陆铮铮，李小霞，肖仲久

（遵义师范学院，贵州 遵义 563002）

种植烤烟是贵州省遵义市农民脱贫致富、乡村振兴的重要渠道。但是，烟草青枯病在贵州省广泛发生和流行，已成为制约烟叶生产的重要因素［1］，严重影响了烟草种植业的发展。

烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearumE.F.Smith）引起的一种土传病害，防治该病害的方法以化学防治为主，但是化学农药的应用阻碍了烟叶品质的提升。因此，绿色生物防治烟草青枯病的方法对改善烟叶品质有较高的研究价值。本研究采用前期室内筛选出的对烟草青枯病有良好防治效果的根围土壤中的拮抗放线菌、地榆中药液和大蒜粗提液，开展田间试验，以检测实际防治效果，为采用绿色防治方法防治烟草青枯病提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试拮抗放线菌 实验室中筛选的放线菌F11，抑菌圈的直径为21 mm。放线菌F11 由贵州省遵义市务川仡佬族苗族自治县（简称务川县）茅天镇红星村烟草种植区中有青枯病发病烟田中健康烟株的根围土壤中分离而得。

1.1.2 供试中药 中药地榆（Sanguisorba officinalisL.），斜切为寸段入药，购于遵义市中医院。

1.1.3 供试植物源 大蒜（Allium sativum）白皮蒜蒜瓣，购于北京华联超市。

1.1.4 供试农用链霉素 粉剂，含量80%，购于北美农大集团。

1.1.5 供试田间概况及供试品种 试验田位于贵州省务川县茅天镇红星村，平均海拔高度830 m，气候温和，以种植烤烟为主，常年连作，烟草青枯病发病率较高。供试烟草品种为云烟87。

1.2 方法

1.2.1 放线菌F11 菌液制备方法［2］将放线菌F11在燕麦培养基上扩大培养，于28 ℃培养箱培养7 d后，用直径为5 mm 的打孔器打取放线菌的菌碟，取5 个菌碟置于装有300 mL 燕麦液体培养基的三角瓶中，于28 ℃恒温摇床振荡培养4 d 后即可获得放线菌F11 菌液悬浮液。

1.2.2 地榆中药液配制方法 将地榆粉碎成粉末状，称取粉末置于三角瓶中，加入无菌水制备成浓度为0.2 g/mL 的中药液体，高压灭菌后即得地榆中药液。

1.2.3 大蒜粗提液制备方法［3］将新鲜大蒜样品用去离子水冲洗干净并沥干表面水分、切碎。称取相应的样品放入灭菌的研钵中，加入相应的无菌水使其浓度为0.17 g/mL，然后研磨成浆。2 层纱布过滤，将得到的滤液以5 000 r/min 转速离心5 min，取上清液。用0.22 μm 孔径针头式细菌过滤器过滤、除菌，即得大蒜粗提液。

1.2.4 大田试验设置 试验共设置5 个处理，分别是：处理1（T1），放线菌F11 菌液；处理2（T2），地榆中药液；处理3（T3），大蒜粗提液；处理4（T4），农用链霉素（施用浓度为2 000 倍）；处理5（T5），清水。其中农用链霉素作为药剂对照，用清水作为空白对照。

3 次重复，共计15 个小区，随机区组排列。每个小区种有烟株50 穴，两株烟株间隔1 m，每个小区之间和田边都留出一行作为保护行。

移栽前先分别用5 种处理液浸根60 min，移栽完毕后，再用各处理液40 mL 加清水160 mL 浇根。此后每隔30 d 浇灌1 次，每株烟苗使用100 mL 各处理液浇灌，整个烟株生长期共浇灌3 次。

1.2.5 病害调查 第3 次浇灌后的每10 d 进行1 次调查，整个生育期共调查3 次。调查时以整株为单位，病害分级标准依据《烟草病害分级及调查方法》YC/T 39—1996 进行［4］。0 级，全株无病；1 级，茎部偶有褪绿条斑或（和）50%以下叶片或顶叶轻度凋萎；2 级，茎部有明显黑色条斑但尚未达到植株顶部或（和）病侧50%以上叶片或部分腰叶以上叶片凋萎；3 级，茎部黑色条斑达到植株顶部或病侧叶片全部凋萎或全株大部分叶片凋萎；4 级，病株枯死。

1.2.6 分析与数据统计方法 具体计算式如下［5］。

采用Excel 2010 软件处理与计算发病率、病情指数和相对防效；用DPS 19.05 数据处理系统分析平均相对防效之间的差异显著性。

2 结果与分析

统计3 次调查的数据，计算出3 个重复小区的平均发病率、病情指数和相对株防效，并采用DPS 数据处理系统进行差异显著性分析，结果见表1。

表1 不同处理对烟草青枯病的防治效果

3 次调查中发病率较低的是采用放线菌F11 菌液处理的小区，其平均发病率为9.97%；其次是采用大蒜粗提液处理的小区，其平均发病率为11.17%；再次是采用地榆中药液处理的小区，其平均发病率为13.86%；农用链霉素处理的小区平均发病率为18.67%；清水对照处理的小区平均发病率为24.02%。

3 次调查中相对株防效较高的是采用放线菌F11 菌液处理的小区，其平均相对株防效为67.96%；其次是采用大蒜粗提液处理的小区，其平均相对株防效为57.48%；再次是采用地榆中药液处理的小区，其平均相对株防效为43.32%；农用链霉素处理的小区平均相对株防效只有28.16%。

放线菌F11 菌液、大蒜粗提液与农用链霉素处理比较，相对株防效分别极显著提高了39.80、29.32个百分点（P＜0.01），说明放线菌F11 菌液和大蒜粗提液对烟草青枯病的防治均有极显著的作用。

地榆中药液与农用链霉素处理比较，相对株防效显著提高了15.16 个百分点（P＜0.05），说明地榆中药液对烟草青枯病的防治效果较显著。

综上所述，通过分析平均发病率和相对株防效，结合差异显著性分析，可知田间试验的3 种生物防治液体对烟草青枯病防治均有较好的效果，其中效果最好的是放线菌F11 菌液，其次是大蒜粗提液，效果最差的是地榆中药液。

3 讨论

拮抗放线菌防治烟草青枯病的报道逐渐增多。张立帆［6］研究发现，从贵州省福泉市植烟土壤中分离筛选出的放线菌A27 防治烟草青枯病菌的抑菌圈直径为28.7 mm；罗文建等［7］报道，从健康土壤中分离到对青枯雷尔氏菌具有明显拮抗作用的放线菌LC-7，对烟草青枯病具有显著的防治效果，防效为85.48%。本研究筛选出的拮抗放线菌F11 菌液对烟草青枯病的防治效果显著且稳定。

地榆是对烟草青枯病防治效果较好的中药。地榆作为一种重要的中药，在有效抑制植物病原菌上鲜有报道。通过本研究对地榆田间防治效果的分析可知，地榆作为生物农药防治烟草青枯病具有较大的潜力，可以进行进一步的研究。

大蒜是对烟草青枯病防治效果较好的植物源。吴晓婷等［8］报道，大蒜根系分泌物浓度为1 g/mL时，对烟草青枯病菌抑制效果最好，其抑菌率为53.67%。本研究表明大蒜对烟草青枯病的实际防治效果显著，且是生长在土壤的部分发挥了抑制作用，这与青枯病的细菌性土传病害的源头一致，因此可以考虑与烟草轮作或者间作以防治青枯病。

田间试验结果表明，防治效果从强到弱依次为放线菌F11 菌液、大蒜粗提液、地榆中药液。在绿色防治烟草青枯病中，利用拮抗放线菌和植物源水粗提液防治该病害均可以起到显著的防治作用，而在实际的田间防治中放线菌比植物源效果更佳是因为放线菌在土壤中可以不断繁殖，增加了拮抗放线菌在土壤中的浓度。在实际生产中，也可以尝试结合田间管理，将烟草与大蒜或地榆进行轮作或者间作综合防治烟草青枯病［9］。

4 结论

本研究分析了3 类生物防治的田间防治效果，结果表明，放线菌和大蒜粗提液对烟草青枯病具有显著的防治效果，平均相对株防效达67.96%和57.48%，比对照药剂农用链霉素2 000 倍稀释液的相对株防效提高了39.80、29.32 个百分点（P＜0.01），地榆中药液与农用链霉素2 000 倍稀释液相比相对株防效提高了15.16 个百分点（P＜0.05）。