李波 周娅丽 张亚茹 卢森 张鹏辉，3 崔亚君 陈藏藏 李彦增

(1 河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003；2 河南省果蔬加工及质量安全控制工程技术研究中心，河南 新乡 453003；3 河南双汇投资发展股份有限公司技术中心，河南 漯河 462000；4 河南世纪香食用菌开发有限公司，河南 许昌 461100）

灵芝Ganoderma lucidum是一种多孔菌科真菌属的子实体，具有固本扶正、滋补强本、养颜安神等功效[1]。灵芝含有许多对人体有益的成分，其中三萜和多糖是其主要活性成分。灵芝三萜能够有效阻止紫外线对皮肤细胞的损伤，而灵芝多糖能调节皮肤的水分含量，保持皮肤弹性和光滑细腻，延缓其衰老[2-4]。

面膜是常用的化妆品，可以清洁、护理皮肤，改善面部皮肤的营养状态。人们的护肤意识随着生活水平的提高越来越强，对化妆品的要求也越来越高。含有天然提取物的面膜以其安全、作用温和、无刺激等特性受到消费者的青睐[5]。近年来，随着灵芝产量的快速增长，灵芝精深加工有了新的发展领域。目前灵芝加工品主要集中在保健品、食品，在化妆品中的研究和应用还较少[6]。试验将灵芝三萜浓缩液、多糖浓缩液用于制备面膜精华液，研究确定灵芝面膜精华液的最佳配方，旨在为灵芝的精深加工探索新途径，并期望为消费者提供一种天然健康的护肤产品。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

赤芝子实体，由河南世纪香食用菌开发有限公司提供。甘油，购自山东德新康医疗科技有限公司。透明质酸钠，购自华熙福瑞达生物科技股份有限公司。1，3-丁二醇，购自长沙研邦化工科技有限公司。黄原胶，购自友言生物技术有限公司。尿囊素，购自上海同顶实业有限公司。EDTA二钠，购自天津市科密欧化学试剂有限公司。茉莉香精，购自威海青采生物工程有限工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。

Multifuge X1R Centrifuge型台式高速冷冻离心机，美国Thermo公司。FE28型PH计，梅特托利多仪器(上海）有限公司。旋转蒸发仪，巩义市予华仪器有限责任公司。721G型可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司。皮肤水分测试仪，东莞市定义美电子科技有限公司。

1.2 制备灵芝粉

新鲜灵芝去除杂质，晾晒至失去大部分水分，于65℃下恒温干燥10 h左右，粉碎，过筛(孔径0.178 mm），得灵芝粉备用。

1.3 制备灵芝提取液

1.3.1 制备灵芝三萜提取浓缩液

称取30 g灵芝粉，加入300 mL无水乙醇，在60℃下提取1 h，抽滤。滤渣再加入150 mL无水乙醇，在60℃下提取1 h，抽滤。合并两次滤液，定容至450 mL，用旋转蒸发仪浓缩3倍后得灵芝三萜提取浓缩液。提取灵芝三萜后的滤渣在60℃烘箱中干燥后用于提取灵芝多糖。

1.3.2 制备灵芝多糖提取浓缩液

称取醇提后的干燥滤渣20 g，加入600 mL蒸馏水，在90℃下提取90 min，抽滤。滤渣再加入300 mL蒸馏水，在90℃下提取90 min，抽滤。合并滤液，定容至800 mL，用旋转蒸发仪浓缩2倍后得灵芝多糖提取浓缩液。

1.4 测定灵芝三萜和多糖

1.4.1 测定灵芝三萜含量

以齐墩果酸为标准品，5%香草醛-冰醋酸和高氯酸为显色剂，采用分光光度法(检测波长548 nm）制作标准曲线。灵芝三萜提取浓缩液稀释10倍后，测定其三萜含量。

1.4.2 测定灵芝多糖含量

以葡萄糖为标准品，采用苯酚硫酸法制作标准曲线，检测波长490 nm。灵芝多糖提取浓缩液稀释10倍，测定其多糖含量。

1.5 制备灵芝面膜精华液

1.5.1 制备方法

灵芝面膜精华液的基础配方见表1。

表1 灵芝面膜精华液的基础配方

制备A相溶液：取甘油、透明质酸钠、1，3-丁二醇、蓖麻油，在80～90℃水浴条件下加热，搅拌均匀。

制备B相溶液：取适量蒸馏水，加入黄原胶、尿囊素、EDTA二钠、灵芝多糖提取浓缩液、灵芝三萜提取浓缩液，搅拌至溶解完全。

将A相溶液加入B相溶液中，搅拌均匀，在80～90℃下保温30 min，继续搅拌10 min，待其温度降至45℃左右时加入C相溶液，继续搅拌5 min后即得灵芝面膜精华液。

1.5.2 单因素试验

在预试验基础上，分别研究灵芝三萜提取浓缩液、灵芝多糖提取浓缩液、甘油和黄原胶质量分数对面膜品质的影响。

1.6 感官评定

随机挑选20名皮肤健康且经过训练的在校女大学生对灵芝面膜精华液进行感官评定，通过视觉、嗅觉评价面膜精华液的色泽和气味；粘稠度、刺激性、吸收性由试用后效果打分。具体操作如下：用清水清洗双手手臂，待手臂与空气水分维持平衡后，在受试者的左前臂划出一个4 cm×4 cm的矩形区域，取适量面膜精华液于矩形区域内顺时针均匀涂抹约1 min，静坐15 min，根据使用感受进行打分。感官评定标准见表2。

表2 灵芝面膜精华液的感官评定标准

1.7 灵芝面膜精华液的性能测定

1.7.1 补水保湿性能测定

1.7.1.1 补水性能测定

随机选取10名皮肤健康且经过训练的在校女大学生。用清水清洗双手及手臂，待手臂与空气水分维持平衡后，在受试者的左前臂划出一个4 cm×4 cm的矩形区域，用皮肤水分测试仪测试矩形区域内皮肤的水分含量。取适量精华液于矩形区域内顺时针均匀涂抹约1 min，等待15 min后测区域内皮肤的水分含量。

1.7.1.2 保湿性能测试

准确称取5 g精华液于一次性培养皿内，称重，记为m1，在(20±5）℃，相对湿度为(30±5）%的条件下放置2 h后再次称重，记为m2，根据下列公式计算面膜精华液的失水率。

失水率=(1-m2/m1）×100%

1.7.2 稳定性试验

1.7.2.1 耐热试验

将面膜精华液装于10 mL玻璃瓶内，分别于25℃、35℃、45℃放置24 h后，在无阳光直射的条件下，观察其颜色、组织状态与放置之前有无明显差异，有无浮油及分层现象。

1.7.2.2 耐寒试验

将面膜精华液装于10 mL玻璃瓶内，分别于-5℃、0℃、5℃放置24 h后，在避免阳光直射的条件下观察其颜色、组织状态与放置之前有无差异。

1.7.2.3 离心稳定性试验

取面膜精华液于离心管内，分别于2 000 r/min、3 000 r/min、4 000 r/min离心15 min，无阳光直射的条件下，观察其颜色、组织状态与放置之前有无差异。

1.7.3 测定pH

取2 mL精华液，加入18 mL煮沸冷却至室温的蒸馏水，搅拌均匀。用pH计测定其pH。

2 结果与分析

2.1 灵芝三萜和多糖的提取结果

先用无水乙醇提取灵芝三萜，提取后的残渣再提取多糖。如此既可以充分利用灵芝原料，避免单独提取三萜或多糖的原料浪费，同时灵芝经无水乙醇处理后，其细胞膜结构被部分破坏，有利于胞内多糖的溶出，提高灵芝多糖的提取率。经测定，灵芝三萜提取浓缩液中的三萜质量浓度为3.065 mg/mL，灵芝多糖提取浓缩液中的多糖质量浓度为4.870 mg/mL。

2.2 灵芝面膜精华液配方的确定

2.2.1 灵芝三萜提取浓缩液质量分数对面膜品质的影响

灵芝三萜具有抗氧化、防紫外线损伤等功效，其用量对面膜品质的影响见表3。由表3可知，随灵芝三萜提取浓缩液质量分数的增加，面膜感官评分呈先上升后降低趋势，在用量为6%时达最高分。这可能是由于灵芝三萜提取浓缩液呈红棕色，随其添加量增加，面膜精华液的颜色越来越深，使志愿者接受度变差，所以确定添加灵芝三萜提取浓缩液的最佳质量分数为6%。

表3 灵芝三萜提取浓缩液质量分数对面膜品质的影响

2.2.2 灵芝多糖提取浓缩液质量分数对面膜品质的影响

灵芝多糖具有保湿、抗衰老等功效，其用量对面膜品质的影响见表4。由表4可知，随灵芝多糖提取浓缩液质量分数的增加，面膜感官评分呈先上升后降低的趋势，在质量分数为10%～15%时分值较高。灵芝多糖提取浓缩液呈淡黄色，适量添加时面膜精华液呈诱人色泽，当添加量过多时精华液颜色过深。综合考虑灵芝成本等因素，选择添加灵芝多糖提取浓缩液的最佳质量分数为10%。

表4 灵芝多糖提取浓缩液质量分数对面膜品质的影响

2.2.3 甘油质量分数对面膜品质的影响

甘油是一种常用的化妆品保湿剂，其添加量对面膜品质的影响见表5。由表5可知，当甘油质量分数为10%～20%时，面膜感官评分较高。这主要是甘油具有一定的黏性，过低或过高都会对面膜精华液的黏性造成不良影响。综合考虑成本等因素，确定添加甘油的最佳质量分数为10%。

表5 甘油质量分数对面膜品质的影响

2.2.4 黄原胶质量分数对面膜品质的影响

黄原胶在面膜精华液中主要起增稠作用，其添加量对面膜品质的影响见表6。由表6可知，黄原胶添加量过少时面膜精华液太稀，像水一样；添加量过多时会导致面膜精华液太稠，不易被皮肤吸收；黄原胶质量分数在0.2%时面膜品质最佳。

表6 黄原胶质量分数对灵芝面膜精华液品质的影响

2.2.5正交试验

在单因素试验的基础上进行正交试验，以考察各因素之间的交互作用，确定灵芝面膜精华液的最佳配方。因素水平表和正交试验结果见表7—表9。

表7 多因素试验因素与水平 %

表8 灵芝面膜精华液L9（34）正交试验结果

表9 正交试验结果的极差分析

由表9可知，影响灵芝面膜精华液品质的因素为A＞C＞B＞D，即灵芝三萜提取浓缩液＞甘油＞灵芝多糖提取浓缩液＞黄原胶。灵芝面膜精华液的最优配方为A2B2C2D3，即灵芝三萜提取浓缩液6%，灵芝多糖提取浓缩液10%，甘油10%，黄原胶0.2%。因最优配方不在正交表的9次试验中，所以进行验证试验。将最优配方(A2B2C2D3）和较好配方(A2B1C2D3）进行比较试验，结果最优配方的感官分高于较好配方，因而确定最优配方为最佳配方。

2.3 灵芝面膜精华液的性能测试

采用最佳配方制备灵芝面膜精华液，并测试面膜的基本性能。

2.3.1 补水性能

健康的皮肤应当是光滑滋润富有弹性，皮肤含水量充足，皮肤水润饱满。涂抹灵芝面膜精华液前后皮肤水分的变化可以直接反映面膜的补水效果。经测试，涂抹灵芝面膜精华液后皮肤的含水量由29.2%增加到52.6%，提高80.1%，表明灵芝面膜具有良好的补水效果。

2.3.2 保湿性能

失水率能够反映面膜精华液的保湿性能。经测试，灵芝面膜精华液的失水率较低，仅为(4.29±0.29）%，表明面膜具有良好的保湿性能。

2.3.3 理化指标及稳定性

灵芝面膜精华液的pH为6.45，符合QB/T 2872—2017中关于面膜pH的规定。灵芝面膜精华液在高温25℃、35℃、45℃和低温-5℃、0℃、5℃存放24 h后，与存放之前并无明显差异，无浮油及分层现象，说明面膜的耐热耐寒性良好。灵芝面膜精华液在不同转速下离心后，没有发生明显的分层现象，也无明显的水分析出，说明灵芝面膜精华液的性质比较稳定。涂抹灵芝面膜精华液后皮肤无刺激，说明面膜温和，能满足消费者的需求。

3 小结

通过单因素试验和正交试验确定灵芝面膜精华液的最佳配方为灵芝三萜提取浓缩液6%，灵芝多糖提取浓缩液10%，甘油10%，黄原胶0.2%，透明质酸钠0.2%，1，3-丁二醇5%，蓖麻油1%，尿囊素0.2%，EDTA二钠0.03%，香精0.02%，加水补足至100%。采用该配方制得的灵芝面膜精华液质地均匀，耐热、耐寒及稳定性良好，温和无刺激，具有良好的保湿和抗氧化功效，而且符合消费者对面膜“绿色、安全、有效”的要求。研究为灵芝在面膜中的应用提供了有益参考。