宋果，欧阳昌勇，李家辉，李国泉，杨超，荆敏，蒋亮

（湖南省宁远县畜牧水产事务中心，湖南宁远425600）

禽流感是由流感病毒（AIV）引起的一种禽类传染病。鸡、鹌鹑、野鸡等禽类以及鸭、鹅等水禽等均可感染发病。但发病表现不同，有的急性死亡，病死率高，有的带毒不发病。水禽是重要的传染源，是禽流感病毒的自然宿主和天然基因库[1]。禽流感根据致病力不同，分为无致病性、低致病性和高致病性。近年来，主要是H5、H6、H7、H9等亚型在家禽中流行，其中尤以H5、H7亚型中的一些毒株致病力很高，引发禽类高致病性禽流感，给养殖户造成重大损失。为加强家禽H5、H7亚型禽流感的防控，及时了解和评价宁远县2020年秋季家禽高致病性禽流感强制集中免疫抗体水平，采集了宁远县19个乡镇（街道）（冷水镇省里已抽检）的15家规模养禽场和53家散养户血样共424份，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）方法对（H5+H7)灭活疫苗抗体水平进行了检测。根据《2020年宁远县动物疫病强制免疫计划实施方案》[宁防重病指办（2020）3号]文件精神[2]，结果表明宁远县2020年秋季家禽禽流感强制集中免疫抗体合格率高，免疫效果好。

1 材料与方法

1.1 抽样方法

每个乡镇（街道）随机抽取2020年秋防时已经免疫过（H5+H7)三价灭活疫苗的规模养禽场（无规模场的免抽）和家禽散养户采集血样。

1.2 被检血清

采集和析出方法：翅静脉采血，每份1.5～2mL，自然凝固，2000r/min离心析出血清，血清清亮、新鲜，呈淡黄色，不溶血。共采集血清424份，其中鸡血清302份，鸭血清122份。

1.3 检测试剂

H5、H7亚型抗原均选自哈尔滨维科生物技术有限公司。H5亚型抗原批号为2019009（有效期：20210925）；H7亚型抗原批号为2019008（有效期：20210917）；红细胞采自熟悉农户饲养的未经疫苗免疫的健康鸡，并按照常规程序制备1%的红细胞悬液；PBS缓冲液（pH7.2，0.01mol/L）宁远县兽医实验室自配。

1.4 器材

96孔V型（90度）微量反应板、10～100μL单道及多道微量移液器（吸头自备）、微量振荡器、恒温培养箱等器材。

1.5 检测方法与判定标准

采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）试验，检测免疫抗体。HI抗体效价≥24，判定个体合格，群体免疫抗体合格率≥70%，判为群体合格[3]。H5、H7群体免疫抗体合格率均≥70%，此规模场判定免疫合格场。

2 结果

2.1 整体检测情况

从表1综合情况看，424份血样中，385份样品H5亚型抗体合格，合格率90.80%，371份样品H7亚型抗体合格，合格率87.50%。从整体检测结果来看，规模场和散养户禽流感（H5+H7）群体抗体水平均≥70%，达到国家规定标准。从表1结果可知，规模场H5、H7亚型抗体合格率分别为90.68%、83.85%；散养户H5、H7亚型抗体合格率分别为90.87%、89.73%。两者的禽流感免疫抗体水平整体相差不大，散养户H7亚型抗体水平略高于规模场。

表1 禽流感抗体采样检测整体情况

2.2 不同种类检测情况

从表2综合情况看，鸡、鸭H5亚型抗体合格率分别为90.39%、91.80%，鸡、鸭H7亚型抗体合格率分别为87.75%、86.88%，抗体合格率很接近，整体相差不大。但H7亚型抗体整体合格率略低于H5亚型抗体整体合格率。

表2 不同种类家禽检测情况

2.3 规模场不同种类检测情况

从表3情况来看，15家规模场103份鸡血清，H5、H7亚型抗体合格率分别为91.26%、83.50%，58份鸭血清，H5、H7亚型抗体合格率分别为89.65%、84.48%。规模场家禽H5亚型抗体水平比H7亚型抗体水平高。

表3 规模场禽流感抗体采样检测不同种类情况

2.4 散养户不同种类检测情况

从表4情况来看，53名散养户199份鸡血清，H5、H7亚型抗体合格率均为89.95%，64份鸭血清，H5、H7亚型抗体合格率分别93.75%、89.06%。散养户鸡鸭的H5、H7抗体水平整体较高，免疫效果较好。

表4 散养户禽流感抗体采样检测不同种类情况

2.5 规模场、散养户整体检测情况

从表5检测情况看，规模场H5、H7亚型抗体合格率整体达标率是80%，散养户H5、H7亚型抗体合格率整体达标率分别是90.56%、88.68%。结合采样单进一步分析可得出：规模场抗体水平不合格的有：棉花坪乡冯某古鸡场、鲤溪镇姜某树鸭场、舜陵街道李某华鸡场、九疑山乡潘某富鸡场。散养户抗体水平不达标的有：禾亭镇东恳村黄某成、文庙街道山下洞村许某志、棉花坪乡沙子田村王某邦养殖户等。

表5 规模场、散养户禽流感抗体采样整体检测情况

3 结论

从检测结果可知，H5禽流感亚型抗体整体合格率为90.80%，H7禽流感亚型抗体整体合格率为87.50%。规模场H5、H7亚型抗体合格率分别为90.68%、83.85%；散养户H5、H7亚型抗体合格率分别为90.87%、89.73%。说明国家免费提供的（H5+H7)三价灭活疫苗的免疫效果较好，能够提供较强的保护力。同时对抗体水平不合格的养殖场户建议全面排查原因，及时补免，进一步提高免疫抗体合格率，强化免疫屏障。

4 分析与讨论

从本次秋防禽流感免疫抗体检测结果来看，散养户的免疫效果好于规模场。原因可能与该县一人被确诊感染H5N6禽流感[4]，该县于2020年12月紧急组织对全县存栏家禽全面进行补免，散养户补免由镇村干部带队，专职防疫员指导，村级防疫员注射，效果好；规模场按程序免疫，补免时间不一致有关。这也提示采样时要详细询问免疫时间，严格根据农业农村部的规定，免疫21天后进行采样检测[3]。

从本次检测抗体水平来看，宁远县家禽禽流感免疫抗体水平较高，达到了国家规定标准，禽流感流行风险低。但存在免疫效果不平衡，少数乡镇（街道）血清样品免疫抗体合格率不达标。其中，H5亚型不达标的有：棉花坪乡、九疑山乡，H7亚型不达标的有：舜陵街道、棉花坪乡、九疑山乡。这与免疫注射操作不规范、免疫时间不一致以及和棉花坪乡、九疑山乡位置偏僻，养殖户认为天然防疫条件好，无需免疫等因素有关。提示这些乡镇（街道）要进一步加强禽流感防控知识宣传，压实工作，迅速补免到位。

从本次不同类型禽流感免疫抗体水平来看，H5亚型抗体合格率整体略高于H7亚型，这与王兵[5]等检测结果一致。特别是从本次规模场抗体水平来看，差异更加明显。这可能是与养殖场主或场内技术员工作认真程度和冬春季节有关，也可能与不同疫苗毒株有不同的免疫原性，或者是鸡鸭不同个体有不同免疫应答反应有关。具体需进一步研究探讨。

本次免疫效果评估中，少数规模场、散养户和村级防疫员反映，此次秋防禽流感疫苗免疫副反应较其他疫苗大。具体表现为免疫后的家禽特别是鸡出现精神沉郁，不食和死亡等情况，有的禽群免疫后两天才开始进食。个别散养户的家禽（特别是鸡）的免疫应激死亡率偏高，免疫后鸡进行性消瘦，死亡鸡肺脏有肿大现象。原因或与村级防疫员免疫注射操作不规范、禽群存在基础疾病以及疫苗毒株由H7-Re1更换为H7-Re3等因素有关。具体需进一步研究探讨。

从本次采样情况看，全县乡镇（街道）动物防疫技术人员不能很好地掌握鸡鸭翅静脉采血技能，采血主要依靠县级技术人员。建议该县畜牧兽医主管部门进一步加强基层采样技能训练，提高采样能力。此次秋防免疫效果评估，全县所有特聘动物防疫专员均积极参与，工作主动。特别是通过现场学习采样技术，特聘动物防疫专员专业素养有了整体提升。建议政府部门强化措施，进一步稳定特聘动物防疫专员队伍，增强基层动物防疫技术力量。通过此次评估了解到全县乡镇（街道）动物防疫技术人员青黄不接，面临断层，个别村级防疫员工作不到位等问题。建议该县采取定向培养、特岗招聘或继续招募特聘动物防疫专员等方式补充基层动物防疫技术人才。同时，进一步强化村级动物防疫员的管理，确保及时补免，应免尽免。

本次检测由于时间和人员关系，抽样检测的数量不多，不能全面代表宁远县2020年秋季禽流感免疫抗体整体水平，但可对全县进一步开展禽流感补免工作提供参考。