◎ 莫勤妹

（崇左市农业综合检测中心，崇左市农业生态与资源保护站，广西 崇左 532200）

广西崇左市处于北回归线以南，属于亚热带湿润季风气候，土地肥沃，光照和降水都充足，适合种植柑橘，而检测柑橘农药残留的方法用时较长，耗材使用较多，为了使流入市场的柑橘可以放心食用，建立快速、精准检测柑橘中的农药残留方法迫在眉睫。本文建立了用气相色谱-质谱同时测定柑橘中9种有机磷类农药残留的分析方法，供农残检验检测机构参考。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

三重四极杆气相色谱质谱联用仪GCMS-TQ8030（日本岛津公司），AOC-20i自动进样器，IE离子源；色谱柱：SH-Rtx-5siIMS（30 m×0.25 mm，0.25 μm），最高使用温度350 ℃；湘仪高速离心机H1850；多管混合漩涡器Multim-Tubevortexer。

乙腈，色谱纯，德国默克股份有限公司；丙酮，色谱纯；甲拌磷、乐果、毒死蜱、水胺硫磷、甲基异柳磷、氟虫腈、克百威、治螟磷及三氯杀螨醇标准品，浓度均为100 μg·mL-1，均购自农业农村部环境保护科研监测所。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液配制

将9种浓度为100 μg·mL-1的农药标准物质用丙酮稀释到10 μg·mL-1单标，各取1 mL母液转移到10 mL容量瓶中，用丙酮定容，充分混匀，配制成1 μg·mL-1的混合标准溶液。本次实验研究要检测的农药残留覆盖的种类较多，难以寻找合适的同位素内标和保护剂，因此采用基质匹配标准溶液法[1]。用柑橘作为基质，配制成 1.00 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1的混合基质标准工作液备用。

1.2.2 样品制备

将样品切碎，充分混匀，用四分法和对角线法反复取样后，放入匀浆机器破碎成匀浆。把每个样（果浆）装入2个规格符合要求的样品瓶，分正、副样两份，每份不少于300 g，密封并标记，置于-20 ℃冰箱保存。

1.2.3 样品提取、纯化浓缩

称取10 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管，向待测样品的离心管中加入10 mL乙腈、盐包（内含MgSO44 g、NaCl 1 g、柠檬酸钠1 g、柠檬酸氢二钠0.5 g）后盖上离心管盖，剧烈振荡1 min后，将离心管以2 500 r·min-1的速率振荡1 min再转到高速离心机以7 000 r·min-1的速率离心3 min。抽取1.50 mL上清液转入净化管中（内有无水MgSO4150 mg、SPE粉末50 mg和C18 50 mg），剧烈振摇1 min，漩涡振荡1 min，离心5 min。取上清液过0.22 μm微孔滤膜，收集于1.5 mL进样瓶中，供GC-MS/MS测定。

1.2.4 色谱设定条件

进样口温度：250 ℃；柱箱温度：50 ℃；进样方式：无分流进样，1.5 min后打开分流阀和隔垫吹扫阀；流量控制方式：总流量30 mL·min-1，柱流量30.0 mL·min-1，线速度47.2 cm·s-1，吹扫流量5.0 mL·min-1，总程序17.00 min；升温程序具体见表1。

表1 柱箱升温程序表

1.2.5 质谱设定条件

离子轰击源：70 eV；离子源温度：200 ℃；GC-MS接口温度：250 ℃；溶剂延迟时间：4 min；检测器电压相对于调谐结果为0.6 kV，在70 eV/Sim扫描和监测的电子轰击源中为每个组件选择一个定量离子对和两个定性离子对。

2 结果与分析

2.1 前处理方法的选择

本方法的前处理主要针对GB 23200.113—2018中蔬菜水果食用菌方法进行优化。在GB 23200.113—2018方法中选用的是含MgSO4（900 mg）及PSA（150 mg）的净化离心管（样品颜色较浅时）和含有MgSO4（885 mg）、PSA（150 mg）及GCB（15 mg）的净化离心管（对于颜色较深的试样），而本方法前处理采用的是含有无水MgSO4（150 mg）、SPE粉末（50 mg）和C18（50 mg）净化管，另外，本方法比GB 23200.113—2018减少了水浴氮吹的步骤，具有操作简单，使用耗材较少的优势。为了检验本文前处理方法的准确性，对两种前处理方法采取了加标回收试样的方法进行比较。加标最终浓度为0.15 mg·kg-1时，本方法和标准方法的回收率情况如表2所示。

表2 两种前处理方法加标回收率的比较表

本方法前处理简便，省时省耗材，根据表2两种前处理方法加标回收率的比较表得知本方法前处理加标回收情况良好，适用于大批量快速定量分析。

2.2 保留时间和离子对的确定

将配制的10 μg·mL-1正构烷烃上机，采用Q3Scan扫描方式进行扫描，采集C9～C33。利用仪器自带的农药库校准9种农药的保留时间，选择响应强度较高的3个离子，其中1个作为定量离子，2个作为定性离子，根据选择的离子对进行碰撞能量和碰撞电压的优化[2]。例如，治螟磷的定量离子和2个定性离子色谱图如图1所示。

图1 治螟磷定量色谱图

质谱的图谱中每个质谱峰表示1种质核比的离子，根据质谱峰的位置进行定性[3]。将配制好的1 μg·mL-1混合标准溶液按照优化好的上机条件进行MRM扫描，得到的标准色谱图如图2所示。

图2 9种农药标准图谱图

2.3 标准曲线和线性关系

将配制好的 0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1混合标液上机。在1.2.4色谱设定条件和1.2.5质谱设定条件下进行测定。结果表明，各组分的浓度与峰面积的线性关系良好，除氟虫腈相关系数为0.998以外，其余组分的相关系数都在0.999以上。线性方程和相关系数如表3所示。

表3 线性方程和相关系数表

2.4 加标回收试验效果

使用上述方法检测添加浓度为0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.15 mg·kg-1、0.20 mg·kg-14 个梯度的加标回收试验，柑橘种9种农药回收率情况见表4。

表4 不同添加值下的各农药回收率情况表

由表4可知，柑橘种9种农药回收率为70%～120%，除了克百威、乐果稳定性较差（回收率在70%左右）以外，其他目标化合物回收率情况良好。

2.5 实际样品结果

本次实验共16个样本，分别来自市场以及基地。样品按照1.2进行处理得到待测液后，按照1.2.4色谱设定条件和1.2.5质谱的设定条件上机，进样1 μL得到色谱图，按照峰面积计算结果。本次实验共有5个样品检出农药残留，检出克百威5次，三唑磷2次，根据GB 20769—2019标准要求，均未超标。本方法与标准方法进行比较，误差较小，相对偏差符合要求。

3 结论

GC-MS/MS法中的Q3Scan和MRM测定方式基线噪声小、干扰少，具有与GC-FPD或GC-NPD法相当甚至更高的灵敏度[4]。本方法在保证结果可靠性的前提下简化操作步骤，缩短了提取、纯化、浓缩过程的时间，操作简单，准确性、精密度和灵敏度都比较好，结果可靠，符合农药残留分析实验的要求[5]，因此气相色谱-质谱联用仪可以同时对柑橘中治螟磷、甲胺磷、甲基异柳磷、毒死蜱等9种农药同时进行定量测定和定性确证，且线性关系良好，使用耗材量少，可以用于柑橘类水果农药残留大批量快速检测。