韩海燕 ，蒲道俊 ，吴红洋 ，余春梅 ，范能全 △

（1. 重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2. 西南药业股份有限公司，重庆 400038）

一次性使用输液器与药液直接注入人体，在给患者治疗的同时也存在风险，输液器材质中的有害物质可能迁移到药液中，对人体产生不良反应［1－4］。输液器合成加工过程中需加入抗氧剂，以抑制或延缓氧化过程［5－7］，这些抗氧剂超出一定限量将对人体肝、脾、肺等器官造成伤害［8］。部分抗氧剂易发生降解，产物仍有较大毒性［9］。近年来，报道抗氧剂与药品包装材料相容性的研究很多［10－18］，但与输液器的相容性研究极少。本研究中以盐酸莫西沙星氯化钠注射液模拟临床输注，采用高效液相色谱法（HPLC）法测定输液器聚氯乙烯（PVC）和热塑性弹性体（TPE）中7 种抗氧剂的迁移量。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260Ⅱ型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ－500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为500 W，频率为40 kHz）；VG3 S25型旋涡混匀器（德国IKA 公司）；一次性输液器［A 公司，PVC（批号为 20190304），TPE（批号为 20190620）］。

1.2 试药

抗氧剂 1310 对照品（批号为 1－TTK－115－1，含量为 97% ），抗氧剂 1010 对照品（批号为 5－LXM－44－1，含量为98%），抗氧剂1076 对照品（批号为5－LXM －45－1，含量为 97% ），均购自 Toronto Research Chemicals；抗氧剂 2，4－二叔丁基苯酚（2，4－DTBP）对照品（批号为 G880823，含量为 99.5% ），抗氧剂 2，6 －二叔丁基对甲酚（BHT）对照品（批号为G133110，含量为 99.52% ），抗氧剂 168 对照品（批号为 172881，含量为 98.5% ），均购自 Dr.Ehrenstorfer；抗氧剂 330 对照品（European Directorate for the Quality of Medicines，批号为P2155010，含量为 100% ）；乙醇（色谱纯，Fisher Chemical，批号为170063）；甲醇（色谱纯，河北百灵威超精细材料有限公司，批号为LCC0S96）；冰醋酸（分析纯，重庆川东化工＜集团＞有限公司，批号为20200601）；盐酸莫西沙星氯化钠注射液（B 公司，规格为每支 0.4 g ∶250 mL，批号分别为 1811081，1811101，1811121）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent 5 TC －C18（2）柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1%乙酸（A）－ 甲醇（B）溶液，梯度洗脱（程序见表 1）；流速：1.0 mL ／min；检测器：二极管阵列检测器（DAD）；检测波长：228 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。空白溶剂（乙醇）、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液在此色谱条件下的色谱图见图1。结果空白溶剂色谱图中未出现对照品溶液色谱图中目标物质的峰，供试品加标溶液色谱图中目标物质的峰与其他峰无干扰。

图1 系统适用性试验高效液相色谱图1.antioxidant 1310 2. antioxidant 2，4 － DTBP 3.antioxidant BHT 4. antioxidant 1010 5.antioxidant 330 6.antioxidant 1076 7.antioxidant 168A.Blank solvent B.Reference solution C. Test solution D.Test spiked sample solutionFig.1 HPLC chromatograms of the system suitability test

表1 流动相梯度洗脱程序（%）Tab.1 The elution program of the mobile phase（%）

2.2 溶液制备

取样品，模拟输液过程，量取通过输液器的样品5 mL，置分液漏斗中，加二氯甲烷5 mL 萃取，收集二氯甲烷层，再加二氯甲烷5 mL 重复萃取1 次，合并2 次萃取的二氯甲烷层，用氮气吹至干，用乙醇定容至1 mL，涡旋振荡 1 min，0.45 μm 滤膜滤过，上机测试。

2.3 方法学考察

线性关系考察与检测限确定：取抗氧剂1310，1010，1076，330，168，BHT，2，4 － DTBP 对照品各50 mg，精密称定，置同一100 mL 容量瓶中，加乙醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品贮备液；逐级稀释得各目标物质质量浓度分别为 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μg ／mL 的标准工作溶液；按 2.1 项下色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、标准工作溶液质量浓度（X，μg／mL）为横坐标进行线性回归。线性回归方程见表2。将标准工作溶液用乙醇逐级稀释，并进样测定，以信噪比（ S／ N）为3 时的质量浓度为各目标物质的检测限。结果见表2。

表2 方法学考察结果Tab.2 Results of the methodological investigation

精密度试验：精密吸取上述对照品贮备液适量，按2.1 项下色谱条件进样测定6 次，记录色谱图。结果见表2，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取上述对照品溶液适量，分别放置 0，2，6，12，24，48 h 时按 2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果见表2，表明对照品溶液放置48 h 稳定。

重复性试验：按2.2 项下方法制备供试品溶液，加入质量浓度为200μg／mL 的标准工作溶液50μL，按 2.1 项下色谱条件平行测定6 次。结果见表2，表明方法重复性良好。

加样回收试验：按2.2 项下方法制备供试品溶液，分别加入质量浓度为200 μg／mL 的标准工作溶液10，50，100 μL，得质量浓度分别为 2，5，10 μg ／ mL 的溶液3 份，并进样测定，计算回收率。结果见表2。

耐用性试验：微调色谱条件中流动相的流速和柱温，结果改变参数后，抗氧剂 1310，330，1010，1076，168，BHT，2，4－DTBP 均能良好分离，表明方法耐用性良好。

2.4 材料与迁移试验

按风险从严控制的研究思路，选择较剧烈的条件作为考察条件，设计迁移试验。将盐酸莫西沙星氯化钠注射液于 40 ℃条件下放置 0，60，90，120 min，模拟临床使用的滴注方法，一般药物静脉滴注的速率为30 ～60 滴／分，1 mL 液体滴数一般为15 滴，输液时间（分）＝［液体总量（mL）× 15 滴 ］÷ 每分钟滴数［19］，计算得本规格品种的静脉滴注时间为 62.5 ～ 125.0 min。本试验控制滴注速率为40 滴／分，制得样品溶液。按2.2 项下方法配制供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果3 批（批号分别为 1811081，1811101，1811121）样品在不同材质（PVC 和 TPE）输液器中，抗氧剂 2，4 － DTBP和 BHT 在 0，60，90，120 min 时的迁移量均未超过0.04 μg ／mL，抗氧剂 1310，330，1010，1076，168 均未检测到。7 种抗氧剂分析阈值与定量限见表3。

表3 7 种抗氧剂分析阈值与方法定量限检测结果Tab.3 Analytical threshold and limit of quantitation of seven antioxidants

3 讨论

3.1 溶剂选择

抗氧剂 1310，BHT，2，4－DTBP 易溶于极性溶剂（甲醇、乙醇）中，抗氧剂 1010，330，1076，168 易溶于中等极性或非极性溶剂中。综合考虑，本研究中7 种物质流动相的极性，通过试验进一步确定7 种物质在乙醇中均有一定溶解度，且无目标物质的干扰峰，故最终选择乙醇为溶剂。

3.2 流动相选择及梯度洗脱程序优化

曾以四氢呋喃－乙腈为流动相，出峰较快，效率高，但考虑到溶剂挥发对人体健康有影响，故选用甲醇水溶液为流动相，发现抗氧剂1310 的峰形拖尾严重，其他目标物质的峰形良好；分析拖尾分子的结构，改变流动相pH 值，将水改为0.1%乙酸溶液后，抗氧剂1310 的峰形不再拖尾，其他目标物质峰形也未受影响。考虑到药品中辅料和主药峰的影响，将0.1%乙酸的比例提高，使目标峰后移，排除干扰。根据各抗氧剂的极性，进一步调节流动相梯度，获得最佳分离度。最终确定为2.1 项下的流动相及梯度洗脱程序。

3.3 检测波长选择

比较 DAD 检测器的全波段吸收值，分别选择276 nm 和228 nm 作为检测波长。综合比较7 种抗氧剂的检测限、定量限及干扰峰影响情况，选择灵敏度高、无干扰的检测波长228 nm。

3.4 迁移测试结果及安全性评价

取盐酸莫西沙星氯化钠注射液适量，于30 ℃条件下放置 0，60，90，120 min，并模拟临床使用的滴注方法，结果药品与输液器接触后发生了部分迁移，小于定量限安全阈值的有抗氧剂2，4－DTBP 和 BHT，其他5 种抗氧剂均未检出。不会给药品带来安全风险。

3.5 方法评价

该方法操作简便，结果准确，适用性较强，灵敏度高，稳定性和重复性均较好，可用于同时测定输液器抗氧剂在注射液中的迁移量，为进一步评价其安全性提供参考。