原发性肝癌(PLC)是最为常见的肿瘤之一，全球每年约新增84.1万患者

。据报道，我国作为肝病大国，每年新增病例和死亡患者均占全球总数的50%，给我国人民造成严重的经济压力和生活负担。微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码RNA分子，其可通过靶向特定的靶基因表达参与生命活动的调节

。近年来研究发现，miRNA在PLC组织中异常表达，与肿瘤细胞增殖、肿瘤细胞转移及预后等密切相关

。微小RNA-652-3P(microRNA-652-3P，miR-652-3P)已被证实在纤维化过程中起着重要作用

。研究发现，患有肝纤维化的患者容易发展为肝硬化，持续存在的肝纤维化可导致肝硬化，甚至肝癌

。跨膜p24运输蛋白5(TMED5)是一种跨膜蛋白，属于p24家族。Zheng等

研究显示，在肝癌细胞中，过表达的TMED3可促进癌细胞迁移和侵袭。miR-652-3P和TMED5在PLC中的表达尚未见文献报道，本研究检测miR-652-3P和TMED5在PLC中的表达并分析二者在PLC中的临床意义，为miR-652-3P和TMED5评估患者预后奠定基础。

生物医药产业的监管手段过于单一，完全依靠监管部门进行监管，没有发挥民众和媒体的监管作用；缺乏有效性，主要对生物医药产品的外包装、产品标识和名称等外在问题进行监管，而很少关注其生产过程和生产技术等内在问题，导致很多“金玉其外，败絮其中”的生物医药产品流入市场；以抽样监管为主，无法全面监管所有生物医药产业和生物医药产品生产和销售的全过程。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2015年12月至2018年12月于本院行手术治疗的PLC患者82例为研究对象，其中男48例，女34例；年龄37～74岁，平均(56.08±12.11)岁。取手术切除的肝癌组织为观察组，同时选取手术切除的边缘正常组织(距离癌组织>5 cm)为对照组。所有患者肝癌组织标本均经病理科两位以上医师确诊为PLC。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：①PLC患者符合相关诊断标准

；②患者术前未接受任何放化疗或药物治疗；③患者临床资料完整。排除标准：①患者并发其他恶性肿瘤；②患有呼吸衰竭或心肌梗死者；③继发性肝癌患者；④肾功能异常患者。以上标本收集均取得患者的同意，也通过本院伦理委员会批准，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.3 主要试剂及仪器 TRIzol试剂购自武汉科昊佳生物科技有限公司；SYBR®Green Quantitative RT-qPCR Kit，PrimeScript RT reagent Kit均购自日本Takara公司；CFX96 qRT-PCR仪购自德国Bio-Rad公司。

1.4.2 检测PLC组织中miR-652-3P和TMED5 mRNA表达水平 从-80℃冰箱中取出样本，使用TRIzol试剂提取组织中总RNA，依据cDNA反转录试剂盒操作步骤逆转录RNA得到cDNA，采用实时荧光定量PCR仪对miR-652-3P、TMED5 mRNA及内参U6、β-actin进行扩增反应，miR-652-3P以U6为内参，TMED5 mRNA以β-actin为内参，引物由上海生工合成。反应条件：95℃，3 min；95℃，30 s；61℃，30 s；72℃，30 s；38个循环。对miR-652-3P、TMED5 mRNA相对表达量采用2

法计算。

2.4 miR-652-3P和TMED5表达与PLC患者预后的关系 miR-652-3P高表达PLC患者平均生存时间为(31.98±0.79)个月，显著长于miR-652-3P低表达患者平均生存时间[(23.63±1.59)个月](χ

=14.102，

<0.05)，见图3。TMED5高表达PLC患者平均生存时间为(21.46±1.39)个月，显著短于TMED5低表达患者平均生存时间[(32.68±0.74)个月](χ

=28.656，

<0.05)，见图4。

1.4 研究方法

1.5 随访 所有PLC患者均接受随访，术后第1年内每隔3个月患者入院复查1次；术后第2、3年，每半年患者入院复查1次，并每3个月进行随访。期间统计患者开始治疗至因任何原因引起死亡的时间。本次随访截止日期2020年12月。

这衣服我们不穿谁穿？我一下买回来两套，我和你姥姥每人一套。母亲站起来，扯着衣襟原地旋转了一圈。年轻时穿，太俏，怕人家说。现在再不穿，还等什么时候？

1.4.1 样品采集 术中采集患者癌组织及边缘正常组织(距离癌组织>5 cm)，将所有组织放置液氮中速冻20 min，然后将组织保存于-80℃冰箱中待检。

2 结果

随着对miRNA的深入研究，发现了许多在PLC中异常表达的miRNA

。有研究发现miRNA可通过调控细胞的增殖、分化、迁移等生物学行为，在肿瘤发生、发展中起重要作用

。因此探讨肿瘤细胞中miRNA的表达，可为肿瘤的治疗提供新思路。

2.2 miR-652-3P和TMED5表达与PLC患者临床病理特征的关系 根据miR-652-3P表达水平均值(0.45)将PLC患者分为高表达组37例，低表达组45例；根据TMED5 mRNA表达水平均值(2.13)将PLC患者分为高表达组42例，低表达组共40例，观察miR-652-3P和TMED5表达与PLC患者临床病理特征的关系。结果显示miR-652-3P和TMED5表达与TNM分期、淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润相关(

<0.05)，与患者年龄、性别、肿瘤大小及分化程度无关(

>0.05)。见表3、表4。

2.3 PLC组织中miR-652-3P和TMED5相关性 生物信息学预测(miRTarBase数据库)显示，miR-652-3P和TMED5存在结合位点，见图1。Pearson相关性分析显示，PLC组织中miR-652-3P和TMED5表达呈负相关(

=-0.619，

=<0.001)。见图2。

(4) 轨旁安全设备中的安全通信模块接收到RSSP-I安全通信包后，立即进行安全协议解析和验证，并将验证通过的安全数据提交给安全应用模块来执行计算。

2.5 影响PLC患者预后的危险因素分析 单因素分析表明，TNM分期、淋巴血管间隙有浸润、淋巴结转移、miR-652-3P低表达和TMED5高表达均是PLC患者预后不良的危险因素。多因素分析表明，淋巴结有转移、miR-652-3P低表达和TMED5高表达是PLC患者预后不良的独立危险因素(

=2.030，95%

为1.608～2.568；

=2.152，95%

为1.424～3.251；

=2.172，95%

为1.507～3.129，

<0.05)。见表5。

3 讨论

2.1 miR-652-3P和TMED5表达水平比较 见表2。

回顾性分析我院2015年01月-2016年12月内收治的50例老年消化性溃疡患者的临床资料,调查患者的临床症状表现。50例患者中男性27人,女性23人,患者年龄62.5-81.2岁,平均(69.8±7.6)岁。其中38人(76.00%)存在明显症状,为症状发作就诊患者,症状包括反复性腹痛、反酸烧心、呕血黑便、泛酸嗳气、食欲不佳等;与此同时,有12人(24.00%)无明显的临床表现,为健康体检偶发患者。利用X线钡餐检查可确诊50例患者均为老年消化性溃疡患者,包括胃溃疡34人(68.00%)、十二指肠溃疡16人(32.00%)。

miR-652-3P在不同的癌细胞中表达水平不同，对癌细胞的影响也不相同。有资料显示，miR-652-3P在胃癌中表达水平异常升高

，且促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭，从而影响癌症的发展。Zhu等

研究显示miR-652-3P过表达可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。但miR-652-3P对肝癌的影响尚不清晰，仅有文献报道miR-652-3P在肝纤维化小鼠的肝组织中表达水平明显低于健康小鼠的肝组织

。肝纤维化是肝硬化的必经阶段，肝纤维化是由多种信号转导通路共同控制的复杂过程，最终可导致肝硬化，甚至肝癌

。本研究发现观察组组织miR-652-3P相对表达水平明显低于对照组，提示miR-652-3P可能参与PLC的发生。本研究同时发现miR-652-3P与PLC患者TNM分期、淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润相关，提示miR-652-3P可能与PLC的发展有关。Kaplan-Meier法显示miR-652-3P高表达患者平均生存时间长于miR-652-3P低表达患者，PLC患者预后不良可能与miR-652-3P水平有关。

跨膜p24运输蛋白(TMED)家族的成员充当物质运输的受体，参与蛋白质的囊泡运输和先天性免疫信号转导。有报道称，TMED在肿瘤的发生和发展中扮演重要角色

。TMED5参与调控经典的Wnt/wg信号通路，TMED5过表达可促进细胞的恶性表型，如细胞的增殖、周期和上皮细胞向间充质细胞转化进程及细胞的侵袭、迁移和凋亡以及耐药性

。Wnt蛋白是重要的发育信号分子，在细胞增殖、分化、侵袭和迁移中发挥重要作用。Yang等

研究显示，高表达的TMED5可以激活Wnt/wg信号通路，促进宫颈癌的发展和进程。本研究发现观察组TMED5 mRNA相对表达水平明显高于对照组，提示TMED5在原发性肝癌的发生中可能扮演重要角色。本研究还发现TMED5与患者TNM分期、淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润相关，提示TMED5可能参与原发性肝癌的发展。Kaplan-Meier法显示TMED5低表达患者平均生存时间明显长于TMED5高表达患者，提示TMED5可能与原发性肝癌患者的不良预后相关。

最近有证据表明，miRNAs可通过不同机制上调靶基因的表达。王朝等

研究显示，过表达的miR-455-3p可以通过靶向负调控TMED3基因，从而促进宫颈癌细胞凋亡，同时能增强癌细胞的放射敏感性。生物信息学预测显示，miR-652-3P和TMED5存在结合位点。经Pearson相关性分析显示，PLC组织中miR-652-3P和TMED5呈负相关性，提示在PLC中miR-652-3P可能与TMED5共同作用，从而影响PLC的发生、发展，调控肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。多因素分析表明，淋巴结转移、miR-652-3P低表达和TMED5高表达是PLC患者预后不良的独立危险因素，提示miR-652-3P低表达和TMED5高表达患者预后不良风险性较高。

煤矿机械工作环境十分恶劣，空气中多伴有粉尘水汽等物质，同时环境十分潮湿。为延长机械的使用寿命，就必须在日常工作中加强维护保养，禁止所有不规范的操作流程。此外，还要选择某一固定时间检测机械设备，第一时间更换损耗过重的机械部件，彻底清除安全隐患，保证井下作业的安全。在机械设备的操作过程中要严格遵循适度原则，尽可能防止发生超载和超速的现象，有效预防由于过度使用导致的机械损耗，提高机械设备使用效率。

综上所述，miR-652-3P和TMED5与PLC的发生及预后有关，相关机制还需进一步深入研究。

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