廖建良，蔡敏玲

（惠州学院 生命科学学院，广东 惠州 516007）

多穗石柯（Lithocarpus polystachyus（Wall.）Re⁃hd.）别名多穗柯、甜叶子树、甘茶、胖稠等，系壳斗科石柯属常绿乔木.广东罗浮山酥繆村野生多穗石柯，其根、叶、果实均可入药，其叶泡水味道甘甜可口，兼具茶、糖、药三种功能，常作清热解毒和安神降压之品，被村民拿来当茶饮用，又称罗浮山甜茶.民间认为罗浮山甜茶有益于人们身体健康，不仅能生津止渴，而且对人体有很好的药理作用和保健功能［1-8］，也被罗浮山村民称为长寿茶.多穗石柯分株、分根及种子繁殖方式，但这三种繁殖方式由于受到材料和季节时间的制约，很难短时间获得大量苗木.植物生长调节剂在枝条扦插和组织培养方面的研究已经有相关报道，组织培养可以在短时间内获得大量健康苗木，且具有繁殖系数高、成本低、速度快等特点，因此在推广培养品种、迅速满足市场需求等方面具有重要意义［9-19］.本研究通过不同植物生长调节剂、不同基质对多穗石柯枝条扦插和组织培养的繁殖影响，探讨多穗石柯扦插栽培及组织培养技术，以期解决目前罗浮山多穗石柯育苗繁殖中存在的问题.

1 材料与方法

1.1 研究材料

多穗石柯扦插枝条取自罗浮山基地，组织培养试验以多穗石柯带芽幼茎的一年扦插枝条为材料.

1.2 仪器与试剂

植物生长调节剂有6-BA、NAA、ABT生根粉，MS培养基粉（不含琼脂和蔗糖）、琼脂粉、蔗糖，75%酒精、0.1%氯化汞.

光照恒温培养箱，超净工作台，立式高压蒸汽灭菌锅，电子天平秤，培养瓶、锥形瓶、容量瓶、烧杯等玻璃仪器，镊子，剪刀，扦插培养袋等.

1.3 研究方法

1.3.1 扦插试验设计

扦插枝条处理：将从罗浮山采集回来的新鲜健壮半木质化嫩枝条剪截成长10 cm插穗，保留2~3个无损伤的侧芽和2~3片成熟叶片，上端平口，下端45度斜口，切口平滑且没有撕裂，生根粉溶液处理前先用1%高锰酸钾溶液浸泡消毒10 h.

生根粉试验：用50、100、150、200、250 mg/L生根粉溶液浓度分别浸泡处理好的枝条下端切口16 h，清水对照，每处理50根枝条，重复三次；将处理后的枝条扦插于黄心土基质的培养袋苗床中，在阴天或傍晚进行，定期喷50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液各50 mL.

扦插管理：将处理后的枝条扦插于苗床中，扦插深度为3-5 cm，行间距8 cm，枝条间距6 cm，扦插后浇水湿润，在所有的培养袋苗床上盖上白色塑料薄膜，再在其上1.6 m左右架上一层遮荫网，每天喷水，保持湿润.

指标测定：生根率=扦插枝条生根数/总扦插枝条数×100%；5个月后调查扦插枝条生根率，一年后从各浓度的生根粉溶液试验处理中随机选取10株扦插苗，对其鲜重、叶子数、生根数、根长、苗高进行统计和分析.

基质试验：根据不同生根粉浓度实验结果，用浓度为150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡处理好的插穗16 h，利用黄心土、营养土（主要成分为泥炭土、椰糠、珍珠岩）、河沙3种原料按照不同体积百分比配制成扦插基质（如表1），共计3个处理，每个处理50根枝条，每个重复3次，共450根枝条.

表1 扦插基质配比

1.3.2 组织培养试验设计

材料处理：从生长健康旺盛、无病无虫害的一年生扦插苗上剪下0.5~1.0 cm的带有1~2个腋芽的茎段，再从茎段上离叶柄基部约0.5 cm处把叶子剪下，将带芽茎段放于洗衣粉液中，用软毛刷将表面洗刷干净，置于流水下冲洗1 h，换清水浸泡5 min，继续用流水冲洗1 h后，用蒸馏水冲洗，将材料置于消毒好的培养皿中，放入超净工作台.

消毒处理：在无菌的超净工作台上用75%的酒精浸泡接种材料30 s进行消毒，用无菌水清洗3次，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡10 min进行灭菌，最后用无菌水冲洗3 min，重复4~5次；接种时，将处理后的材料插入不添加植物生长调节剂的MS培养基（以MS为基本成分，4.75 g MS培养基粉添加30 g蔗糖和9 g琼脂粉配制成）中，每瓶接种一个茎段.

诱导出芽培养：将消毒处理后的茎段接种于分别添加了0.5、1.0、1.5 mg/L 6-BA，0.3、0.6、0.9 mg/L NAA的浓度的单独培养基和不同浓度混合的组合培养基中，每瓶接种一个茎段，每个处理各接种10瓶，重复3次；接种完放置于25℃光照恒温培养箱中，25 d后统计诱导出芽效果，根据出芽数和生长势选择最佳生长调节剂组合.

1.3.3 数据处理

运用Excel和SPSS20.0软件对各项实验结果进行数据统计及分析，并用Duncan多重比较法按P＜0.05进行显著性检验.

2 结果与分析

2.1 扦插试验结果与分析

2.1.1 不同浓度ABT生根粉对多穗石柯扦插生根率的影响

由表2可见，没有使用ABT生根粉溶液浸泡的多穗石柯扦插生根率最低；用50 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡，多穗石柯的扦插生根率达79.65%，随着浓度升高，生根率逐渐提高；在使用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡后，生根率达到最高，而此后浓度越高，扦插生根率反而越低；即影响扦插生根率的生根粉溶液浓度顺序为：150 mg/L＞200 mg/L＞100 mg/L＞250 mg/L＞50 mg/L.因此，使用浓度为150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡后，多穗石柯扦插生根率达到最高.

表2 不同浓度ABT生根粉溶液对多穗石柯扦插生根率影响

2.1.2 不同浓度ABT生根粉对多穗石柯扦插一年生苗生长情况

由表3可见，多穗石柯扦插枝条在使用ABT生根粉溶液浸泡后的扦插苗的鲜重、叶片数、生根数、根长、苗高普遍比没有用生根粉溶液浸泡的数值高，且从各项指标看出，浓度为150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡的扦插苗生长情况是最好的，生长势普遍较好.

表3 多穗石柯扦插一年苗生长情况

2.1.3 不同基质、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡处理对多穗石柯扦插的生根率影响

由表4可见，不同基质、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡处理对多穗石柯扦插生根率的影响.实验表明：处理1中，多穗石柯的扦插生根率比其它两个处理效果较好，具有约91.23%的平均生根率；而处理2的生根率次之，平均生根率率为80.54%；处理3的生根率最低，平均生根率为30.70%.因此，在基质为70%的黄心土和30%的营养土，经150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡处理的多穗石柯扦插生根率最高.

表4 不同基质、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡处理对多穗石柯扦插的生根率影响

2.2 不同配比的植物生长调节剂6-BA、NAA对多穗石柯组织培养影响

由表5可知，单独使用6-BA或NAA的多穗石柯组织培养的效果很差，诱导出芽数极少，且生长趋势差；其中，从处理2~4看出随着6-BA浓度提高，出芽数也增长，而在不同浓度NAA中，随着浓度提高，出芽数并没有增长；混合不同浓度6-BA、NAA的培养基中，出芽数相对较多，且芽的生长趋势相对较好，其中，处理12即添加1.0 mg/L 6-BA和0.6 mg/L NAA的组织培养的出芽数最高，且生长趋势最好.

表5 不同配比的植物生长调节剂6-BA、NAA对多穗石柯组织培养影响

（续表5）

3 结论与讨论

3.1 扦插繁殖试验

3.1.1 用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡有利于扦插繁殖

在ABT生根粉溶液浸泡多穗石柯扦插枝条试验中，通过数据分析可以看出：用ABT生根粉溶液浸泡扦插多穗石柯枝条比清水浸泡的生根率高，即ABT生根粉的处理能促进枝条生根，对该扦插效果作用明显；其中，使用150 mg/L的生根粉溶液浸泡16 h的枝条的生根率最高，但与陈金艳等［12］结果有差异；本研究建议，惠州地区多穗石柯的扦插栽培，采用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡16 h后再进行扦插，这样有利于提高其扦插繁殖效率.

3.1.2 70%黄心土和30%营养土的基质与生长调节剂组合更有利于多穗石柯扦插

实验表明：不同生长基质对多穗石柯扦插的生根率有影响，100%黄心土或100%河沙的基质扦插生根率都比用70%黄心土和30%营养土做基质的低，且河沙基质生根率最低，即单纯的河沙不适宜做多穗石柯扦插繁殖的基质；虽然100%黄心土的扦插生根率不低，但相对来说，加入30%的营养土会有助于扦插繁殖.所以，惠州地区栽培多穗石柯时建议用30%的营养土和70%的黄心土作基质，用150 mg/L的ABT生根粉溶液对处理好的多穗石柯扦插枝条进行16 h的浸泡后进行扦插繁殖，这样可增强多穗石柯扦插繁殖的生根效果.

3.2 诱导出芽最佳培养基

添加植物生长调节剂6-BA、NAA的组织培养试验结果表明，混合两种植物生长调节剂可以很好地促进诱导出芽数，其中，诱导出芽数最多且芽生长情况较好的最佳生长调节剂配比是1.0 mg/L的6-BA和0.6 mg/L的NAA.所以，在植物组织培养中促进多穗石柯茎段诱导出芽，建议使用的最佳组合培养基是MS培养基+1.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA.