成0.25 mg/mL的标准溶液备用。

2.3.2 供试品溶液的制备取10片白屈菜总生物碱缓释片，置于研钵中快速研匀后，精密称定1.0 g，加入50 mL甲醇，超声30 min，加2 moL/L氢氧化钠溶液调节pH=11，抽滤，滤液加氯仿萃取3次，每次50 mL；合并氯仿层，回收溶剂；浓缩液转移至10 mL容量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度。过0.45 μm的微孔滤膜备用。

2.3.3 阴性溶液的制备按处方比列及方法制备不含白屈菜总碱浸膏粉的阴性样品，同法制备阴性溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性实验分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液以及阴性溶液20 μL，注入液相色谱仪，按“2.2”项下色谱条件分析，色谱图如图1所示。

2.4.2 标准曲线的制备精密称取血根碱对照品2 mg，置于2 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成已知浓度的标准液（1 mg/mL）。移取1 mL于2 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，续取稀释后的标准液1 mL于2 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，续取两次；然后各精密吸取20 μL注入液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量的对数与峰面积积分值做线性处理，得回归方程：y=13567x+663.46，R=0.9998。进样量在0.0625 mg范围内，峰面积积分值与进样量呈线性关系，样品的峰面积积分值在此范围内，即可用回归方程推算进样量及样品浓度。

2.4.3 精密度实验精密吸取0.25 mg/mL的血根碱对照品20 μL测定峰面积积分值，在稳定条件下重复测定5次。峰面积积分值平均值为4086.8，RSD=1.93%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 稳定性实验按照“2.3.2”项制备供试品溶液（BQC-1），精密吸取20 μL在不同时间进样，峰面积积分值平均值为2099.8，RSD=1.72%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.5 重复性实验对样品BQC-1取五份进行测定，结果RSD=2.1%，表明样品的重现性较好。

2.4.6 加样回收实验取已知含量的样品5份（含血根碱1 mg/g），约0.25 g，精密称定，分别精密加入血根碱对照品甲醇液（0.385 mg/mL）各4.0 mL，然后移取加入46 mL甲醇，按“2.3.2”制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

2.4.7 含量测定依“2.3.2”项制备供试品，“2.2”色谱条件对白屈菜总生物碱缓释片（20230225；20230226；20230227）进行含量测定。结果见表2。

本文建立了白屈菜总生物碱缓释片的HPLC含量测定方法，方法学考察表明该法简单可靠，以该法测定白屈菜总生物碱缓释片中血根碱含量，平均值为1.08 mg/g，证明白屈菜总碱缓释片中血根碱含量稳定，可以作为白屈菜总生物碱缓释片的含量测定标准物质。

2.5 释放度测定方法取白屈菜总生物碱缓释片6片，按《中国药典》2020年版（四部）溶出度与释放度测定法，通则第一法（转篮法）操作［4］，1.0%十二烷基硫酸钠溶液（SDS） 800 mL作为释放介质，转速100 r/min，温度为（37±0.5） ℃，分别于2 h、4 h、6 h、8 h、10 h取样5 mL， 30 s内用0.45 μm微孔滤膜过滤，同时补充等体积的同温介质，精密移取续滤液4 mL于10 mL 具塞试管中，挥干溶剂，加入60%乙醇适量溶解后，摇匀，定容至10 mL，照 “2.4.7”项下测定方法测定生物碱含量，以为血根碱代表物进行检测，并按下式计算缓释片的累积释放度。Q=cnVt+Vs∑cn-1其中，Q表示缓释片的累积释放度; cn表示实测浓度;Vt表示溶出介质体积;Vs表示取样体积。

2.6 白屈菜總生物碱缓释片制备工艺加入处方量的白屈菜总碱浸膏粉与HPMC K15M、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素，于家用粉碎机中混匀，加入适量的90%乙醇制软材，用60目筛网挤压制粒，60 ℃干燥45 min，干颗粒过60目筛网整粒。称取处方量硬脂酸镁加入干颗粒混合均匀。调节片重0.3 g，压力40～50 N，以直径8 mm弧形冲头压片。素片过10目筛网选片，测定片重差异和硬度和脆碎度，合格品60 ℃干燥120 min。8%卡乐康预混包衣粉100 mL，包衣锅温度60 ℃，喷液压力-0.4 MPa，取出合格素片置包衣锅内，调节喷嘴至合适角度，缓慢包衣5～10层，置60 ℃烘干6 h，即得。

2.7 处方因素的考察

2.7.1 不同缓释材料对释放度的影响分别以HPMC K15M、丙烯酸树脂、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）作为缓释材料，三种材料用量一致，其余辅料也一致，按照“2.6”制备缓释片，测定释放度。由图2可知，以HPMC K15M为缓释材料效果最好，PVP的缓释效果不理想，在6 h时累积释放度高于70%不符合要求，而丙烯酸树脂释药缓慢亦不是最佳选择。综合来看，HPMC K15M为制备白屈菜总生物碱缓释片最佳缓释材料。

2.7.2 不同比例HPMC K15M对释放度的影响其余辅料不变，调节HPMC K15M占比分别为20%、30%、40%，按照“2.6”制备缓释片，测定释放度。由图3可知，HPMC K15M占比20%时，血根碱突释，可能引起中毒，30%释药曲线较为平缓，累计释放度亦在理想范围内，当占比达到40%时，样片明显释药迟缓，10 h累计释放度不足70%。HPMC K15M占比30%最佳。

2.7.3 不同比例的辅料对释放度的影响保持其他辅料的用量不变，调节乳糖与可压性淀粉的比例分别为1∶1、2∶1、1∶2，按照“2.6”制备工艺制备缓释片，测定释放度。由图4可知，乳糖和可压性淀粉的比例升高都会使得释放度碱缓，且二者结果相差不大，由于乳糖比较昂贵，最终采用乳糖∶[KG-*3/5]可压性淀粉为1∶[KG-*3/5]2制备缓释片。

2.7.4 不同含量硬脂酸镁对释放度的影响保持其他辅料不变，分别以1%、3%、5%硬脂酸镁做润滑剂制备缓释片，测定释放度。由图5可知，随着硬脂酸镁的含量升高，前期释放度升高了，但是6 h以后的释放度呈负相关。1%的硬脂酸镁作为润滑剂效果最好。

2.8 白屈菜总生物碱缓释片处方优化［5］根据单因素考察的结果，处方为30%的浸膏粉与30%HPMC K15M加入10%乳糖、10%微晶纤维素、20%可压性淀粉混匀，以适量90%乙醇为润湿剂，挤压制粒，干燥整粒后加1%硬脂酸镁做润滑剂，压片即得。

2.9 白屈菜总生物碱缓释片处方优化验证以优化后的处方制备缓释片，测定释放度，结果见表3。结果说明优化后的处方稳定可行，可以达到很好的缓释效果。

3 讨论

研究以血根碱为标准物质建立了白屈菜总生物碱缓释片的含量测定的方法，方法学考察证明该法简单可靠。以释放度对缓释片的辅料进行了优化，结果表明不同的缓释材料、缓释材料的占比、填充剂的比列、润滑剂的含量都会对缓释片的释放度造成影响，其中影响最明显的是缓释材料的种类和占比。

通过控制扩散速度的方法制备白屈菜生物碱缓释片。将白屈菜生物碱做盐化处理增加其溶解度（一般认为缓释制剂溶解度的低限为0.1 mg/mL）与亲水性缓释材料HPMC混合，再以由HPMC为成膜材料的卡乐康包衣粉包衣，制成骨架片。以乳糖、淀粉、微晶纤维素为填充剂改善可压性，硬脂酸镁为润滑剂增加片剂成型度。先制粒再压片而不是直接粉末压片使药物白屈菜浸膏粉本身可压性较差，易吸湿，不易与辅料混合均匀，直接压片效果差，制颗粒后可压性与均匀度均得到改善。缓释制剂的缓释方法大致分为：控制溶出速度、控制扩散速度、利用溶蚀作用、利用渗透作用（渗透泵片）、离子交换法［6］。

药物的辅料是制剂的重要组成部分，辅料要求适合所选制剂类型的要求，羟丙基甲基纤维素（HPMC）是近来常用的一种亲水性缓释材料，是一种毒性低，安全性高的药用辅料［7］。HPMC的缓释原理为遇水或消化液亲水性骨架会快速膨胀，形成凝胶包裹药物减缓药物的释放［8］。研究者用HPMC共喷雾干燥很好地解决了干姜醇提物难以压缩成型的问题，为中药制剂原料压缩成型差的共性找到了新思路［9］。HPMC作为一种热门材料，在农业、食品、生物医药领域得到了广泛应用。

乳糖作为一种优良的药用辅料，在应用时需要注意的是其可能与含胺的活性药物发生美拉德反应。实验结果出现的乳糖的比列增加引起了释放速率的加快可能是因为乳糖与缓释材料和药物的相容性好，从而加快了药物溶出［10］。

本文通过对白屈菜总生物碱进行成盐处理，解决了其水溶性差的问题。加入了适量的微晶纤维素很好地解决了前期辅料可压性差、易松片的问题。另白屈菜总生物碱浸膏粉易吸湿，用薄膜包衣的方法很好地解决了这一问题，提高了所制白屈菜总生物碱缓释片的稳定性，利于储存。综上，以HPMC作为缓释材料制备亲水型凝胶骨架片法制备白屈菜生物碱缓释片的方法切实可行，单因素实验优化的处方工艺稳定有效，HPMC作为缓释材料有明显优势。所制白屈菜生物碱缓释片符合药典缓释制剂释放度要求，释药曲线平缓，缓释效果良好。卡乐康预混包衣粉是理想包衣材料，操作简单，包衣效果良好。

参考文献

［1］洪波，孟琦，江健梅，等.白屈菜生物碱研究进展［J］.人参研究，2022，34（2）：58-62.

［2］都姝麟，李丽荣，顾硕，等.白屈菜药理作用综合研究进展［J］.吉林中医药，2022（1）：84-87.

［3］黄爽，李瑞海，贾天柱.7个指标的微波酒制白屈菜炮制工艺研究［J］.亚太传统医药，2022，18（5）：61-65.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2020.

［5］杨迎光.昆明山海棠缓释片的研究［D］.成都：成都中医药大学，2016.

［6］吴海燕，谢瑞娟.缓释制剂的研究进展［J］.国外丝绸，2006（3）：20-22.

［7］董平轩，王鹏，贾相第，等.药用辅料羟丙基甲基纤维素的动物急性毒性研究［J］.德州学院学报，2022，38（4）：10-12，35.

［8］管庆霞，封文静，李永吉，等.马钱子总生物碱缓释片处方和工艺的研究［J］.哈尔滨商业大学学报（自然科学版），2013，29（1）：12-17.

［9］张梦珊，罗毓，高雅婷，等.HPMC共喷雾干燥改善干姜醇提物壓缩成型性的研究［J］.中国中药杂志，2022（4）：931-937.

［10］龚琼.改良辅料Ⅰ质量及其缓释作用的研究［D］.广州：广东药学院，2015.

（收稿日期：2023-05-11 编辑：刘斌）