颜红娇，郭 琰，赵 月，赵声兰

（云南中医药大学中药学院，昆明 650500）

三七茎叶为五加科人参属植物三七［Panax notoginseng（Burk）F. H. Chen］的干燥茎叶，主产于云南省文山州各县，称为“文山七”，另广西田阳、靖西、田东、德保等地也有种植，习称“田七”，为著名的道地药材。其具有止血、消肿、定痛的功效，主治出血症、痈肿毒疮［1］、跌打损伤、瘀血肿痛。2017 年被云南省卫生和计划生育委员会列为地方新食品资源［2］。其主要有效成分地下部位以人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1为主，三者之和应大于5%［3］，地上部位以Rb3为主，相关标准规定叶中含量应大于1%［4］，茎叶中含量应大于0.5%［2］。现已广泛应用于若干中成药的制作［3］和食品加工［5］。

原二醇型人参皂苷在酶［6］、微生物［7］、化学试剂［8］、热处理的作用下会转化为天然三七中不存在或稀少的人参皂苷。通过炮制加工，三七中不同皂苷的相对含量会发生变化［9］，高温高压条件对皂苷成分有一定的破坏作用［10］，可促进皂苷的降解与重构［11］，使三七茎叶中部分原生皂苷转化为相应的次级皂苷［12］或稀有皂苷如F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2等［13］，稀有皂苷对心血管疾病［14］、代谢性疾病［15］等具有较好的治疗效果。热处理是中药炮制及食品加工的主要方法，但国内外关于三七的热处理研究多集中在其地下部位［10］，有关茎叶的热处理皂苷转化研究相对较少。

本研究以三七茎叶为研究对象，经高温高压蒸制、油炸、九蒸九晒、微波和超声等方式炮制加工后，利用高效液相色谱仪检测9 种单体皂苷成分（Rb1、Rc、Rb2、Rb3、F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2）含量的变化情况，为三七茎叶的炮制［9］、开发利用及稀有人参皂苷的转化制备奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

DFY-600 型摇滚式高速万能粉碎机，温岭市林大机械有限公司；YXQ-LS-50SⅡ型立式压力蒸汽灭菌锅，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；1260型高效液相色谱仪，安捷伦科技（中国）有限公司；DHG-9240A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；SK7210HP 型电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；JA-20001 型电子天平，广州玉治仪器有限公司；C21-J01 型电磁炉，杭州九阳生活电器有限公司。

1.2 供试材料及药剂

干燥三七茎叶，于2021 年12 月购自云南省文山市，经云南中医药大学赵荣华教授鉴定为五加科人参属植物三七的干燥茎叶；甲醇、乙腈为色谱纯，购自Sigma-Alrdich 公司；金龙鱼植物调和食用油、纯净水，市售。

三七茎叶粉的制备：取干燥三七茎叶，粉碎，过80 目筛，待用。

1.3 高温高压蒸制

分别称取三七茎叶粉6 份，各3 g，加入纯净水30 mL，121 ℃分别处理5、10、20、40、80、120 min，取出后置于电热鼓风干燥箱中50 ℃干燥至恒定质量，捣碎成粉末，待用。

1.4 油炸

取干燥三七茎叶50 g，喷水润湿，静置2 h 至质地变软，分成3 份，分别放入烧开的油锅中炸1、2、3 min，捞出，沥干油。用研钵捣碎，再用石油醚萃取3 次，弃去石油醚部位，干燥余下部位后，置于电热鼓风干燥箱中50 ℃干燥至恒定质量，捣碎成粉末，待用。

1.5 九蒸九晒

取干燥三七茎叶300 g，喷水润湿，静置2 h 至质地变软，蒸锅隔水蒸2 h，而后铺于干净盘子中，于阳光下晒干。次日取前1 d 晒干的三七茎叶，喷水润湿，静置2 h 至质地变软，重复蒸制、晒干步骤。于第3、6、9 天结束时分别取100 g 干燥样品捣碎成粉末，待用。

1.6 微波处理

分别称取三七茎叶粉3 份，各3 g，在微波炉中火、中高火、高火条件下分别处理20 min，取出后放凉待用。

1.7 超声处理

分别称取三七茎叶粉3 份，各3 g，分别加入纯净水30 mL，超声60 ℃处理2、3、4 h，取出后置于电热鼓风干燥箱中50 ℃干燥至恒定质量，捣碎成粉末，待用。

1.8 单体皂苷的测定

1.8.1 液相条件 参照云南中医药大学中药学院药食资源开发实验室探索的能同时测定12 种单体皂苷的液相条件（专利号：CN114487231A）。

1.8.2 供试品溶液的制备 参照《中华人民共和国药典（一部）》（2020 年）三七含量测定中HPLC 测定皂苷含量方法制备供试品溶液。精密称取“ 1.3”至“1.7”制备的供试品粉末各0.3 g，加入甲醇于25 mL容量瓶中，定容置刻度，静置过夜，置于80 ℃水浴中保持微沸2 h，放凉并定容，最后用0.25 μm 有机滤膜过滤，即得供试品溶液。

1.9 总皂苷测定

1.9.1 标准曲线绘制 对照品溶液的制备：称取人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含1 mg 对照品的溶液，即得。精密吸取对照品溶液20、30、40、50、60、70、80、90、100 μL，分别置于敞口试管中，于80 ℃水浴锅中加热挥发去溶剂，加入5%香草醛冰醋酸试液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，充分混匀后60 ℃恒温水浴加热15 min，然后立即用冰水冷却5 min，再加入5 mL 冰醋酸，摇匀，消除气泡。以试剂作为空白对照。参照紫外-可见分光光度法（通则0401），在波长542 nm 处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标（Y），以标准品Rb1的溶液浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。

1.9.2 总皂苷测定 精密称定“1.3”至“1.7”各样品粉末0.3 g，加甲醇定容至25 mL 容量瓶中，超声处理30 min，冷却后用甲醇补足重量，即为供试品溶液。分别精密吸取25 μL，置于敞口试管中，于80 ℃水浴锅上加热挥发去溶剂，加入5%香草醛冰醋酸试液0.2 mL、高氯酸0.8 mL ，充分混匀后60 ℃恒温水浴加热15 min，然后立即用冰水冷却5 min，再加入5 mL 冰醋酸，摇匀，消除气泡。以试剂作为空白对照。参照紫外-可见分光光度法（通则0401），在波长542 nm 处测定其吸光度，将吸光度（OA）代入标准曲线，计算浓度。

2 结果与分析

2.1 单体皂苷含量

本研究中将Rb1、Rc、Rb2、Rb3这4 种皂苷称为原生皂苷，Rb1、Rc、Rb2、Rb3、F2、Rg3、Rk1、CK、Rh29 种单体皂苷合称为综合皂苷，F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2称为稀有皂苷。对“1.9.2”项下的各供试品溶液中的9种单体皂苷含量进行统计，结果见图1。

图1 不同热处理方式下三七茎叶9 种单体皂苷的含量

未经炮制的三七茎叶中检出F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2；经过炮制后，三七茎叶原生皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3含量均有不同程度的减小，而稀有人参皂苷F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2的含量有不同程度的升高。尤其是油炸2、3 min 后4 种原生皂苷全部消失，转化的稀有皂苷CK 和Rk1达到最高。但微波中高火处理20 min 后，原生皂苷全部消失，转化的稀有皂苷量也很少。

2.2 原生皂苷、稀有人参皂苷、综合皂苷含量变化

原生皂苷、转化的稀有人参皂苷、综合皂苷含量见图2。

图2 不同热处理方式下三七茎叶原生皂苷、稀有皂苷和综合皂苷含量的变化

由图2 可知，不同炮制方法的皂苷转化效率从大到小依次为油炸、微波中火、高温高压120 min、60 ℃超声处理。

2.3 标准曲线和总皂苷

标准曲线方程为Y=2.705 2X-0.025 7，R2=0.993 3，表明可信度较高。绘制的标准曲线见图3，总皂苷含量的测定结果见图4。

图3 标准曲线

图4 三七茎叶不同热处理后总皂苷含量的变化

由图4 可知，三七茎叶在九蒸九晒和微波高火处理后，总皂苷含量大幅下降，表明高温虽然会增加三七茎叶中稀有皂苷的含量，但同时会降低总皂苷含量；值得注意的是，在诸多炮制方法中，高温高压蒸制相比于其他炮制方法，对总皂苷含量的影响不减反增。

3 小结与讨论

三七茎叶中的原生皂苷在100 ℃以下很难发生转化，如60 ℃超声处理和传统的九蒸九晒处理，不仅不容易将原生皂苷转化为稀有人参皂苷，还会减少原生皂苷的含量。而在高温的条件下原生皂苷的转化效率较高，其中油炸1、2、3 min 时，稀有皂苷总含量均超过总皂苷含量的50%。但是，高温条件增加稀有皂苷含量的同时，会降低总皂苷的含量。而在众多热处理方式中，蒸制法不仅能增加稀有皂苷的含量，同时还可以增加总皂苷的含量。

原生皂苷Rb1容易转化生成稀有人参皂苷CK［16］，稀有人参皂苷CK 具有抗肿瘤［14］、降低血糖浓度［17］、改善糖尿病并发症［18］以及保护肝脏［14］的疗效，在临床上具有积极的治疗作用。本研究中，高温高压和油炸的热处理方式对Rb1转化为稀有人参皂苷CK 的转化相关系数R2为0.840 0，而Rb3的R2为0.920 0，说明可信度较高，这为油炸三七茎叶药膳及相关产品开发的工艺奠定了较好基础。