熊 英，雷 健，邢 茂

磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂是医院的自制制剂，用于治疗鼻黏膜糜烂性溃疡，鼻中隔手术后促进肉芽生长，加速伤口愈合，并有润滑鼻黏膜的作用，可迅速缓解鼻炎术后患者鼻出血、鼻部干燥不适、嗅觉障碍、鼻痒、异物感等临床症状，为医院临床不可或缺的非标准自制制剂[1]。其主药磺胺嘧啶抗菌谱广，对大多数革兰阳性菌和阴性菌均有抑制作用[2-3]，辅料鱼肝油又具有补充病变部位营养物质的作用，促进肉芽生长，具有标本兼治的功效[4]。原质量标准采用化学滴定法测定磺胺嘧啶的含量，已不能满足新版药典对药品的质量要求。为了更好地控制药品质量，保证临床用药安全，通过查阅文献资料[5-7]，采用高效液相色谱(HPLC)法测定医院自制制剂磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂中磺胺嘧啶含量，提高医院自制制剂质量标准。

1 材料与方法

1.1 仪器 数字酸度仪（厂家：赛多利斯，型号：PB-10），高效液相色谱仪(厂家：安捷伦科技，型号：Agilent 1260)，反渗透制水机（厂家：重庆恒诺；型号：HN-2R0-2000）,电子天平（厂家：重庆福运来科技；型号：JA5003B）。

1.2 试药 磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂由陆军军医大学第二附属医院制剂室提供（批号：150212、150413、150511），对照品磺胺嘧啶购于中检院（C10H10N4O2S；批号：100026-201404；含量以99.9%计）；原料药磺胺嘧啶生产厂家为西南合成制药（批号：201206131；含量以99.8%计）；色谱级乙腈、醋酸铵以及三乙胺生产厂家分别为Honeywell、Aladdin、天津市光复精细化工研究所；纯化水；分析纯乙酸乙酯和盐酸购于重庆川东化工集团有限公司。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液 取SD对照品适量，置50 ml容量瓶中，加2 ml稀HCl，加流动相制成贮备液Ⅰ。精密量取贮备液Ⅰ2 ml，加流动相使成0.1 mg/ml溶液。

1.3.2 供试品溶液 量取20 ml稀HCl置分液漏斗，精密量取磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂2 ml加入上述分液漏斗中，用稀HCl分次洗涤移液管内壁，洗液并入分液漏斗中，量取10 ml乙酸乙酯，加入上述分液漏斗，充分振摇，分取稀HCl液。乙酸乙酯层再用20 ml稀HCl萃取，萃取两次。合并稀HCl萃取液，置200 ml量瓶中，用流动相定容至刻度。精密量取1 ml上述溶液，置10 ml量瓶中，用流动相定容至刻度。

1.3.3 阴性对照溶液 照处方制备缺SD的磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂阴性样品，再按1.3.2项下处理方法制备，即得。

1.4 色谱条件 色谱柱：岛津Inertsil ODS-3-C18（250 mm×4.6 mm）；工作站：ChemStation for LC＆LC/MS systems Rev.C.01.05；流动相：0.3%醋酸铵溶液-乙腈(80∶20)；柱温：25℃；进样体积：10μl；检测波长：260 nm。

1.5 专属性实验 取1.3.1、1.3.2及1.3.3项下3种溶液，按照1.4项下HPLC条件进行测定，记录液相图谱。

1.6 线性相关性考察 精密量取10 ml贮备液I，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，即为贮备液Ⅱ。分别取1.5 ml、3 ml、5 ml、8 ml贮备液Ⅱ，用流动相稀释成质量浓度为0.029832、0.059664、0.09944、0.159104 mg/ml的溶液。分别取上述溶液及贮备液Ⅱ，按照1.4项下色谱条件进样测定，记录峰面积。

1.7 仪器精密度实验 取对照品溶液，按照1.4项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图。

1.8 重复性实验 取批号为150212的磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂2 ml，平行制备6份供试品溶液，按1.4项下色谱条件，测定150212批次磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂样品含量。

1.9 中间精密度实验 取批号为150212的磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂2 ml，平行制备6份供试品溶液，按1.4项下色谱条件，由不同于重复性实验的人员按照1.4项下方法测定6份平行供试品溶液的含量。

1.10 加样回收率试验 精密称定SD原料药约8 g、10 g和12 g(分别约为处方量的80倍、100倍和120倍)，分别置于3个烧杯中，加入适量鱼肝油，搅拌分散均匀，另取硬酯山梨坦0.5 g加水10 ml，加热融化，再加入上述液体中，搅拌乳化后，加鱼肝油至全量100 ml（约为处方的100倍），搅匀，即得。分别取上述烧杯中不同浓度磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂样品适量，各3份，置125 ml分液漏斗中，按照1.3.2项下方法平行制备9份。按照样品测定方法操作，记录色谱图，计算SD回收率。

1.11 溶液稳定性实验 取同一批磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂，按照1.3.2项下方法制备供试品溶液。分别于0、2、4、6、8 h按1.4项下色谱条件测定，考察制剂中SD峰面积变化。

1.12 耐用性实验 按照1.3.1和1.3.2项下方法，制备对照品溶液及样品溶液，将色谱条件参数作适当变化后，在不同的色谱条件下测定样品含量，考察方法的耐用性。

1.13 含量测定 取磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂3批（批号：150212、150413、150511），按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算该自制制剂中SD含量。

2 结果

2.1 专属性实验 结果显示在S D出峰处无其他辅料峰干扰，说明空白辅料对SD的含量测定无干扰作用，该方法专属性良好（图1）。

图1 高效液相色谱

2.2 线性相关性考察 以峰面积值A为纵坐标（y），以SD对照品浓度C为横坐标（x），进行回归分析，计算得线性方程：y=44030x-75.37，相关系数为1。结果表明，SD在29.83～198.9μg/ml范围内，浓度C与其峰面积A呈较好的线性关系。

2.3 仪器精密度实验 结果显示，SD峰面积RSD为0.07%（n=6），表明上述色谱法精密度较高，满足磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂含量测定要求。

2.4 重复性实验 结果显示，磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂样品平均含量为97.54%，RSD为0.49%（n=6），表明本方法重复性较好。

2.5 中间精密度实验 将1.7项下与1.9项下实验共12个实验结果合并计算，平均含量为98.53%，RSD为1.12%（n=12），见表1。结果表明，本法中间精密度良好。

2.6 加样回收率实验 结果显示，低、中、高3个级别质量浓度SD平均回收率为101.90%，RSD为0.98%（n=9），见表2。

表1 中间精密度实验结果

表2 加样回收率实验结果

2.7 溶液稳定性实验 对照品和供试品溶液SD峰面积RSD分别为0.39%和0.11%。结果表明对照品溶液、供试品溶液在配制完成后8 h内均稳定。

2.8 耐用性实验结果 实验结果表明，色谱条件作适当变化后，对测定该自制制剂中SD含量结果未产生显著性影响，表明本法耐用性良好，见表3。

表3 耐用性实验结果(%)

3 讨论

检测波长的选择：对SD乙腈溶液进行紫外扫描，紫外图谱显示SD最大吸收波长为268 nm。根据《中国药典》2015年版二部,磺胺嘧混悬液含量测定项下SD的检测波长为260 nm[8]。进一步探索磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂高效液相色谱图中的出峰情况，发现在260 nm波长下SD峰型尖锐，缺SD阴性对照样品的高效液相色谱图表明SD出峰处其他原辅料无干扰，分离度能达到要求。故选定260 nm为本研究的检测波长。

提取方法的选择：根据SD的理化性质[9]，SD弱碱性，不溶于水，选择稀HCl作为SD提取溶剂。同时，在实验过程中发现油相黏度较大，且体积占比小，无法与水相有效分离，故选用乙酸乙酯作为油相分散剂。用稀HCl对油相进行反复提取，结果表明该方法能够将制剂中的SD提取完全，回收率良好。

本实验建立HPLC测定磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂中磺胺嘧啶含量的方法，提高了该制剂含量测定的专属性。通过对高效液相色谱法的精密度、重复性、耐用性、回收率等重要参数进行考察，结果表明，HPLC测定本品时精密度、重复性、耐用性、回收率均良好，且该法简便、快速、准确，为医院制剂磺胺嘧啶鱼肝油滴鼻剂中磺胺嘧啶的含量测定方法提供了科学依据。