刘洪玮，陈蕾

（潍坊医学院附属医院麻醉科1，血液科2，山东 潍坊 261031）

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是常见的消化系统恶性肿瘤，是全球第3 大常见男性癌症，第2大常见女性癌症[1]。随着饮食结构和生活习惯的变化，近年来我国城乡居民CRC的发病率呈持续性升高，已成为我国发病率较高的恶性肿瘤之一[2]。截至2018 年，我国结直肠癌患者数量已上升至第2 位，占癌症总病例数12.2%，发病率在我国恶性肿瘤中为第5位[3]。结直肠癌细胞的侵袭和转移是引起患者死亡的重要因素，其中黏附分子在肿瘤细胞侵袭和转移中发挥重要作用。细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是免疫球蛋白超家族中的成员，是一种重要的黏附分子，主要参与肿瘤细胞之间以及肿瘤细胞与基质细胞之间的黏附，在肿瘤发生发展与转移中发挥重要作用[4]。本研究采用免疫组化法研究ICAM-1 在结直肠癌组织中的表达状况，并结合临床资料探讨其与患者临床病理指标的关系，以期为结直肠癌的诊断和治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1 月-8 月潍坊医学院附属医院病理科保存的手术切除的结直肠癌组织标本30 例，患者术前未接受放化疗，临床资料完整，排除术后发生感染或肠瘘等并发症的病例。其中，男18例，女12 例，年龄40～76 岁，中位年龄59 岁。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 方法 每例标本同时取距癌组织边缘2 cm 处的癌旁组织做对照。组织标本经10%甲醛固定，石蜡包埋后行连续切片，片厚4 μm。免疫组化检测试剂盒购自北京博奥森公司，小鼠抗人ICAM-1 单克隆抗体购自CST 公司。组织切片常规脱蜡至水，于枸橼酸钠缓冲液（pH 6.0）中微波行抗原热修复30 min，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，山羊血清阻断非特异性反应，滴加小鼠抗人ICAM-1 单抗（稀释度1∶200），4 ℃过夜，37 ℃复温1 h 后滴加生物素标记的二抗工作液，再滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液，DAB 显色，自来水冲洗，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，最后中性树脂封片并镜检。

1.3 结果判断 所有切片均由病理科医师阅片，按照标本染色强度打分，其中0 分为无色，1 分为淡黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色；再按照阳性细胞所占总细胞的百分比打分：阳性细胞占0～24%为1分，阳性细胞占25%～49%为2 分，阳性细胞占50%～74%为3 分，阳性细胞≥75%为4 分。将染色强度和阳性细胞百分比进行相乘：＜2 分为阴性表达（-）；3～4 分为弱阳性表达（+）；6～8 分为中等阳性表达（++）；9～12 分为强阳性表达（+++）。在统计分析时将（-）与（+）归为阴性表达，（++）及（+++）归为阳性表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS 25.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ICAM-1 在结直肠癌组织中的表达 ICAM-1 呈散在分布的淡黄色或棕黄色颗粒，主要定位于细胞膜上，在胞浆和间质中也有表达，阴性对照片中未见黄色颗粒。ICAM-1 在结直肠癌组织中的阳性表达率为70.00%（21/30），在癌旁组织中阳性率为33.33%（10/30），差异有统计学意义（χ2=9.365，P=0.025），见表1、图1。

图1 ICAM-1 在结直肠癌组织中的表达（SP 法×400）

表1 ICAM-1 在结直肠癌组织中的表达[n（%）]

2.2 ICAM-1 表达与患者临床病理学的关系 ICAM-1在肿瘤淋巴结转移组织中的表达率高于无淋巴结转移组织，差异有统计学意义（P＜0.05），但不同性别、年龄、组织学类型、病理分级以及TNM 分期间ICAM-1 表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 ICAM-1 表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系[n（%）]

表2 （续）

3 讨论

细胞黏附分子是众多介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互接触和结合分子的统称，以受体-配体结合的形式发挥作用，不但参与肿瘤细胞之间的黏附，也参与肿瘤细胞与基质细胞、血管内皮细胞之间的黏附，在肿瘤发生、发展和转移中发挥重要作用。另外，黏附分子也是机体抗肿瘤免疫应答的重要参与分子，在免疫细胞杀伤肿瘤的过程中发挥重要作用，深入研究黏附分子与肿瘤的关系具有重要意义[5]。

ICAM-1 是一种细胞表面糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，配体是淋巴细胞功能相关抗原1和巨噬细胞分化抗原1，受炎症刺激而表达上调，广泛参与细胞迁移、免疫细胞的活化等生物学活动，在组织结构的维持、炎症反应、伤口修复等方面发挥重要作用。ICAM-1 与配体结合后，通过其胞浆结构域激活下游接头蛋白分子，传递细胞信号。ICAM-1 还可通过激活Rho-GTP 酶、Src 激酶以及PKC 调节细胞内Ca2+水平，维持细胞屏障的作用。此外，ICAM-1可调节不同状态下细胞的通透性，正常状态下，ICAM-1 通过PKC 来控制内皮细胞的通透性，而在炎症状态下，ICAM-1 激活Src 激酶增加内皮细胞通透性。另ICAM-1 可通过细胞因子调节血管内皮细胞通透性，人脐静脉内皮细胞ICAM-1 可刺激IL-8和CCL5的释放，降低内皮细胞的通透性。郎平平等[6]研究表明，ICAM-1 还可通过肌球蛋白轻链激酶下调F-actin的表达，显著增加肠上皮的通透性，而肠上皮细胞表面的ICAM-1 可通过CD44 激活ERK1/2 激酶，调节肌动蛋白细胞骨架，激活金属蛋白酶破坏上皮屏障功能，增加上皮细胞通透性，促进炎症反应发生。

目前对ICAM-1 在肿瘤发生发展过程中的作用尚存在争议。有观点认为[7-9]，ICAM-1 有助于肿瘤细胞吸附于血管内皮细胞表面，促进肿瘤细胞的侵袭与转移，在肿瘤发生过程中起到促进作用。例如，ICAM-1 可以促进骨肉瘤细胞的侵袭和转移[10]；阻断ICAM-1的信号通路，可以降低胶质母细胞瘤细胞和乳腺癌细胞的侵袭与转移能力[11，12]。但也有观点认为，ICAM-1 可以促进免疫细胞杀死肿瘤细胞，从而发挥抗肿瘤作用。Budinsky AC等[13]研究证实，乳腺癌细胞中的ICAM-1的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞，且ICAM-1 在乳腺癌细胞中呈低水平表达。另有研究证实[14]，ICMA-1 可通过激活NK 细胞的ADCC 作用，杀伤骨髓瘤细胞。单核细胞可上调尤文肉瘤表面ICAM-1 和MHCI 类分子的表达水平，增强细胞毒性T 细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤[15，16]。国内外关于ICAM-1 在结直肠癌发生发展中的作用报道较少。课题组前期通过RNAi 技术构建ICAM-1 慢病毒干扰载体，可显著下调乳腺癌细胞中ICAM-1的表达水平，进一步研究证实下调ICAM-1 表达可显著抑制乳腺癌MCF-7 细胞的侵袭转移能力[17，18]。本研究采用免疫组化技术检测结直肠癌组织中ICAM-1的表达状况，结果显示ICAM-1 呈散在分布的淡黄色或棕黄色颗粒，主要定位于细胞膜上，在胞浆和间质中也有表达，阴性对照片中未见黄色颗粒。ICAM-1 在结直肠癌组织中的阳性表达率为70.00%（21/30），在癌旁组织中阳性率为33.33%（10/30），差异有统计学意义（P＜0.05），与既往研究结果一致[19-21]。此外，ICAM-1 在肿瘤淋巴结转移组织中的表达率高于无淋巴结转移组织，差异有统计学意义（P＜0.05），但不同性别、年龄、组织学类型、病理分级以及TNM 分期间ICAM-1 表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05），提示ICAM-1 可能参与结直肠癌淋巴结转移，检测ICAM-1 可能对早期发现结直肠癌以及预测肿瘤细胞有无淋巴结转移有重要作用。有研究发现[22]，ICAM-1 表达水平与结直肠癌患者TNM 分期呈正相关，而本研究发现ICAM-1 与肿瘤患者的TNM 分期无相关性，这可能与不同课题组所采用不同的抗体检测ICAM-1 不同抗原肽段有关，或与本课题组织样本量偏小有关。

综上所述，ICAM-1 在结直肠癌组织中高表达，且与患者淋巴结转移有关，提示ICAM-1 可能在结直肠癌的发生与发展过程中起重要作用。