俞岑明 石佑萌 刘怡 邰国梅

复发与转移是影响非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）预后不良的主要原因，脑转移是NSCLC 发生转移的常见部位，发生率可达25%～35%，是导致患者死亡的重要原因，早期诊断NSCLC 脑转移对于治疗与改善预后具有重要意义［1］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在调节肿瘤的复发与转移过程中发挥重要作用，LncRNA 通过调控肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭，促进肿瘤生长与转移［2］。LncRNA MALAT1在膀胱癌、乳腺癌、颅内动脉瘤等肿瘤中高表达，且与颅内动脉瘤血管内治疗后复发有关［3］。已有报道显示，LncRNA MALAT1发生脑转移的患者肺癌组织中表达水平显著高于没有发生脑转移患者的肺癌组织，且与患者预后有关，体外研究显示，LncRNA MALAT1通过诱导上皮间质转化促进肺癌的脑转移［4］。病理学与影像学诊断NSCLC 的转移具有一定的创伤性，血清标志物可有效避免此项缺陷［5］。本研究探讨血清LncRNA MALAT1对NSCLC 患者发生脑转移的诊断价值，以期为NSCLC 的治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019 年6 月至2021 年9 月南通大学附属肿瘤医院收治的100 例NSCLC 患者作为观察对象，其中男58 例，女42 例，平均年龄（62.20±10.70）岁，其中发生脑转移患者34 例（脑转移组）与未发生脑转移患者66 例（非脑转移组）。纳入标准：①经病理诊断为原发性NSCLC；②初次确诊；③患者临床资料完整。脑转移诊断标准［6］：出现颅高压症状如头痛、恶心及呕吐等，运动、感觉、视力及认知功能障碍，局灶性无力、语言缺失、注意力下降等，有一种或同时出现几个症状，经头部CT 或MRI 检查提示脑转移者，无症状者由2 名以上肿瘤专科医生根据CT 或MRI 确认。排除标准：①合并其部位原发性恶性肿瘤患者；②合并支气管扩张等其他呼吸系统疾病患者；③血液系统疾病及免疫系统疾病患者；④妊娠哺乳期女性。选择同期在本院健康体检人员50 名作为对照组，其中男28名，女22 名，平均年龄（61.50±10.20）岁。本研究通过医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。

1.2 研究方法

实时荧光定量PCR 法（Real-time quantification PCR，RT-qPCR）检测血清LncRNA MALAT1表达：采集患者入院时空腹静脉血5 mL，以3 500 r/min 的转速离心10 min 后（离心半径10 cm），分离血清-80℃保存待测，采用qRT-PCR 实验检测血清LncRNA MALAT1表达水平，RNA 提取试剂（R0016，上海碧云天生物科技有限公司）提取血清总RNA，分析RNA 浓度与纯度后，取2 μg RNA 逆转录合成cDNA，再进行PCR 反应，其中逆转录合成试剂盒（D7168M）、SYBR Green qPCR Mix 试剂（D7260）均购自上海碧云天生物科技有限公司，LncRNA MALAT1及GAPDH 引物购自上海生工生物工程有限公司，LncRNA MALAT1上游引物（5′-3′）：GACGGAGGTTGAGATGAAGC，下游引物（5′-3′）：ATTCGGGGCTCTGTAGTCCT；GAPDH 上游引物（5′-3′）：AACGGGAAGCTTGTCATCAATGGAAA，下游引物（5′-3′）GCATCAGCAGAGGG GGCAGAG。反应结束后，以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算LncRNA MALAT1相对表达量。

1.3 统计学分析

采用SPSS 25.0 统计分析；实验数据符合正态分布以（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验；计数资料使用n（%）表示，组间比较行卡方检验；ROC 曲线分析血清LncRNA MALAT1对NSCLC 患者发生脑转移的预测价值；Cox 回归模型分析影响NSCLC 患者发生脑转移的危险因素；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑转移组与非脑转移组NSCLC 患者临床资料比较

脑转移组有吸烟史、病理类型为腺癌、TNM 分期为Ⅲ+Ⅳ及有EGR突变的患者比例显著高于非脑转移组患者，差异有统计学意义（P＜0.05），脑转移与非脑转移组患者年龄、性别、肿瘤直径比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 脑转移与非脑转移组NSCLC 患者临床资料比较［n（%）］Table 1 Comparison of clinical data of NSCLC patients with brain metastases and non-brain metastases［n（%）］

2.2 对照组、脑转移与非脑转移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表达水平比较

与对照组比较，脑转移组与非脑转移组患者血清LncRNA MALAT1表达水平显著升高，差异有统计学意义（t=30.912，、21.718，均P＜0.001）；与非脑转移组比较，脑转移组患者血清LncRNA MALAT1表达水平显著升高，差异有统计学意义（t=30.912、21.718，均P＜0.001）。见表2。

表2 对照组、脑转移与非脑转移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of serum LncRNA MALAT1 expression levels in control group，brain metastases and non-brain metastases NSCLC patients（±s）

表2 对照组、脑转移与非脑转移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of serum LncRNA MALAT1 expression levels in control group，brain metastases and non-brain metastases NSCLC patients（±s）

注：与对照组比较，aP 均＜0.05；与非脑转移组比较，bP＜0.05。

组别对照组非脑转移组脑转移组F 值P 值n 50 66 34 LncRNA MALAT1 1.01±0.15 1.97±0.32a 2.63±0.51ab 254.276 0.000

2.3 血清LncRNA MALAT1 对NSCLC 患者发生脑转移的预测价值

血清LncRNA MALAT1预测NSCLC 患者发生脑转移的曲线下面积为0.879（95%CI：0.826～0.921，P＜0.001），截断值为2.28，敏感度为0.84，特异性为0.83。见图1。

图1 预测价值Figure 1 Predictive value

2.4 影响NSCLC 患者发生脑转移Cox 回归分析

以NSCLC 患者是否发生脑转移为因变量（是=1，否=0），将表1 中有差异变量带入Cox 回归模型，赋值，吸烟史（有=1，无=0）、病理类型（腺癌=1，鳞癌=0）、TNM 分期（Ⅲ+Ⅳ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0）、EGR突变（是=1，否=0）、LncRNA MALAT1（≥2.28=1，＜2.28=0）Cox 多因素回归分析，结果显示，病理类型为腺癌、TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期、EGR突变、LncRNA MALAT1≥2.28 是影响NSCLC 患者发生脑转移的危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响NSCLC 患者发生脑转移Cox 回归分析Table 3 Cox regression analysis of brain metastases affecting NSCLC patients

3 讨论

发生脑转移的NSCLC 患者预后较差，寻找发生脑转移的危险因素对于改善患者预后具有重要意义［7］。研究表明，LncRNA 的异常表达与肿瘤的发生、转移密切相关，LncRNA 可在外周血、组织液中稳定表达，成为肿瘤早期鉴别诊断、预后评估的标志物［8］。LncRNA MALAT1与糖尿病、冠心病、肺动脉高压、阿尔茨海默病、脓毒症、肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关［9］。研究证实，LncRNA MALAT1在NSCLC 细胞中表达水平升高，抑制LncRNA MALAT1表达可通过调控miR-125a-5p 及其靶基因Rab25 表达，抑制肺癌细胞的增殖，降低细胞对厄洛替尼的耐药能力［10］。肺癌细胞中，抑制LncRNA MALAT1表达可通过调控miR-205表达，抑制肺癌细胞的增殖与迁移，还可抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长［11］。本研究检测NSCLC 患者血清中LncRNA MALAT1表达，结果显示，脑转移组与非脑转移组患者血清LncRNA MALAT1表达水平显著高于对照组，且脑转移组患者血清LncRNA MALAT1表达水平显高于非脑转移组，提示LncRNA MALAT1高表达与NSCLC 患者发生脑转移有关，可能成为预测NSCLC 患者发生脑转移的标志物。已有报道显示，外周血LncRNA MALAT1对NSCLC 有一定诊断价值，血清中LncRNA MALAT1检测综合诊断效能高于血浆，且在肺鳞癌中的诊断效能优于腺癌［12］。本研究通过ROC 曲线分析发现，血清LncRNA MALAT1预测NSCLC 患者发生脑转移的曲线下面积为0.879，截断值为2.28，敏感度为0.84，特异性为0.83，提示检测血清LncRNA MALAT1水平在临床上对NSCLC 患者发生脑转移的诊断具有一定指导意义。

肺腺癌是NSCLC 患者发生脑转移的危险因素，肺腺癌主要以浸润式生长为主，发生转移的可能性较大，已有研究显示，腺癌在中枢神经系统转移的概率较高［13］。EGFR 突变是NSCLC 患者发生脑转移的另一个危险因素，EGFR 在调控恶性肿瘤细胞的增殖、分化等过程中发挥重要作用，NSCLC患者肿瘤组织存在EGFR 突变，且多见于女性、无吸烟史、肺腺癌患者［14］。另有研究显示，年龄、性别、吸烟史等也与NSCLC 患者发生脑转移有关［15］。本研究经Cox 多因素回归分析结果显示，病理类型为腺癌、TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期、EGR突变是影响NSCLC 患者发生脑转移的危险因素，与以往报道结果类似。本研究经Cox 回归分析还显示，LncRNA MALAT1≥2.28是影响NSCLC患者发生脑转移的危险因素，推测其可能的原因是LncRNA MALAT1调控肺癌细胞增殖与转移有关［16］。

综上所述，NSCLC 发生脑转移患者血清LncRNA MALAT1表达水平升高，是影响NSCLC 患者发生脑转移的危险因素，可能成为预测NSCLC患者发生脑转移的辅助标志物，具有一定临床应用价值。