陈志能 黄立卉 黄颖露 方杨冰 黄莹莹 杨 婷 李沁如 徐启键 夏 荃※

（1.岭南中药饮片有限公司，广东 佛山 528200；2.北京中医药大学人文学院，北京 100029；3.茂名市中医院药学部，广东 茂名 525000；4.广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）

陈皮为芸香科植物橘（CitrusreticulataBlanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，为中医常用的理气药，性温，味辛、苦，具有理气化痰、健脾燥湿的功效[1]。陈皮的炮制历史悠久，炮制品种众多，除陈皮外，还有麸炒陈皮、蒸陈皮等多个炮制品种，通过炮制可起到增强疗效、缓和燥性等作用。在《全国中药炮制规范》[2]及地方炮制规范中，还收载有陈皮炭这一炮制品种。陈皮炭这一炮制品种在多地的炮制规范中均有收载，但关于该炮制品的炮制作用，各炮制规范中的记载有所不同。陈皮炭的炮制作用在全国中药炮制规范中并未明确，在北京、四川、宁夏等地炮制规范的记载中，普遍认为陈皮炭具有止血、化痰的功效，常用于痰中带血等症的治疗[3-5]。但在《施今墨临床经验集》[6]《侍师襄诊漫笔（续5）》[7]等临床治疗经验中，认为陈皮炭亦具有较好的收敛止泻功效，故常用于腹泻、痢疾等病症的治疗。目前国内外已围绕陈皮开展了系列研究，但是陈皮炭的相关研究较少，且多围绕炒炭前后化学成分的含量变化和炮制工艺展开[8]，针对陈皮炭止泻作用的研究则更少，有必要对此进行深入研究。

炒炭法是中药炮制的常用方法之一，炒炭后，药物的收敛作用增强，可用于腹泻、出血等多种病症。明代陈嘉谟在《本草蒙筌》[9]中提到“凡药制造，贵在适中，不及则功效难求，太过则气味反失”，说明了炮制适度的重要性，传统炮制理论中要求的“炒炭存性”是炮制适度的典型体现。炒炭存性指药物在炒炭时，外部虽然炭化，但内部不应炭化，以保存其固有药性。只有准确掌握炮制程度，才能使饮片在临床应用中发挥最佳疗效。因此本研究以陈皮炭为研究对象，探究不同炒制程度陈皮炭对腹泻大鼠的治疗作用及对血清五羟色胺（5-HT）的影响，为陈皮炭的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物SPF 级雄性SD 大鼠36 只，体质量210～250 g，由广州中医药大学中药学院动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2018-0034，实验单位使用许可证编号：SYXK（粤）2019-0202；大鼠饲养于广州中医药大学中药学院SPF 级动物实验中心，室温19～22 ℃，相对湿度50%～60%，光照周期保持24 h 昼夜节律，正常自由饮水、进食。

1.1.2 实验药物（红）陈皮丝（佛山市南海北沙药材加工厂提供，产品批号：190311），经广州中医药大学中药学院夏荃教授鉴定为芸香科植物橘（Citrusreticulata Blanco）的干燥成熟果皮。

1.1.3 主要试剂及仪器蓖麻油（上海源叶生物科技有限公司，批号：S24344）；苏木素染色液、伊红染色液（Solarbio 科技有限公司）；大鼠五羟色胺ELISA 试剂盒（江苏酶免实业有限公司，批号：MM-044R1）；全自动酶标仪（上海宝予德科学仪器有限公司，型号：K3Plu6）；光学显微镜（日本OLYMPUS，型号：BX53）。

1.2 实验方法

1.2.1 陈皮炭的炮制

1.2.1.1 标准炭的制备参照《全国中药炮制规范》[2]进行炮制，取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦黑色，内部焦褐色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。

1.2.1.2 轻炭的制备取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦褐色，内部焦黄色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。

1.2.1.3 重炭的制备取适量陈皮置热锅内，用武火炒至表面焦黑色、内部焦黑色时，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干，即得。

1.2.2 陈皮炭水煎液的制备分别称取适量轻炭、标准炭、重炭，加入10 倍量水浸泡30 min，微沸煎煮30 min，滤过，滤渣加入10 倍量水煎煮30 min，滤过，合并2 次滤液，减压浓缩至含生药量为0.1 g/mL，置4 ℃冰箱存放。

1.2.3 分组与造模将36 只SD 大鼠随机分为6 组，每组6 只，即空白组、模型组、蒙脱石组（1 g·kg-1）、陈皮炭轻炭组（1 g·kg-1）、陈皮炭重炭组（1 g·kg-1）、陈皮炭标准炭组（1 g·kg-1）。空白组给予同体积的生理盐水，其他试验组均以蓖麻油1 mL·100 g-1灌胃造模[10]。1 h 后，空白组和模型组给予生理盐水，其他组给予相应药物，灌胃剂量均为1 mL·100 g-1。

1.2.4 大鼠稀便指数的测量灌胃给药后单鼠单笼，鼠笼底部铺置报纸，每1 h 换纸1 次，连续观察6 h，记录大鼠的腹泻潜伏期、稀便率、稀便等级等指标数据，并计算腹泻指数[11]作为评价大鼠腹泻情况的指标。粪便颗粒计数以每粒或每堆（不能分清粒数者）记为1 次，干便与稀便的区分以滤纸上有无污迹为标准。腹泻指数计算方法见表1，稀便级的测量方法见表2、表3。

表1 腹泻指数计算方法

表2 稀便级数表

表3 污迹直径的测量方法

1.2.5 大鼠结肠组织病理学观察取大鼠结肠组织，经4%多聚甲醛固定后，进行石蜡包埋、切片，并用苏木素-伊红（HE）染色，通过光学显微镜观察各组大鼠结肠病理学特征。

1.2.6 血清5-HT 水平的测定大鼠腹主动脉采血，离心半径10 cm、4500 r/min 离心15 min，取上清液，采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定血清中5-HT水平。

1.2.7 统计学方法采用SPSS 26.0 统计软件分析，实验所得数据以（）表示，组间比较采用重复测量方差分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般情况空白组大鼠生长发育正常，未出现异常表现。蓖麻油造模后，模型组大鼠出现明显腹泻表现，大便变软，出现稀便，大鼠肛周被稀便污染，部分大便呈稀糊状且夹有黏液，说明模型建立成功。给药后，各治疗组腹泻逐渐好转，水样便减少，大便逐渐成形。

2.2 陈皮炭对大鼠腹泻指数的影响模型组与空白组相比，腹泻指数显著增加（P ＜0.01），说明造模成功。与模型组相比，蒙脱石组腹泻指数降低（P ＜0.05），陈皮炭标准炭组腹泻指数显著降低（P ＜0.01）。结果显示，3 种程度陈皮炭中，标准炭止泻效果最优，重炭次之，轻炭效果较差。见表4。

表4 各组大鼠稀便指数结果 （）

表4 各组大鼠稀便指数结果 （）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01。

2.3 大鼠结肠组织HE 染色结果低倍光镜下观察空白组及模型组结肠HE 染色结果（×100）。空白组黏膜上皮完整，未见明显炎性浸润，腺体整体清晰，黏膜下层未见充血、水肿等炎症反应，肌层清晰可见。与空白组相比，模型组黏膜上皮出现坏死脱落，黏膜固有层可见大片炎症细胞排列紊乱簇集浸润，肠壁变薄。证明腹泻模型造模成功。

与模型组相比，各治疗组黏膜各层结构较为清晰，细胞排列较为整齐，肠黏膜炎性细胞浸润、溃疡等现象均有不同程度好转。见图1。

图1 大鼠结肠组织病理切片（×100）

2.4 腹泻大鼠体内血清5-HT 含量变化与空白组相比，模型组血清5-HT 含量显著上升（P ＜0.01），与模型组相比，蒙脱石组、陈皮炭标准炭组腹泻大鼠治疗后体内血清5-HT 含量显著下降，差异具有显著统计学意义（P ＜0.01）；陈皮炭重炭组与模型组相比，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。见表5。

表5 3 种不同炭化程度的陈皮炭对腹泻大鼠体内血清5-HT 含量变化的影响（，ng/L）

表5 3 种不同炭化程度的陈皮炭对腹泻大鼠体内血清5-HT 含量变化的影响（，ng/L）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.05。

3 讨论

炭药作为常见中药炮制品种之一，从古至今被广泛应用于临床。中药制炭可以改变药物固有性能，增强收敛止血、固涩止泻之功[12]。目前，有关炭药的研究多集中在“炭药止血”上[13]，而针对“炭药止泻”的研究较少。陈皮炭作为中药常用的炭药，在收敛止泻上具有良好的功效和广泛的医用价值，但目前相关研究较少。因此，对不同炒制程度陈皮炭的止泻作用进行研究，不仅有利于扩大陈皮炭的临床应用范围，还能够为“炒炭存性”的科学内涵提供新的思路。

本实验以陈皮为研究对象，清炒得3 种程度陈皮炭，通过造模大鼠腹泻模型，比较不同炒制程度陈皮炭的止泻效果，为陈皮炭治疗腹泻提供初步依据。结果显示，3 种程度陈皮炭中，正常炒制程度的陈皮炭能明显降低腹泻指数，止泻效果最优；而炒制不及或炒制太过的陈皮炭的腹泻指数则与模型组相比差异无统计学意义。

腹泻常由肠道黏膜损伤及各种炎性介质的释放引起，陈皮炭抗腹泻的作用机制可能与修复肠黏膜、抑制炎症介质的合成与释放有关。通过观察病理切片可知，模型组结肠淋巴细胞浸润肠黏膜、黏膜上皮细胞坏死脱落等炎症现象，治疗后黏膜各层结构较为清晰，细胞排列较为整齐，炎性现象均有不同程度好转，提示陈皮炭可有效改善大鼠肠黏膜炎症损伤，促进黏膜修复，具有一定的损伤修复作用。

目前，陈皮炭的止泻机制并不明确，研究[14]表明，5-HT 是胃肠道极为重要的神经递质之一，腹胀、泄泻等症状都可引起5-HT 释放，5-HT 升高能引起内脏感觉过敏，导致胃肠运动的收缩[15]。故本研究从大鼠血清中5-HT 的含量变化研究陈皮炭的止泻机制。结果显示，除陈皮炭轻炭组外，各治疗组腹泻大鼠治疗后血清5-HT 含量与模型组相比增多出现明显下降。陈皮炭标准炭组血清5-HT 含量最低，优于其他治疗组。提示陈皮炭的止泻作用可能与降低血清中5-HT 含量有关。

综上所述，陈皮炭对蓖麻油引起的腹泻具有抑制作用，其中标准炮制程度的陈皮炭效果最好，说明炒制不及或太过均会降低止泻效果。陈皮炭可改善大鼠肠黏膜炎症损伤，具有一定的损伤修复作用。陈皮炭止泻的作用机制之一可能是通过降低血清中5-HT 含量来减弱肠道蠕动。本试验主要对陈皮炭抗腹泻作用作初步研究，为陈皮炭治疗腹泻提供初步依据，关于陈皮炭是如何改善肠黏膜的炎症损伤，降低血清5-HT 水平，发挥抗腹泻作用，是否存在其他作用机制及途径，仍有待进一步深入研究。