李红亚,吕园园,张丛敏,文雪花,崔海敏

(保定市第一中心医院 1.新生儿科;2.儿科;3.药剂科,河北 保定 071000)

近年来随着科技水平和医疗技术的发展,早产儿的生存率显著提高,但据统计早产儿患肺部疾病率呈上升趋势[1],新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)、支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)、肺动脉高压(persistent pulmonary hypertension of the newborn,PPHN)等肺部疾病在早产儿中的发生率也逐渐升高,因此探究其发病机制是防治早产儿肺部疾病的重要途径。多项研究认为早产儿肺部疾病的发生与微小RNA(miRNA)密切相关[2-4],降钙素原(procalcitonin,PCT)、淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是临床上肺部疾病重要的检测指标,在临床相关疾病的诊断中具有重要意义[5]。本研究将通过分析新生儿血清miR-328-5p、PCT、SAA、CRP水平与早产儿肺部疾病相关性,为临床上制定防治早产儿肺部疾病新策略提供参考思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2021年1月入住保定市第一中心医院的157例早产儿作为研究对象,其中无肺部疾病的新生儿38例(对照组),有肺部疾病的新生儿119例,并将患有肺部疾病的新生儿分为NRDS组(39例)、BPD组(40例)、PPHN组(40例)。纳入标准:出生后出现肺部疾病相关症状,符合《实用新生儿学》第4版有关肺部疾病的诊断标准[6];胎龄<37周的患儿;早期胸片检查提示存在支气管充气特征、白肺等状况。排除标准:具有重症先心病的早产儿(如大型房缺室缺、持续肺动脉高压、法洛四联症等)；合并肝、脑、肾等疾病的早产儿；合并遗传代谢疾病、其他器官畸形、重症感染等的新生儿。本研究经保定市第一中心医院伦理委员会的审核和批准，并获得研究对象监护人自愿签署的知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 血清样本的收集

除收集各组研究对象的临床资料(包括性别、出生体重等)外,在受试者出生后6h内,进行机械通气之前,采集外周血3mL放入抗凝管中,离心后(3 500r/min,15min,半径10cm)收集上清,保存至-80℃条件下待测。

1.2.2 血清miR-382-5p水平检测

实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清miR-382-5p表达水平,取血清样本200μL,提取RNA后检测质量和浓度,然后使用逆转录试剂盒(北京雅安达生物技术有限公司)将提取的RNA逆转录为模板DNA(cDNA),之后以U6为内参,将提取的cDNA进行RT-qPCR扩增(95℃ 10min,95℃ 20s,55℃ 20s,72℃ 30s,40个循环),然后将目的基因的CT值加入外参基因(cel-miR-39)进行归一化处理,采用2-ΔΔCt法计算miR-382-5p的相对表达水平。

1.2.3 血清PCT、SAA、CRP水平检测

取上清液,严格按照相关试剂盒操作说明书进行检测。使用酶联免疫吸附试验试剂盒检测CRP水平,采用上传发光法定量检测PCT水平,采用免疫荧光层析法检测SAA水平,其中CRP和SAA检测试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司,PCT试剂盒购自上海化邦生物科技有限公司。

1.3 观察指标

比较各组血清miR-382-5p表达及PCT、SAA、CRP水平,分析miR-382-5p与PCT、SAA、CRP水平的相关性,分析miR-382-5p表达水平与患肺部疾病早产儿临床特征的关系,分析miR-382-5p、PCT、SAA和CRP对早产儿肺部疾病的诊断价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 研究对象一般资料比较

与对照组比较,NRDS、BPD、PPHN组患儿的出生体重显著降低,差异具有统计学意义(F=57.771,P<0.05),其他资料见表1。

表1 研究对象一般资料比较

2.2 各组患儿血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP水平比较

与对照组比较,NRDS、BPD、PPHN组患儿血清miR-382-5p表达水平均显著降低,而PCT、SAA和CRP水平均显著上升,差异具有统计学意义(F值分别为216.047、83.917、183.164、124.093,P<0.05);NRDS、BPD、PPHN组患儿血清各指标比较差异无统计学意义,见表2。

表2 各组患儿血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP水平比较

2.3 miR-382-5p表达水平与PCT、SAA和CRP指标的相关性分析

Pearson法分析NRDS、BPD、PPHN组患儿血清中miR-382-5p表达水平与PCT、SAA和CRP水平的相关性,结果发现,miR-382-5p表达水平与PCT、SAA和CRP水平均呈负相关,差异有统计学意义(r值介于-0.583～-0.450之间,P<0.05),见图1。

图1 Pearson法分析miR-382-5p分别与NRDS(A)、BPD(B)、PPHN组(C)患儿血清PCT、SAA和CRP指标的相关性分析

2.4 miR-382-5p表达水平与患肺部疾病早产儿临床特征的关系

出生体重<1 400g的患肺部疾病早产儿血清中miR-382-5p表达水平低于出生体重≥1 400g的早产儿,差异具有统计学意义(t=10.173,P<0.05);而性别、胎龄、分娩方式和母胎是否患有胎膜早破miR-382-5p水平差异均无统计学意义(P>0.05),见表3。

表3 miR-382-5p表达水平与患肺部疾病早产儿临床特征的关系

2.5 Logistic回归分析血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP指标与早产儿患肺部疾病的关系

Logistic回归分析结果显示低表达miR-382-5p,PCT、SAA、CRP高水平及低出生体重均是早产儿患肺部疾病的独立危险因素(OR值分别为4.301、1.243、7.247、3.421、3.469,P<0.05),见表4。

表4 Logistic回归分析血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP与早产儿患肺部疾病的关系

2.6 血清miR-382-5p、PCT、SAA和CRP对早产儿肺部疾病的诊断价值

血清miR-382-5p的曲线下面积为0.858,敏感度和特异度分别为90.42%和85.63%,最佳截断值为0.72,差异具有统计学意义(Z=3.221,P<0.05);PCT曲线下面积为0.889,敏感度和特异度分别为93.36%和89.12%,最佳截断值为1.45μg/mL;SAA曲线下面积为0.945,敏感度和特异度分别为96.71%和90.34%,最佳截断值为10.12mg/L;CRP曲线下面积为0.890,敏感度和特异度分别为94.63%和92.17%,最佳截断值为12.13mg/L,见图2。

图2 miR-382-5p、PCT、SAA和CRP诊断早产儿肺部疾病的ROC曲线

3 讨论

随着科学的进步,越来越多的研究证实miRNA与早产儿肺部疾病具有相关性,miRNA的表达可作为早产儿肺部疾病的预后标志物[4,7]。miRNA与早产儿肺部疾病关系的研究对早产儿肺部疾病的早期预防和及时诊断都具有重要的意义。

3.1 患儿血清中miR-382-5p、PCT、SAA、CRP与疾病的关系

在本研究中,我们发现NRDS、BPD、PPHN组患儿血清中miR-382-5p表达水平显著低于对照组早产儿,提示miR-382-5p的表达失调可能与早产儿肺部疾病相关。同时还发现NRDS、BPD、PPHN组患儿血清中PCT、SAA和CRP水平均显著增加,且相关性分析结果发现NRDS、BPD、PPHN组患儿血清miR-382-5p表达水平与PCT、SAA和CRP水平均呈显著负相关。PCT、SAA和CRP是临床中的重要检测指标,其中PCT是由甲状腺C细胞分泌的降钙素前体物质,在机体内稳定性较好,但当机体产生炎症时,血清PCT水平显著上升,SAA、CRP与PCT类似,可以用于新生儿肺部疾病的诊断[8-9]。我们的结果提示,miR-382-5p的表达失调参与调控新生儿肺部相关疾病的发生,可能与提高PCT、SAA和CRP水平有关,分析其原因可能是miR-382-5p的表达靶向调控了血清PCT、SAA、CRP水平异常,诱发了肺部炎症进而导致新生儿肺部疾病的发生[10]。

3.2 患儿体重与血清中miR-382-5p、PCT、SAA、CRP之间的关系

本研究还发现出生体重<1 400g的患肺部疾病早产儿血清中miR-382-5p表达水平低于出生体重≥1 400g的早产儿,提示血清miR-382-5p表达与出生体重相关。已有研究表明早产儿的出生体重越小,肺部疾病的发生率就越高,我们的结果与其相一致[11-12]。进一步使用Logistic回归分析早产儿肺部疾病的独立因素,发现miR-382-5p、PCT、SAA、CRP及出生体重是早产儿肺部疾病的独立影响因素,此外ROC分析结果显示miR-382-5p对早产儿肺部疾病诊断的特异度和敏感度较好,说明血清miR-382-5p可作为辅助早产儿肺部疾病诊断的标志物。

综上,miR-382-5p在患肺部疾病的早产儿血清中低表达,PCT、SAA、CRP高表达,均与早产儿肺部疾病相关,可作为辅助早产儿肺部疾病诊断的临床标志物。