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宫腔粘连组织中miR-22、TGFβR1 表达与三维能量超声参数的相关性及临床意义

2022-12-23张友王琮杨燕

分子诊断与治疗杂志 2022年11期
关键词:宫腔内膜调控

张友 王琮 杨燕

宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是子宫内膜基底层破坏后出现的子宫壁之间的粘连,多见于人工流产、刮宫等宫腔操作后,会导致月经异常以及不孕。IUA 的常用治疗手段是宫腔镜下IUA 松解术或切除术,虽然手术操作的技术不断进步,但手术操作仍不可避免会造成子宫内膜损伤并导致术后再次发生IUA[1-2]。细胞外基质沉积是IUA 发生发展的重要生物学特征,转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是调控细胞外基质代谢的关键细胞因子,其与TGF-β 受体1(TGF-β receptor 1,TGFβR1)结合后能够促进细胞外基质的水解和异常沉积,进而促进组织纤维化及粘连[3]。国内一项研究证实,微小RNA(microRNA,miR)-22 是TGFβR1的上游调控分子,过表达miR-22能够抑制TGFβR1并改善IUA大鼠的组织粘连[4]。为了进一步认识miR-22靶向调控TGFβR1在IUA 发病中的作用,本研究将以IUA 患者为对象,通过三维能量超声评价组织粘连程度,分析IUA 组织中miR-22、TGFβR1表达与三维能量超声参数的相关性及临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2018 年1 月至2020 年12 月于安徽理工大学第一附属医院接受IUA 分离术的48 例IUA患者作为IUA 组,纳入标准:①符合指南中IUA 的诊断[5];②存在月经异常和周期性腹痛;③接受宫腔镜手术;④有妊娠需求。排除标准:①合并生殖系统先天畸形;②合并多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症等妇科疾病;③合并恶性肿瘤、自身免疫性疾病等。选择54 例接受宫腔镜检查的输卵管性不孕患者作为对照组。IUA 组患者年龄21~44 岁、平均(31.25±5.49)岁,体质量指数(23.12±6.23)kg/m2;对照组患者年龄21~42 岁、平均(28.71±5.33)岁,体质量指数(22.89±6.82)kg/m2。两组间一般资料的比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究取得医院伦理委员会批准,获得入组患者知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1miR-22、TGFβR1表达水平的检测

取IUA 组和对照组的子宫内膜组织,采用总RNA 提取试剂盒提取组织中的RNA,采用反转录试剂盒将RNA 反转录为cDNA,采用荧光定量检测试剂盒对cDNA 中的miR-22、TGFβR1进行荧光定量PCR 检测。检测的反应体系如下:cDNA 1 μL、试剂盒内反应混合液10 μL、上下游引物各0.6 μL、去离子水7.8 μL;反应程序为:95℃预变性3 min 后95℃15 s、特异性退火温度25 s、72℃30 s,重复40次。所用基因的引物序列及特异性退火温度见表1。完成反应后得到循环曲线及循环阈值(Cycle threshold,Ct),以β-ɑctin为内参、按照公式2-ΔΔCt计算miR-22、TGFβR1的相对表达水平。

表1 miR-22、TGFβR1、β-ɑctin 的引物序列及退火温度Table 1 Primer sequence and annealing temperature of miR-22,TGFβR1,β-ɑctin

1.2.2 子宫内膜三维能量超声检查

采用三维多普勒超声仪对两组患者进行三维能量超声检查,探头频率3~9 MHz,首先进行常规超声探查,显示子宫最大纵切面后固定该平面,启动能量多普勒模式,取样框比子宫略大、将子宫完全包绕,启动三维功能键并勾勒子宫内膜轮廓,检测体积(Volume,V)、血管指数(vascular index,VI)、血流指数(flow index,FI)、血管血流指数(vascular flow index,VFI)。

1.2.3 IUA 严重程度及预后的评估

参照指南[5]中Nasr 宫腔粘连分级评估IUA 严重程度,从峡部粘连、膜状粘连、致密粘连、输卵管开口、管状宫腔、月经类型、孕产史进行评分,计算总得分,0~4 分为轻度、5~10 分为中度、11~22 分为重度。根据妊娠情况评价IUA 患者的预后,共随访2 年。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0 软件进行统计学处理,计量资料以(±s)表示,采用独立样本t检验进行两组间比较,采用Pearson 检验进行相关性分析,采用K-M 曲线及log rank 检验分析累积妊娠率的差异。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IUA 组与对照组miR-22、TGFβR1 表达水平的比较

IUA 组局部组织中miR-22的相对表达水平低于对照组,TGFβR1的相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 IUA组与对照组miR-22、TGFβR1表达水平的比较(±s)Table 2 Comparison of miR-22 and TGFβR1 expression levels between IUA group and control group(±s)

表2 IUA组与对照组miR-22、TGFβR1表达水平的比较(±s)Table 2 Comparison of miR-22 and TGFβR1 expression levels between IUA group and control group(±s)

组别IUA 组对照组t 值P 值n 48 54 miR-22 0.66±0.17 1.00±0.22 5.489 0.000 TGFβR1 1.29±0.25 1.00±0.28 8.653 0.000

2.2 IUA 组miR-22、TGFβR1 表达水平的相关性

IUA 组局部组织中miR-22的相对表达水平与TGFβR1的相对表达水平呈负相关,相关系数为-0.4146。见图1。

图1 IUA 组miR-22、TGFβR1 表达水平的相关性Figure 1 Correlation of miR-22 and TGFβR1 expression level in IUA group

2.3 IUA 组中不同严重程度患者miR-22、TGFβR1表达水平的比较

IUA 组中中重度患者局部组织中miR-22的相对表达水平低于轻度患者,TGFβR1的相对表达水平高于轻度患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 IUA 组中不同严重程度患者miR-22、TGFβR1 表达水平的比较(±s)Table 3 Comparison of miR-22 and TGFβR1 expression levels among patients with different severity(±s)

表3 IUA 组中不同严重程度患者miR-22、TGFβR1 表达水平的比较(±s)Table 3 Comparison of miR-22 and TGFβR1 expression levels among patients with different severity(±s)

严重程度轻度中重度t 值P 值n 26 22 miR-22 0.75±0.22 0.55±0.19 3.171 0.003 TGFβR1 1.10±0.24 1.52±0.32 4.640 0.000

2.4 IUA 组与对照组三维能量超声参数的比较

IUA 组患者子宫内膜的三维能量超声参数V、VI、FI、VFI 均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见图2、表4。

图2 宫腔粘连的超声图像Figure 2 ultrasonic image of intrauterine adhesion

表4 IUA 组与对照组三维能量超声参数的比较(±s)Table 4 Comparison of three-dimensional energy ultrasonic parameters between IUA group and control group(±s)

表4 IUA 组与对照组三维能量超声参数的比较(±s)Table 4 Comparison of three-dimensional energy ultrasonic parameters between IUA group and control group(±s)

组别IUA 组对照组t 值P 值n 48 54 V(cm3)3.41±0.62 4.49±0.77 7.739 0.000 VI(%)3.74±0.89 4.71±0.94 5.333 0.000 FI 23.09±4.51 26.65±6.44 3.195 0.000 VFI 1.16±0.25 1.49±0.31 5.870 0.000

2.5 IUA 组miR-22、TGFβR1 表达水平与三维能量超声参数的相关性

IUA 组患者局部组织中miR-22的相对表达水平与V、VI、FI、VFI 呈正相关,TGFβR1的相对表达水平与V、VI、FI、VFI 呈负相关。见表5。

表5 IUA 组miR-22、TGFβR1 表达水平与三维能量超声参数的相关性Table 5 Correlation between miR-22,TGFvR1 expression level and three-dimensional energy ultrasonic parameters in IUA group

2.6 IUA 组miR-22、TGFβR1 表达水平与预后的关系

IUA 组中不同miR-22、TGFβR1表达水平的患者累积妊娠率的K-M 曲线见图3。经log-rank 检验:IUA 组中miR-22表达≥中位数患者的2 年累积妊娠率高于miR-22表达<中位数患者,TGFβR1表达≥中位数患者的2 年累积妊娠率低于TGFβR1表达<中位数患者,差异有统计学意义(P<0.05)。

图3 K-M 曲线Figure 3 K-M curve

3 讨论

IUA 分离术及切除术是治疗IUA 的常用手段,能够有效分离或清除粘连的宫腔组织,但手术操作也不可避免会造成子宫内膜损害,术后IUA复发的风险较高[6-7]。

成纤维细胞过度增殖、纤维结缔组织异常增生是与IUA 发生密切相关的生物学环节,参与该环节的关键调控分子是TGF-β。TGFβR1是介导TGF-β 生物学效应的膜受体,能够招募下游Smad3 并促进胶原蛋白、层黏连蛋白合成,进而导致组织纤维化的发生[8-10]。一项动物实验通过刮宫术建立了IUA 大鼠模型,IUA 大鼠内膜组织中TGFβR1的表达水平明显增加[4],提示TGFβR1的高表达与IUA 的发生有关。本研究对IUA 患者进行了检测,与正常子宫内膜组织比较,IUA 子宫内膜组织中TGFβR1的表达水平增加,与上述研究结果一致。进一步通过Nasr 宫腔粘连分级评估IUA 严重程度并分析可知:中重度IUA 患者子宫内膜组织中TGFβR1的表达水平高于轻度IUA 患者,结果表明TGFβR1表达增加与IUA 的发生及粘连程度的加重有关。

TGFβR1表达的上游调控机制复杂,其中miRs能够在转录后水平调控基因表达[11],多项研究证实TGFβR1是miR-22的下游靶基因之一[12-13]。本研究对IUA 患者进行了检测,与正常子宫内膜组织比较,IUA 子宫内膜组织中miR-22的表达水平降低,与IUA 大鼠中miR-22减轻粘连的生物学作用吻合;同时,miR-22的表达与TGFβR1呈负相关,中重度IUA患者子宫内膜组织中miR-22的表达水平低于轻度IUA 患者。以上结果表明miR-22表达降低与IUA 的发生及粘连程度的加重有关,并且miR-22可能通过靶向调控TGFβR1的参与IUA 的发病。

超声检查是临床诊断IUA 并评估病情的常用手段,三维能量超声是新的超声检查技术,相关的超声特征包括宫腔缩小、子宫内膜容积减小以及粘连组织中血流灌注不足[14]。随着IUA 病情加重,上述超声变化更加显著。本研究对IUA 患者进行了三维能量超声检查,结果显示:与对照组比较,IUA 患者子宫内膜的V、VI、FI、VFI 均降低,符合IUA 发病过程中子宫内膜容积减小以及血流灌注不足的特征[14]。进一步在IUA 患者中进行相关性分析可知:miR-22的表达水平与超声参数V、VI、FI、VFI 呈负相关,TGFβR1的表达水平与超声参数V、VI、FI、VFI 呈正相关,表明IUA 发病过程中miR-22及TGFβR1表达的变化会加重子宫内膜容积减小以及血流灌注不足。

miR-22及其靶向调控的TGFβR1参与成纤维细胞增殖及组织纤维化的调控,两者异常表达可能在术后促进子宫内膜纤维化的发生、严重者出现IUA 复发,进而影响妊娠。本研究对IUA 患者的妊娠情况进行了随访,分析其与miR-22、TGFβR1表达的关系,结果显示,miR-22表达降低、TGFβR1表达增加会导致累积妊娠率显著降低。

综上所述,IUA 组织中miR-22低表达、TGFβR1高表达存在相关性,同时两者表达的变化与粘连加重、子宫内膜体积缩小及血流灌注减少、妊娠预后不良有关。

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