杨速，操勇清，李海英，卢立志，李国勤，曾涛，陈黎，黄希东，沈军达，陶争荣，田勇*

(1.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江师范大学 化学与生命科学学院，浙江 金华 321004；3.甘肃农业大学 动物科学技术学院，甘肃 兰州 730070；4.新疆农业大学 动物科学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；5.拜城县牧村拜城油鸡原种保护场，新疆 拜城 842314)

我国地大物博，不同的自然环境、社会经济条件和地区文化驯化出各具特色的地方鸡品种，2012年《中国畜禽遗传资源志·家禽志》中收集了189个家禽品种，其中有116个鸡品种，农业部最新公布的国家保护名录中包含28个鸡品种[1]。众多的鸡品种满足了人们多样的生活需要，如鸡肉、鸡蛋的营养价值，特殊品种的药用价值，鸡毛制品的实用价值以及羽毛和斗鸡的观赏价值。但随着人们对畜禽产品需求的增加，一味地提高生产效益，引入外来品种(如来航鸡、星布罗肉鸡等[2])与本地鸡种杂交，导致遗传资源的污染，甚至一些地方品种的灭绝[3]。禽类遗传资源是不可再生的宝贵资源，是家禽业可持续发展的根基。国家和地方政府正在积极出台禽类遗传资源的保护政策，对我国地方鸡品种种质特性和遗传资源的评估和保护十分重要。

拜城油鸡原产于新疆阿克苏地区，是我国珍品油鸡禽品种资源之一，为肉蛋兼用型。其具有肉味鲜美、骨细肉多、抗病力强等诸多优点。因皮肤和肌肉间有一层很薄的脂肪且散发出特殊的香味而得名油鸡[4]。此外，鸡皮中还含有多种脂质成分，包括磷脂、鞘磷脂、酰脂等，能够预防多种心脑血管疾病，促进新陈代谢[5-6]。本研究对300日龄拜城油鸡体重、体尺和蛋品质进行测定，同时采用微卫星标记进行遗传学分析，拟从种质特性和遗传多样性角度对拜城油鸡进行评估，为拜城油鸡的保种育种提供参考资料和科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

拜城油鸡及鸡蛋由拜城县牧村拜城油鸡原种保护场提供。

1.2 体尺性状测定

随机选取300日龄拜城油鸡公母各30只，测量指标包括体重、体斜长、龙骨长、胸宽、胸深、盆骨宽、胫长和胫围8项体尺指标。以上所有指标均参照NY/T 823—2004《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》[7]进行。

1.3 蛋品质测定

取300日龄拜城油鸡鸡蛋45枚，测量其蛋重、蛋黄色泽、蛋壳强度、蛋形指数、哈氏单位和蛋壳厚度6项指标。测量仪器包括多功能蛋品质测定仪、蛋壳强度测定仪、蛋壳厚度测定仪和游标卡尺。

1.4 PCR程序与测序

1.4.1 血样采集

随机选取100只拜城油鸡进行翅下静脉采血，用含乙二胺四乙酸(EDTA)真空采血管进行封装，置于-20 ℃保存，用于DNA提取。

1.4.2 DNA提取与检测

使用杭州新景公司生物试剂开发有限公司的全血DNA小量提取试剂盒进行DNA提取，使用紫外分光光度计检测DNA纯度(D260/280)和浓度。

1.4.3 引物设计与PCR扩增

使用Premier 5.0进行用于基因多态性检测的引物设计或对相关文献中引物进行筛选，优先选择多态性高、核心序列重复次数多的位点，部分引物序列参考黄玲玲的研究[8]。最终使用28对引物进行扩增(表1)。引物交由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

表1 28个微卫星位点PCR扩增引物

PCR扩增程序参考操勇清等[9]的方法，PCR循环条件：预变性3 mim，95 ℃；变性20 s，94 ℃，退火20 s，58 ℃，延伸40 s，72 ℃，35个循环；修复延伸5 mim，72 ℃。采用ABI 3730XL DNA分析仪对含荧光标记的PCR产物进行毛细管电泳，参照刘雅丽等[10]的方法进行。PCR产物由上海杰瑞生物工程有限公司进行DNA直接测序。

1.5 统计与分析

采用Excel对拜城油鸡体尺和蛋品质数据进行统计整理，IBM SPSS 21独立样本T检验进行体尺差异比较，结果采用平均数±标准差表示。采用POPGENE 1.32对多态位点进行有效等位基因和杂合度计算，LittlePrograme 0.6计算多态信息含量。

2 结果与分析

2.1 体尺

拜城油鸡公鸡的体重、体斜长、龙骨长、胸宽、胸深、盆骨宽、胫长和胫围8项指标均显著高于母鸡，公鸡体重比母鸡高24.35%，在体型上，公鸡与母鸡存在明显差异(表2)。

表2 300日龄拜城油鸡体尺测定

2.2 蛋品质

本研究测定了拜城油鸡蛋重、蛋黄色泽、蛋壳强度、蛋形指数、哈氏单位和蛋壳厚度6项蛋品质指标(表3)。

表3 拜城油鸡及其他鸡蛋品质

2.3 遗传参数分析

本试验利用微卫星标记位点对拜城油鸡进行了多个遗传多样性参数统计，28微卫星位点中，ADL136位点有效等位基因、杂合度和多态信息含量均最高，分别为8.12、0.83和0.81(表4)。除上述3个指标均为0的MCW294位点外，ADL201位点多态性最低，有效等位基因、杂合度和多态信息含量分别为0.96、0.06和0.05。28个微卫星位点中，23个位点为高度多态位点(多态信息含量>0.5)，4个位点为中度多态位点(多态信息含量0.25～0.5)，1个位点未显示出多态性，平均多态信息含量为0.57，整体表现为高度多态。

表4 拜城油鸡各基因位点遗传多态性

3 小结与结论

3.1 体重体尺

体重体尺是家禽育种过程中重要的参考指标，不仅可以衡量家禽的生长发育程度和群体的均匀度[14]，还直接或间接影响家禽的生产性能[15]。本试验表明，拜城油鸡的体重体尺存在性别差异，公鸡体重体尺8项指标均显著高于母鸡。邓雨英等[16]、李俊营等[17]分别对黄麻羽雪峰乌骨鸡和黄山黑鸡进行体重体尺测定，同样表明公鸡各项指标均高于母鸡。说明公鸡更具生长优势，在实际生产中应将公母区别饲喂，充分发挥公鸡的生长潜能。拜城油鸡的体重高于藏鸡[18]、丝羽乌骨鸡[19]、乌蒙凤鸡[20]，与宫廷黄鸡[12]相当，但小于浦东鸡[21]，同时体尺各项指标也有不同程度的差异，而不同品种间体型外貌差异的决定性因素是遗传基础。整体而言，拜城油鸡属于体型较大的鸡品种。

3.2 蛋品质

禽类蛋品质是一个综合指标，不仅影响养禽业的经济效益，也与禽类繁殖性能密切相关[22]。蛋品质主要包括蛋重、蛋黄色泽、蛋壳强度、蛋形指数、哈氏单位、蛋壳厚度等指标。蛋重是消费者在挑选鸡蛋过程中最直观的指标，有研究表明，蛋重对繁殖力和总孵化率有显著影响[23]，且在一定范围内，蛋重与孵化率呈正相关[24]。拜城油鸡蛋重52.09 g，高于南丹瑶鸡和广西麻鸡[25]，但低于宫廷黄鸡和罗曼鸡。杨宁[26]研究表明，蛋形指数最好为1.35，本研究显示，拜城油鸡的蛋形指数与该值接近。蛋壳强度与蛋壳厚度会影响蛋在运输加工过程中的破损率，拜城油鸡蛋壳强度和厚度大于白来航鸡、宫廷黄鸡和罗曼鸡，可以保证在运输加工过程中有较低的破损率。哈氏单位是衡量鸡蛋新鲜程度的指标，哈氏单位越高表示蛋越新鲜。本研究中，拜城油鸡哈氏单位为55.32，明显低于白来航鸡、宫廷黄鸡和罗曼鸡，这可能是检测前存放时间过长的缘故。蛋黄颜色是影响消费者选择偏好的性状之一，颜色越深越受消费者青睐。研究表明，蛋黄颜色与母鸡不同产蛋阶段有关[27]。拜城油鸡蛋黄颜色为9.28，蛋黄颜色较深，符合消费者消费偏好。

3.3 遗传多样性

群体的遗传多样性是指群体内所有个体的遗传变异总和。一个群体的遗传多样性越丰富，表明该群体适应环境变化的能力越强，即进化的潜力越大[28]。有效等位基因是反映群体遗传变异大小的指标，能较好地反映群体中起作用的基因数，其值越大则遗传多样性越高。杂合度即基因的多样性，指某个位点杂合子所占的比例[29]。多态信息含量可直接反映位点的多态性，多态信息含量>0.5的位点为高度多态信息位点，0.25<多态信息含量<0.5的位点为中度多态信息位点，多态信息含量<0.25的位点为低度多态信息位点。莫国东等[30]对广西三黄鸡进行微卫星标记分析，共检测到144个等位基因，平均有效等位基因数为3.58，18个位点中15个为高度多态位点，3个为中度多态位点，平均多态信息为0.639 3。曲鲁江等[31]利用微卫星对我国78个鸡品种进行遗传多样性分析，平均多态信息含量为0.573，其中双莲鸡最高，为0.633，狼山鸡最低，为0.456。吾买尔江·艾孜木等[32]对拜城油鸡的遗传多样性进行分析，结果显示多态信息含量为0.722，高于本研究结果，原因可能是选取的微卫星位点不同或者试验鸡群存在差异，但均为高度多信息位点，表明拜城油鸡具有丰富的遗传多样性。

拜城油鸡为肉蛋兼用型，其肉味鲜美、骨细肉多。本试验对拜城油鸡体重体尺和蛋品质进行测定分析，同时采用微卫星标记进行遗传多样性分析，为拜城油鸡种质资源的开发利用和保护提供参考资料。