王跃臻, 吴燕林, 李 丹, 杜延芬, 马 君

(张家口市第一医院1乳腺外科, 2内分泌一科, 3呼吸与危重症一科, 4导管室, 河北 张家口 075000)

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,发病率在不断上升,严重威胁女性身体健康与生活质量[1]。化疗是目前有效治疗乳腺癌常用的方法,化疗在对癌细胞产生杀伤作用的同时,也会影响机体的正常细胞,许多患者在化疗后常会出现糖代谢紊乱现象,影响患者预后[2]。糖代谢紊乱会进一步导致周围神经病变(Peripheral neuropathy,PN)[3]。PN作为化疗后的严重并发症,缺乏有效治疗药物。有研究显示,微小RNA(miRNA)可调节细胞分化、增殖与凋亡等生物过程,是PN的重要生物标志物[4],糖尿病PN大鼠经治疗能升高miR-146a表达水平并降低炎性细胞因子分泌[5]。研究显示miR-146a可增强乳腺癌细胞对紫杉醇化疗药物的敏感性[6]。本研究选择出现糖代谢紊乱的乳腺癌患者,进一步分析miR-146a与化疗后出现PN的相关性,为乳腺癌患者化疗后早期预防PN提供依据。

1 资料与方法

1.1 试剂与材料血浆血清miRNA提取试剂盒,货号K157001,规格25 preps,SYBR Green PCR试剂盒。货号A25742,规格5mL,miRNA cDNA 链合成试剂盒,货号A28007,规格50reactions,以上试剂盒均从Thermo Fisher购买。

1.2 一般资料选择2019年10月至2021年10月在张家口市第一医院治疗的乳腺癌化疗伴糖代谢紊乱患者60例,年龄35 ～ 72岁。患者均统一接受紫杉醇化疗共4周期,每周期为21 d,在研究之前患者或其监护人签署了书面知情同意书。

1.3 方法对60例各肢体周围神经病变(Peripheral neuropathy,PN)患者进行检查,根据通用不良事件术语标准(Common terminology criteria adverse events, CTCAE)4.0版进行评估分级[7]。0级或1级患者被分为非PN组,≥2级患者被分为PN组。

1.3.1 实验室检查 患者禁食12 h,晨起空腹抽取肘部静脉血,测定空腹血糖与餐后2 h血糖,并借助OISA2000型肌电图仪器检测患者的神经传导速度(m/s),包括正中神经运动神经传导速度(Median motor nerve conduction velocity,MMCV)、腓总神经运动神经传导速度(Common peroneal nerve motor nerve conduction velocity,PMCV)、正中神经感觉神经传导速度(Median sensory nerve conduction velocity,MSCV)、腓总神经感觉神经传导速度(Common peroneal nerve sensory nerve conduction velocity,PSCV)。

1.3.2 RNA提取与miR-146a水平检测 收集患者空腹静脉血,离心后提取血清,借助血浆血清miRNA提取试剂盒从血清样本中分离出总RNA,使用miRNA cDNA 链合成试剂盒将总RNA逆转录为cDNA,使用SYBR Green PCR试剂盒进行扩增反应。结果使用2-△△Ct法做进一步计算。引物:miR-146a上游: 5′-GCCATATGAGAGAATTAG-ACCGG-3′,下游:-5′-CCCGGGTTGGTGCAGAA-CGTCGCA-3′。U6上游:5′-TGGGCCCAATGCC-GCGACCA-3′,下游:5’-TTGGCATATTGCGCTGTGATCT-3′。

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较两组患者空腹血糖、餐后2 h血糖、MMCV、PMCV、MSCV、PSCV差异有统计学意义(P<0.05),年龄、BMI差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组乳腺癌患者的一般资料比较/例(%)

2.2 两组患者血清miR-146a表达水平非PN组患者血清miR-146a为(1.00±0.24),PN组患者血清为(0.64±0.24),差异有统计学意义(t=6.07,P<0.001),见图1。

图1 miR-146a在两组乳腺癌患者中的表达水平

2.3 患者发生PN的影响因素分析非PN组患者空腹血糖为(7.89±1.41)mmol/L,餐后2 h血糖为(6.05±1.72)mmol/L,血清miR-146a为(1.00±0.24),PN组患者空腹血糖为(8.62±1.22)mmol/L,餐后2 h血糖为(8.33±2.51)mmol/L,血清miR-146a为(0.64±0.24)。Logistic回归分析结果显示, 空腹血糖、餐后2 h血糖与miR-146a表达水平是患者诱发PN的影响因素,miR-146a是诱发PN的独立危险因素。见表2。

2.4 miR-146a、空腹血糖与餐后2 h血糖的诊断价值分析ROC分析显示对于预测PN,miR-146a的敏感性(AUC=0.854,P<0.001)高于空腹血糖(AUC=0.650,P=0.049)与餐后2 h血糖(AUC=0.805,P<0.001)。见图2。

2.5 miR-146a表达水平与神经传导速度的相关性分析Pearson相关系数分析结果显示miR-146a表达水平与MMCV(r=0.509,P=0.002)、PMCV(r=0.383,P=0.023)、MSCV(r=0.416,P=0.013)、PSCV(r=0.440,P=0.008)均呈正相关。提示,miR-146a的表达水平与患者PN相关。见图3。

表2 患者发生PN的影响因素分析

图2 miR-146a、空腹血糖与餐后2 h血糖的诊断价值分析图

注:A,MMCV;B,PMCV;C,MSCV;D,PSCV:Pearson相关系数分析miR-146a表达水平。

3 讨论

妇科肿瘤引起PN的几率很高,可能与肿瘤转移压迫神经或与化疗药物的神经毒性等有关[8]。紫杉醇是化疗常见基础药物,有研究发现PN是紫杉醇化疗常见的不良反应[9]。该不良反应的发病机制可能与微管结构紊乱、线粒体受损、轴索变性、内环境中钙失衡等因素有关[10]。糖代谢紊乱是化疗后常见副作用[11]。一半以上糖尿病患者患有神经系统并发症[12]。本研究发现,发生PN的乳腺癌患者与未发生PN的乳腺癌患者的空腹血糖及餐后2 h血糖有差异,PN组的患者空腹血糖及餐后2 h血糖更高;Logistic回归分析显示,空腹血糖及餐后2 h血糖可作为预测PN的独立因素。原因可能是糖代谢异常导致能量代谢异常,葡萄糖未被大脑充分利用,进一步导致神经细胞轴突、鞘膜代谢失常,进而诱发神经系统病变[13]。

已有研究发现,miR-146a-5p靶向白介素-1受体相关激酶1抑制乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭[14];miR-146a与良好预后呈正相关,miR-146a通过抑制对称细胞分裂,在乳腺癌干细胞更新中发挥抑制作用[15];富含miR-146a的间充质细胞源性外泌体可有效治疗糖尿病PN[16];miR-146a在糖尿病PN中具有积极的正向改善作用[17]。本研究发现,在发生PN的乳腺癌患者中miR-146a表达显著降低,血清miR-146a可作为预测PN的因素。本研究还发现血清miR-146a与MMCV、PMCV、MSCV、PSCV呈正相关。说明血清miR-146a越高,神经传导速度越快。

综上所述,乳腺癌伴有PN患者血清miR-146a水平更低,神经传导速度更慢,血清miR-146a表达水平可作为预测乳腺癌术后化疗糖代谢异常患者诱发PN的生物指标。