李超亚，潘金梅，韩君勇

（中山大学附属第五医院 心血管内科，广东 珠海 519000）

0 引言

高血压病是临床的常见病、多发病，因其并发症多且严重，是导致死亡的主要原因之一，严重威胁人类健康[1]。放射治疗是利用放射线治疗肿瘤的一种局部治疗方法。放射治疗在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出，已成为治疗恶性肿瘤的主要手段之一。延髓腹外侧区（RVLM）是机体延髓区域内的一个多功能复合体，具有调节机体呼吸功能、运动功能和心血管功能等作用。Salusin-β在中枢神经系统分布广泛，中枢神经系统（特别是延髓）对心血管活动具有非常重要的调节功能[2]。本实验拟在麻醉下给予不同剂量X射线照射SHR大鼠RVLM后观察大鼠血压的变化；检测照射后大鼠RVLM中salusin-β表达的变化，初步探讨放射照射SHR大鼠RVLM对其血压影响影响及可能机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料。采用12周龄雄性自SHR 18只及血压正常的同龄雄性封闭系对照WKY大鼠WKY6只为研究对象，本实验所用12周龄雄性SHR及其血压正常的同龄雄性封闭系对照WKY大鼠均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物饲养于SPF级动物饲养房，繁殖条件相同。本实验采用双重对照组。对照组：（只麻醉不照射、即佯装照射）照剂量为0 GY的WKY大鼠6只为WKY对照组（A组）；照剂量为0 GY的SHR大鼠6只为SHR对照组（B组）；实验组：照剂量为4 GY的SHR大鼠6只为低剂量照射组（C组）；照剂量为8 GY的SHR大鼠6只为高剂量照射组（D组）。

1.2 实验步骤及方法。放射照射前后体重测量：放射照射前2天及放射照射结束1周后分别采用精密天平测量各大鼠清醒安静状态下体重，记录至0.1 g。放射照射：大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉，麻醉后将大鼠俯卧位固定在固定架上，使其四肢舒展开并用胶带固定四肢，仅头部暴露在照射野，其余部位用防辐射铅衣围遮挡保护以避免照射，先置于模拟机下定位以确定照射部位RVLM，在体表标记明确照射野，实验组辐照装置用中山大学第五附属医院放疗科提供的医科达直线加速器产生的6 MV的X射线一次性分别给予4 Gy，8 Gy，局部照射，照射野大小为1.0×1.0 cm，（4Gy照射时间约为80 s，剂量率为300 MU/min，皮源距为100cm，照射中心在皮下1.0 cm）。SHR对照组及WKY对照组麻醉后置于放疗机下佯装照射，即只麻醉不进行照射（0 Gy）。照射前后血压测量：放射照射实验前2 d及放射照射结束1周后，分别采用BP-6无创动物血压测量系统测量大鼠鼠尾的动脉血压即收缩压（SBP）。每只大鼠重复测量记录三次鼠尾收缩压，取三次测量平均值为测得收缩压值。取延髓：采血完毕后麻醉下处死大鼠，根据Paxinos和Watson的大鼠立体定位图谱取下头端延髓腹外侧区RVLM组织（人字点即对耳线后退约2.3～4.6 mm，中线旁开约1.0～3.0 mm，小脑背侧表面下降约8.5～10.5 mm），直接置于冻存管中用于Western-Blot检测。

1.3 观察指标。放射照射前后大鼠体重、血压测量、放射照射后RVLM中salusin-β表达情况。

2 结果

2.1 放射照射前后WKY及SHR大鼠体重、血压对比。放射照射前2天对照组A组与对照组B组相比收缩压有统计学差异（P＜0.001）；照射前2 d对照组B组与实验C组、实验D组三组之间体重及收缩压均无统计学差异（P＞0.05）；照射结束后1周SHR大鼠间体重无明显统计学差异（P＞0.05），以上结果显示WKY与SHR大鼠之间、SHR大鼠之间具有良好的可比性，结果见表1。

表1 放射照射前后WKY及SHR大鼠体重、血压对比（±s）

表1 放射照射前后WKY及SHR大鼠体重、血压对比（±s）

注：A组：WKY对照组、B组：SHR对照组、C组：SHR低剂量照射组、D组：SHR高剂量照射组；SBP：收缩压；BW：体重。放射照射前A组与B组比较，★P＜0.05，★★P＜0.001。

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2.2 放射照射前后WKY及SHR大鼠收缩压变化。照射结束后1周对照组A组收缩压对比照射前2天变化无统计学差异（P＞0.05）；照射结束后1周对照组B组与实验组C组、实验组D组三组间收缩压比较：B、C、D三组间比较有统计学差异（P＜0.001），结果显示C组、D组收缩压低于B组，D组收缩压低于C组。提示放射照射SHR大鼠RVLM可对其收缩压产生影响，结果见表2。

表2 放射照射前后WKY及SHR大鼠收缩压变化（±s）

表2 放射照射前后WKY及SHR大鼠收缩压变化（±s）

注：A组：WKY对照组、B组：SHR对照组、C组：SHR低剂量照射组、D组：SHR高剂量照射组；SBP：收缩压。放射照射后B组、C组、D组三组间比较，★P＜0.05，★★P＜0.001。

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2.3 各组RVLM中Salusin-β在不同组间蛋白质情况。采用免疫印迹实验（Western-Blot）在蛋白质水平验证WKY和SHR大鼠RVLM内Salusin-β蛋白的表达差异，采用β-Actin抗体作为内参，定量分析Salusin-β在蛋白质水平RVLM的表达情况。Salusin-β蛋白与β-Actin抗体的Western-Blot检测结果显示Salusin-β蛋白在WKY和SHR大鼠在RVLM均有表达如图1所示。A、B两组相比较：B组Salusin-β蛋白条带较A组粗大，提示B组Salusin-β蛋白含量较高。B、C、D三组比较：B组Salusin-β蛋白条带较C组粗大，C组条带较D组粗大，提示B组Salusin-β蛋白含量较C组高、C组较D组高。蛋白质条带图像结果采用Image J图像分析软件分析，测定Salusin-β及β-Actin抗体的条带灰度值，通过比较灰度比值分析不同组间Salusin-β的表达量。结果显示：A、B两组比较：B组中Salusin-β蛋白含量明显高于A组（P＜0.05）（表3）。B、C、D三组比较，有统计学差异（P＜0.001），B组中Salusin-β蛋白含量明显高于C组，C组高于D组（表4）。上述结果提示放射照射SHR大鼠RVLM可引起RVLM中细胞内Salusin-β蛋白的含量减少。

图1 各组RVLM中Salusin-β在不同组间蛋白水平的表达

表3 A/B两组RVLM中Salusin-β在蛋白质表达量（±s）

表3 A/B两组RVLM中Salusin-β在蛋白质表达量（±s）

注：A组：WKY对 照 组、B组：SHR对 照 组。A、B组 比 较，★★P＜0.001。

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表4 B/C/D三组RVLM中Salusin-β在蛋白质水平表达量（±s）

表4 B/C/D三组RVLM中Salusin-β在蛋白质水平表达量（±s）

注：B组：SHR对照组、C组：SHR低剂量照射组、D组：SHR高剂量照射组。B组、C组、D组三组间比较，★P＜0.05，★★P＜0.001。

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3 讨论

高血压可导致脑卒中、冠心病事件、终末期肾病的风险增加，是致死、致残最常见的病因性疾病之一，严重消耗医疗和社会资源，给家庭和社会带来沉重的负担[3]。鉴于高血压患者数量庞大，危害巨大，着手探索新的高血压治疗领域，寻找新的治疗高血压的方法十分必要。本研究选用12周龄雄性SHR及WKY作为研究对象，待其适应动物房环境后，测量其放射照射前2天体重及收缩压，结果显示放射照射前SHR间体重及收缩压均无明显差异，显示SHR大鼠组间具有良好的可比性；照射结束后1周低剂量照射组SHR大鼠收缩压（171.17±3.58）mmHg低于SHR对照鼠（188.38±3.04）mmHg，高剂量照射组收缩压（163.16±3.42）mmHg低于低剂量照射组收缩压（171.17±3.58）mmHg。这个结果表明放射照射SHR大鼠RVLM后可使其收缩压下降，本研究还发现血压下降程度与照射剂量大小相关。然使其血压下降的具体机制仍不十分明确。

新近发现的Salusins是一种具有内源性心血管调节活性肽，在动物及人体心血管系统均有多方面的影响[4]；Salusin-β在中枢神经系统分布广泛，中枢神经系统（特别是延髓）对心血管活动具有非常重要的调节功能。在麻醉大鼠延髓经典升压区头端延髓腹外侧区（RVLM）微量注射Salusin-β可产生快速、显著的升高血压，加快心率效应。Salusin-β在SD大鼠RVLM产生剂量依赖性升高血压的作用[5]。我们的研究通过Western-Blot法检测了SHR及WKY大鼠RVLM组织中Salusin-β表达情况，结果提示：SHR对照组大鼠RVLM组织中Salusin-β表达高于WKY对照组大鼠，有统计学意义，这与前人研究结果一致，支持SHR大鼠RVLM组织中Salusin-β表达高低与其高血压发展形成具有相关性。放射照射结束1周后SHR对照鼠、低剂量照射的SHR大鼠、高剂量照射的SHR大鼠三组间比较：三组间有统计学差异；大鼠RVLM组织中Salusin-β表达SHR对照鼠高于低剂量照射的SHR大鼠；低剂量照射的SHR大鼠高于高剂量照射的SHR大鼠。结合前述前人研究结果：RVLM微量注射salusin-β可升高血压，及我们前面放射照射后SHR大鼠RVLM使其血压下降，我们推测放射照射SHR大鼠RVLM后引起其RVLM中Salusin-β表达的减少可能是引起照射后收缩压下降的因素之一，放射照射剂量高低与Salusin-β表达高低有关。

综上所述，放射照射RVLM可引起自发性高血压大鼠收缩压下降，收缩压下降程度与接受照射剂量高低相关；自发性高血压大鼠（SHR）血压升高的原因与RVLM中Salusin-β表达情况相关。自发性高血压大鼠RVLM中Salusin-β表达减少可能是引起其照射后收缩压下降的因素之一。