余亲平 张翠萍 黄静宇 刘 静 黄远彬 俞 婷 张晓爱 王 蕾 陈进胜 陈文卿 王志林 陈 庄* 容 庭

(1.广东省农业科学院农业生物基因研究中心，广东省农作物种质资源保存与利用重点实验室，广州 510640；2.广州智特奇生物科技股份有限公司，广州 510700；3.广东海大集团，广州 511400；4.广东虫虫生物科技有限公司，广州 511462；5.饶平县动物卫生监督所，潮州 515700；6.广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省动物育种与营养公共实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广州 510640)

肉鸡出壳后小肠消化吸收结构和功能的发育十分关键，对肉鸡早期乃至后期的生长性能和健康具有重要作用。肠道免疫系统包括先天免疫和适应性免疫。肉鸡出壳后，一般认为其先天免疫系统发育相对成熟[1-2]，然而其适应性免疫系统需要出壳2周后功能才能发育成熟[3]。因此，肉鸡出壳后小肠结构和先天性免疫的发育是至关重要的。黄羽肉鸡是南方地区广泛饲养的肉鸡品种，其出生后1周肠道结构的发育特点少有研究，因此研究黄羽肉鸡雏鸡肠道结构发育和功能的发育对促进黄羽肉鸡产业的健康发展具有重要意义。雏鸡胃肠道的发育受遗传和环境如饲粮、添加剂和疾病等多种因素的影响，结构发育良好的胃肠道对雏鸡的健康和生长有重要意义，同时各种调控因子如酶制剂、抗生素等也可以调控雏鸡胃肠道的发育。国内外研究证实，昆虫(黑水虻、黄粉虫和大麦虫等)虫粉不仅可以作为人的食物和动物的饲料原料，而且具有功能调节作用，因此昆虫虫粉既可以作为营养组分又可以作为功能性调节组分在畜禽中加以应用。大麦虫因其蛋白质含量高，通常被用作鱼粉、豆粕等常规蛋白质源的替代品。刘小雁等[4]在饲粮中添加适量(1%～2%)的大麦虫蛋白粉替代部分鱼粉，发现在一定程度上可改善断奶仔猪的生长性能，显著降低断奶仔猪的腹泻率和死淘率。饲粮添加大麦虫干粉对断奶仔猪血清生长激素、生长抑素、胰岛素样生长因子-1、白细胞介素-2、白细胞介素-10和肿瘤坏死因子-α的分泌有促进作用，揭示其可以改善断奶仔猪的机体代谢[5]。在肉鸡饲粮中添加少量(0.2%和0.3%)的大麦虫全脂粉对肉鸡回肠营养物质的消化率和胰酶活性没有任何负面影响，相反地可以提高α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和α-半乳糖苷酶的活性，减少盲肠拟杆菌属的数量，还能刺激肠道微生物分泌糖酵解等酶，从而改善肉鸡的健康状况[6]。作为优良的饲料资源，或者作为功能性饲料添加剂，大麦虫粉部分替代饲料中鱼粉、豆粕和动物油脂在猪鸡生产上都有相关的研究报道，但是对雏鸡发育的影响还少有研究。因此，本研究旨在研究黄羽肉鸡早期发育过程中肠道结构和先天性免疫功能发育的变化规律，以及探讨在饲粮中添加大麦虫粉对其的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料

大麦虫粉来源于广东某生物科技有限公司，其常规营养成分见表1；黄羽肉鸡由惠州博罗县科大农牧有限公司提供。

表1 大麦虫粉常规营养成分(干物质基础)Table 1 Routine nutrients in barley worm meal (DM basis) %

1.2 试验设计和饲养管理

试验选取90只1日龄健康的黄羽肉鸡，随机分为3组，每组6个重复，每个重复5只鸡。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组饲喂在基础饲粮基础上添加300 g/t 15%金霉素和40 g/t 50%维吉尼亚霉素的饲粮，大麦虫粉组饲喂在基础饲粮中添加3%大麦虫粉的饲粮。基础饲粮参照NY/T 33—2004《鸡饲养标准》配制，基础饲粮和大麦虫粉组饲粮组成及营养水平见表2。试验期7 d，期间保证鸡只自由采食和饮水。

表2 饲粮组成及营养水平(干物质基础)Table 2 Composition and nutrient levels of diets (DM basis) %

1.3 测定指标及方法

1.3.1 小肠各段长度测定

试验第1、3和7天每个重复随机选择1只鸡，颈静脉放血，屠宰，分离十二指肠(U形弯曲段)、空肠(至卵黄囊残迹)和回肠(至回盲连结处)，测量各肠段长度。

1.3.2 肠道形态结构分析

取十二指肠近端5 cm处、空肠和回肠中段1.5 cm左右，用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)轻轻漂洗肠道内容物后迅速将样品浸泡至10%福尔马林固定液中，用于制备组织切片。观察并测量各肠断黏膜绒毛高度、隐窝深度和杯状细胞数量，并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)值。

1.3.3 免疫因子mRNA相对表达量测定

去除十二指肠和回肠的内容物后剪开肠段，用预冷的PBS冲洗，然后用干净无菌的载玻片分别刮取各肠段黏膜于RNase-free冻存管中，立即速冻于液氮中，然后转至-80 ℃冰箱中冻存，用于相应基因相对表达量的测定。引物序列见表3，由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

硫酸钾市场挺价守稳，烟草招标进入旺季。四川金叶2019年硫酸钾第二次招标中标公示：四川合聚源农资有限公司投标价2900元/吨；华贸金叶实业发展有限公司3070元/吨；四川誉海企业管理有限公司3084元/吨。此价格对目前市场价格起到一定利好支撑。厂家报价高位坚挺，曼海姆硫酸钾50%粉主流出厂价2850-2950元/吨。青海水盐体系粉状硫酸钾主流到站报价2750-2800元/吨，开工较低，交投维稳，实际成交可谈。罗钾处于检修期，价格目前坚挺守稳，地区市场仍有部分前期货源，51%粉状3000元/吨。

表3 实时荧光定量PCR引物序列Table 3 Real-time fluorescent quantitative PCR primer sequences

采用2×Robust SYBR Green qPCR ProMix(S018A,EnzyValley)试剂盒进行实时荧光定量PCR检测。以β-肌动蛋白(β-actin)RNA作为内参基因，对多聚免疫球蛋白受体(pIgR)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白-1(claudin-1)、黏蛋白2(MUC2)、NK溶素(NK-lysin)以及β-防御肽(AvBD)1、5、6、7、8、10、13 mRNA表达进行相对定量分析。实时荧光定量PCR反应体系见表4。扩增条件：95 ℃ 10 min预变性；95 ℃ 10 s变性，58 ℃ 20 s退火，进行40个循环。每个样品3个重复孔，实时荧光定量PCR数据处理方法参考Livak等[7]，结果采用2-ΔΔCt形式表示。

表4 实时荧光定量PCR反应体系Table 4 Real-time fluorescent quantitative PCR reaction system μL

1.4 数据统计分析

试验数据使用SPSS 20.0统计软件进行双因素方差分析(two-way ANOVA)，并采用Tukey’s法进行多重比较，当方差不齐时则采用非参数Kruskal-Wallis检验，结果以“平均值±标准误”表示。P<0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著，0.05

2 结 果

2.1 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡肠道结构的影响

2.1.1 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠长度的影响

由表5可知，与1日龄相比，3和7日龄各组肉鸡小肠总长度显著增加(P<0.05)，且7日龄显著高于3日龄(P<0.05)；3和7日龄各组肉鸡回肠相对长度显著增加(P<0.05)，但3日龄与7日龄之间无显著差异(P>0.05)；3和7日龄各组肉鸡十二指肠和空肠相对长度无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，抗生素组和大麦虫粉组肉鸡小肠总长度及其各段相对长度均无显著差异(P>0.05)。

表5 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠长度的影响Table 5 Effects of days of age and dietary barley worm meal on small intestine length of yellow-feathered broilers

2.1.2 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠绒毛结构的影响

由表6、表7和表8可知(本试验未测量抗生素组和大麦虫粉组肉鸡3日龄小肠绒毛结构相关数据，因此表6～表8中只显示对照组3日龄数据)，与1日龄相比，3和7日龄肉鸡十二指肠、空肠和回肠绒毛高度均显著提高(P<0.05)，7日龄肉鸡十二指肠(抗生素组除外)和空肠隐窝深度显著提高(P<0.05)，3日龄十二指肠和空肠V/C值显著提高(P<0.05)，7日龄十二指肠和抗生素组空肠V/C值显著提高(P<0.05)，3和7日龄十二指肠、空肠和回肠杯状细胞数量显著增多(P<0.05)。与对照组相比，抗生素组和大麦虫粉组肉鸡十二指肠、空肠和回肠绒毛结构无显著差异(P>0.05)。

表6 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡十二指肠绒毛结构的影响Table 6 Effects of days of age and dietary barley worm meal on duodenal villus structure of yellow-feathered broilers

表7 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡空肠绒毛结构的影响Table 7 Effects of days of age and dietary barley worm meal on jejunal villus structure of yellow-feathered broilers

续表7项目 Items绒毛高度 Villus height/μm对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group隐窝深度 Crypt depth/μm对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group绒毛高度/隐窝深度 V/C对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group杯状细胞数量 Number of goblet cells/个对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group7日龄 7 days of age514.24±62.96a568.40±33.28a551.47±100.84a106.71±26.82a104.98±23.05a122.82±21.80a5.20±1.82ab5.60±1.07a4.70±1.58ab16.06±1.56a16.13±1.66a14.99±2.20aP值 P-value日龄 Days of age0.87<0.01<0.01<0.01添加剂 Additive0.030.660.800.68日龄×添加剂Days of age×additive0.030.660.800.68

表8 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡回肠绒毛结构的影响Table 8 Effects of days of age and dietary barley worm meal on ileal villus structure of yellow-feathered broilers

2.2 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡肠道功能发育的影响

2.2.1 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠紧密连接蛋白和黏蛋白mRNA表达的影响

由表9和表10可知，1～7日龄，随着日龄的增长，肉鸡十二指肠ZO-1 mRNA相对表达量有下调的趋势(P=0.061)；与1日龄相比，7日龄肉鸡十二指肠claudin-1 mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)，7日龄回肠MUC2 mRNA相对表达量显著上调(P<0.05)，3和7日龄十二指肠MUC2、回肠ZO-1和claudin-1 mRNA相对表达量无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，与对照组相比，抗生素组和大麦虫粉组肉鸡十二指肠和回肠紧密连接蛋白和黏蛋白mRNA相对表达量无显著差异(P>0.05)。

表9 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡十二指肠紧密连接蛋白和黏蛋白mRNA表达的影响Table 9 Effects of days of age and dietary barley worm meal on tight junction protein and mucin mRNA expression in duodenum of yellow-feathered broilers

表10 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡回肠紧密连接蛋白和黏蛋白mRNA表达的影响Table 10 Effects of days of age and dietary barley worm meal on tight junction protein and mucin mRNA expression in ileum of yellow-feathered broilers

2.2.2 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠pIgRmRNA表达的影响

表11 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠pIgR mRNA表达的影响Table 11 Effects of days of age and dietary barley worm meal on pIgR mRNA expression in small intestine of yellow-feathered broilers

2.2.3 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠防御肽mRNA表达的影响

由表12和表13可知，1～7日龄，随着日龄的增长，肉鸡十二指肠和回肠AvBD8 mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)，十二指肠NK-lysin mRNA相对表达量有上调趋势(P=0.061)，回肠NK-lysin mRNA相对表达量显著上调(P<0.05)，十二指肠和回肠AvBD1、AvBD5、AvBD6、AvBD7、AvBD10和AvBD13 mRNA相对表达量均无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，抗生素组和大麦虫粉组肉鸡十二指肠和回肠NK-lysin、AvBD1、AvBD5、AvBD6、AvBD7、AvBD8、AvBD10和AvBD13 mRNA相对表达量均无显著差异(P>0.05)。

表12 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡十二指肠防御肽mRNA表达的影响Table 12 Effects of days of age and dietary barley worm meal on defense peptide mRNA expression in duodenum of yellow-feathered broilers

续表13项目 Itemsβ-防御肽8 AvBD8对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupβ-防御肽10 AvBD10对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupβ-防御肽13 AvBD13对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupNK溶素 NK-lysin对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group1日龄 1 day of age1.06±0.47a1.06±0.47a1.06±0.47a1.67±1.381.67±1.381.67±1.381.00±0.051.00±0.051.00±0.051.07±0.51b1.07±0.51b1.07±0.51b3日龄 3 days of age0.64±0.19ab0.91±0.23ab0.31±0.18ab2.53±0.403.06±2.010.56±0.350.84±0.441.35±0.290.55±0.182.56±0.45ab4.67±0.42ab8.08±6.34ab7日龄 7 days of age0.04±0.02b0.08±0.06b0.09±0.08b0.65±0.510.69±0.380.33±0.101.25±0.701.05±0.261.11±0.2515.89±4.75a12.50±4.92a14.68±2.58aP值 P-value日龄 Days of age<0.010.060.36<0.01添加剂 Additive0.400.270.290.46日龄×添加剂Days of age×additive0.420.480.160.38

表13 日龄和饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡回肠防御肽mRNA表达的影响Table 13 Effects of days of age and dietary barley worm meal on defense peptide mRNA expression in ileum of yellow-feathered broilers

续表12项目 Itemsβ-防御肽8 AvBD8对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupβ-防御肽10 AvBD10对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupβ-防御肽13 AvBD13对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal groupNK溶素 NK-lysin对照组Control group抗生素组Antibiotic group大麦虫粉组Barley worm meal group1日龄 1 day of age1.15±0.78a1.15±0.78a1.15±0.78a1.48±1.251.48±1.251.48±1.251.09±0.571.09±0.571.09±0.571.57±1.071.57±1.071.57±1.073日龄 3 days of age0.69±0.10ab1.28±0.03a1.06±0.68ab1.49±1.450.87±0.570.49±0.220.85±0.201.63±0.381.17±0.293.04±0.362.65±0.963.86±1.177日龄 7 days of age0.12±0.05b0.09±0.06b0.15±0.11b0.23±0.080.29±0.160.33±0.230.86±0.120.81±0.221.30±0.9212.59±8.686.72±3.916.76±2.19P值 P-value日龄 Days of age<0.010.060.63<0.01添加剂 Additive0.730.810.480.41日龄×添加剂Days of age×additive0.830.880.420.42

3 讨 论

3.1 1～7日龄黄羽肉鸡早期发育过程中肠道结构和功能发育的变化

3.1.1 1～7日龄黄羽肉鸡早期发育过程中小肠结构的发育

大量研究证明，肉鸡出壳后的第1周，小肠发育是至关重要的[8-10]。小肠发育不足会降低其消化吸收营养物质的能力，进而阻碍幼禽的生长发育。本研究探究了黄羽肉鸡1、3、7日龄小肠及其各肠段的变化，结果发现：1～7日龄，随着日龄的增长，肉鸡小肠总长度显著增加，十二指肠相对长度有降低的趋势，空肠相对长度无显著变化，回肠相对长度显著提高。研究发现，肉鸡刚出壳时，小肠重量占体重的2.5%，出壳1周后上升到约7%，而其他消化器官的重量并没有这么大的变化[8]。也有研究发现，1～12日龄，火鸡空肠和回肠的长度增长速度更快[11]。

本研究中，对小肠绒毛结构的研究结果显示，1～7日龄，肉鸡小肠绒毛结构迅速发育，与1日龄相比，7日龄小肠绒毛高度增加了1倍。早期的研究证实，肉鸡出壳后，其营养来源由卵黄囊营养逐渐转变为饲粮营养，此时肠道迅速发育，肠道绒毛、隐窝迅速增长，7日龄雏鸡十二指肠的绒毛体积比刚出壳时增加了2倍，10日龄雏鸡空肠和回肠的绒毛体积则比刚出壳时增加了3倍[12]。在小肠不同肠段的绒毛发育研究方面，有报道证实，火鸡十二指肠绒毛高度的增长比空肠和回肠快[9]，本研究发现黄羽肉鸡7日龄时空肠绒毛高度的增长速度最快，回肠最慢，我们推测这可能因为肉鸡品种不同而导致的。绒毛高度的增加表明消化吸收营养物质能力的提高，而隐窝深度的增加则表明肠黏膜细胞增殖的增加，本研究结果表明黄羽肉鸡出壳后的第1周，小肠快速发育，小肠结构发生了适应自主采食的重要变化。

3.1.2 1～7日龄黄羽肉鸡早期发育过程中小肠先天免疫的发育

肠道免疫系统包括先天性免疫和适应性免疫2部分。肉鸡出壳后，其先天性免疫系统发育相对成熟，然而其适应性免疫系统需要出壳2周后功能才能发育成熟[3]。因此，在雏鸡发育的早期阶段，先天性免疫系统的结构和组分如杯状细胞及其产生的黏蛋白、肠上皮细胞及其紧密连接、肠上皮细胞分泌的宿主防御肽可能对抵御病原菌感染具有重要作用。

本研究探究了黄羽肉鸡出壳后第1周十二指肠和回肠先天性免疫相关基因表达的情况，结果发现：1～7日龄，肉鸡十二指肠和回肠中ZO-1、claudin-1、MUC2、pIgR、NK-lysin、AvBD1、AvBD5、AvBD6、AvBD7、AvBD8、AvBD10和AvBD13都有表达；随着日龄的增长，十二指肠AvBD8、claudin-1的mRNA相对表达量显著下调，ZO-1 mRNA相对表达量有下调的趋势，pIgRmRNA相对表达量显著上调，NK-lysin mRNA相对表达量有上调趋势；回肠AvBD8 mRNA相对表达量显著下调，MUC2、pIgR和NK-lysin的mRNA相对表达量显著上调。

宿主防御肽是先天免疫的重要组成部分，在保护肉鸡胚胎健康和出壳后正常生长有着重要作用。宿主防御肽具有广谱的抗菌、抗病毒等活性。研究发现，AvBD2、AvBD3、AvBD4、AvBD6、AvBD7、AvBD11和AvBD13具有抗大肠杆菌活性[13]；AvBD4和AvBD10具有抗各种细菌和真菌的活性[14]。目前对小肠各肠段以及不同发育时期，尤其是孵出后的表达研究较少。当小肠受到沙门氏菌感染时，AvBD的表达显著上升[15]。本研究结果发现，1～7日龄，黄羽肉鸡的多个宿主防御肽基因在十二指肠和回肠中未见表达，这可能是肉鸡品种不同造成的差异。

本研究结果表明，1～7日龄，黄羽肉鸡十二指肠和回肠中AvBD8 mRNA相对表达量下调。Terada等[2]在7日龄Chunky鸡的回肠研究中发现，与胚胎期的表达相比，AvBD1、AvBD2、AvBD6和AvBD7 4种防御肽的mRNA表达也出现下调，尽管表达的基因种类不同，但出壳后AvBD短期内表达下调似乎是一种共同趋势。此外，本研究发现，1～7日龄，肉鸡十二指肠和回肠中NK-lysin的mRNA相对表达量上调。NK-lysin是一种α-螺旋型阳离子肽，最初从猪的肠道组织中分离出来[16]，存在于T淋巴细胞和自然杀伤细胞颗粒中，可以通过破坏细菌细胞膜来发挥抗菌活性，显著抑制革兰氏阴性菌大肠杆菌的生长[17]。研究发现，人工合成的NK-lysin和CNK2(一种含有NK-lysin核心α-螺旋区域的合成多肽)可以通过破坏艾美耳球虫的寄生膜来杀死艾美耳球虫及其孢子，且CNK2表现出更高的抗球虫能力[18]，这也是上述推测的间接佐证。因此，在雏鸡早期发育阶段，很可能是NK-lysin在保护肠道免受病原体侵袭上发挥着更重要的作用。

封闭蛋白(claudin)和闭锁小带蛋白(zonula occluden,ZO)是构成紧密连接的重要组成部分[19]。紧密连接通过封闭相邻上皮细胞间的细胞间隙来调节肠道屏障的通透性，抑制微生物、抗原等的扩散。此外，紧密连接还可以将细胞固定在一起，维持细胞的极性，防止顶面和底侧面整合膜蛋白从侧面扩散，可以防止离子、分子穿过细胞间隙[20]。本试验结果发现，黄羽肉鸡出壳后，1～7日龄期间，十二指肠claudin-1 mRNA相对表达量显著下调，ZO-1 mRNA相对表达量有下调的趋势。相似的，Ozden等[1]研究发现，claudin-3、claudin-5、claudin-16的mRNA相对表达量在18～20胚龄间升高，此后至出壳第2天期间下降；与前者不一样的是ZO-2的mRNA相对表达量在18胚龄至出壳第2天期间逐渐降低[1]。

杯状细胞是分布于柱状上皮细胞之间的另一种肠道上皮细胞，具有分泌黏液的功能。在小肠中，MUC2是主要的分泌型黏蛋白，可以直接作用于肠道微生物，防止细菌易位[21-22]。本研究结果发现，1～7日龄，肉鸡十二指肠杯状细胞数略有增加，但空肠和回肠杯状细胞数量迅速增长，与1日龄相比，分别增加了1倍和2倍。据报道，在18胚龄至雏鸡7日龄期间，十二指肠13%的上皮细胞为杯状细胞，而空肠和回肠的比例在18胚龄时约为19%，在雏鸡1～7日龄时分别为23%和26%[23]。这些研究结果表明，在雏鸡早期发育阶段，空肠和回肠杯状细胞发育迅速。与此同时，我们还观察到肉鸡1～7日龄期间，回肠MUC2的mRNA相对表达量显著上调。肉鸡出壳后，逐渐由卵黄囊营养转变为饲粮营养，饲粮在胃肠道消化吸收的过程中，细菌等微生物随着水、食物进入胃肠道，而此时肠道上皮细胞之间的紧密连接形成可能相对滞后，因此机体很可能通过增加杯状细胞数量、分泌大量黏蛋白来弥补其对外部环境中的细菌、毒素等致病因子的抵抗。这些研究结果表明，在雏鸡早期发育阶段，杯状细胞及其分泌的黏蛋白可能发挥着至关重要的作用。

在本试验中，1～7日龄，黄羽肉鸡十二指肠和回肠pIgR的mRNA相对表达量显著上调。在肉鸡回肠和盲肠中，pIgR的表达与MUC2和免疫球蛋白A(IgA)的表达高度相关，表明pIgR与MUC2和IgA的发育进程是一致的[24]。而在本研究中也观察到了相同的现象，肉鸡7日龄十二指肠、回肠pIgR的mRNA相对表达量显著高于1日龄，回肠MUC2的mRNA相对表达量显著高于1和3日龄。pIgR主要用于转运由浆细胞分泌的多聚IgA，在运转过程中释放的分泌成分可以在上皮细胞内中和病毒，也可以将固有层内的抗原分泌出去，因此pIgR的分泌成分是多聚免疫球蛋白发挥黏膜防御功能的必要条件；但在某些情况下，pIgR也可以介导微生物对肠道上皮屏障的入侵[25]。此外，多余的pIgR被裂解释放，形成游离的分泌成分，游离的分泌成分可以通过阻止上皮细胞与病原体的相互作用发挥清道夫功能，因此其被视为一种非特异性的微生物清除剂[26]。这些研究结果表明，肉鸡早期发育阶段，随着杯状细胞的发育，pIgR及其介导的适应性免疫也逐渐发育，说明雏鸡的免疫防御机制正在从以先天性免疫为主向着以先天性免疫和适应性免疫共同发挥作用的模式转变，该时间是关键时期。

3.2 饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡肠道结构和功能发育的影响

3.2.1 饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠结构的影响

本研究结果发现，饲粮添加3%大麦虫粉对7日龄黄羽肉鸡十二指肠隐窝深度有降低的趋势，对V/C值有提高趋势，对回肠ZO-1的mRNA相对表达量有提高趋势。肉鸡的快速生长直接取决于消化道形态和功能的完整性，因此对肠道健康进行评估是至关重要的。据报道，在肉鸡饲粮中添加3%诱导表达抗菌肽的黄粉虫粉(紫外+损伤+喷菌诱导)，可以显著提高肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度及其V/C值，显著提高平均日增重，降低料重比，说明经诱导后表达抗菌肽的黄粉虫粉可以改善鸡十二指肠和空肠的结构，提高肉鸡生长性能[27]。大麦虫粉可能作为饲料抗生素的替代品，笔者前期的试验证明，饲粮中全期添加大麦虫粉可提高黄羽肉鸡生长性能，其作用效果接近抗生素，可部分替代抗生素，无负面影响。同样的，在本研究中也发现，与对照组相比，饲粮添加3%大麦虫粉有降低黄羽肉鸡十二指肠隐窝深度的趋势，提高十二指肠的V/C值。绒毛高度增加，隐窝变浅，V/C值变大，表明肠道对营养物质消化和吸收能力的增强。因此说明饲粮添加3%大麦虫粉可以改善黄羽肉鸡肠道内营养物质的消化吸收。

3.2.2 饲粮添加大麦虫粉对黄羽肉鸡小肠先天免疫的影响

肉鸡刚出壳时，因为采食、饮水等行为，极易受到致病菌的感染，这影响其生长发育。因此，雏鸡发育的早期阶段，黏膜屏障功能，特别是黏液、紧密连接和先天性免疫系统可能在保护机体健康上具有重要作用。本试验中，在饲粮中添加3%大麦虫粉，发现7日龄黄羽肉鸡回肠ZO-1的mRNA相对表达量与对照组相比有上升趋势。claudin和ZO是参与形成紧密连接的重要蛋白。研究发现，claudin-1在维持上皮细胞极性、调节肠道屏障通透性上发挥着重要的作用[28-29]。ZO-1能把紧密连接结构膜蛋白的细胞内结构域同细胞内骨架系统连接在一起，构成稳定的连接系统，具有维持细胞极性、传递细胞间信号、调节细胞黏附性等功能[30]。在肉鸡早期肠道发育的研究中，我们发现1～7日龄期间，随着肉鸡日龄的增长，十二指肠ZO-1的mRNA相对表达量有下调的趋势，claudin-1的mRNA相对表达量显著下调，这很可能意味着上皮细胞紧密连接发育不全，细胞的极性未完全形成，管腔中的微生物、食物抗原、毒素等容易穿过上皮细胞进入固有层，对肠道组织产生破坏或者导致炎症。然而，饲粮添加3%大麦虫粉可以提高雏鸡回肠紧密连接蛋白ZO-1的mRNA表达，因此很可能ZO-1表达的上调能够进一步促进未成熟的上皮细胞形成紧密连接，增强其屏障功能。

4 结 论

① 1～7日龄，黄羽肉鸡小肠快速发育，小肠总长度迅速增加，空肠、回肠相对长度的增长快于十二指肠，小肠各段绒毛高度迅速增加，空肠、回肠杯状细胞数量迅速增加，十二指肠claudin-1、AvBD8和回肠AvBD8的mRNA相对表达量逐渐降低，十二指肠pIgR和回肠pIgR、MUC2、NK-lysin的mRNA相对表达量逐渐提高，早期黄羽肉鸡免疫功能发生了适应性的变化。

② 饲粮添加3%大麦虫粉可以提高肉鸡十二指肠V/C值，促进回肠ZO-1的mRNA表达，改善黄羽肉鸡营养和先天性肠道发育相关功能。