靳荣, 李红芳, 南寿山, 姜忠敏, 吴晓蕊

天津市第五中心医院 1妇产科， 3消化科， 4病理科(天津 300450)； 2兰州市第一人民医院妇产科(甘肃兰州 730050)

子宫内膜腺癌是一种原发于子宫内膜表面上皮的恶性肿瘤，围绝经期女性好发，是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一[1]。有报道显示，我国每年新发子宫内膜腺癌接近20万例，且发病率呈升高趋势[2]。目前子宫内膜腺癌的发病机制仍未完全明确。小泛素相关修饰物是一类存在于真核生物中的高度保守的蛋白，参与蛋白质泛素化相关修饰过程[3]。而小泛素相关修饰物特异性蛋白酶则是在蛋白质泛素化过程中特异性催化小泛素相关修饰物与靶蛋白分离的酶[4]。近年来研究发现，小泛素相关修饰物特异性蛋白酶(SENP)在肿瘤发生、发展中发挥重要作用[5]。SENP1、SENP5、SENP6是SENPs家族的重要成员，已有研究发现，SENP1在前列腺癌、胃癌中呈现高表达； SENP5在舌鳞状细胞中呈现高表达；SENP6在恶性胶质瘤中呈现高表达[6-8]。但三者在子宫内膜腺癌中的表达情况尚无相关报道。本研究分析SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及其临床意义，旨在探讨SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宫内膜腺癌的发生、发展中的作用，并对诊断治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月至2019年10月我院收治的子宫内膜腺癌病例80例，纳入标准：(1)所有病例均经高年资病理医生诊断确诊为子宫内膜腺癌；(2)术前未经放化疗；(3)不合并其他系统恶性肿瘤；(4)无自身免疫疾病；(5)临床病历资料完整。年龄40～78岁，平均(61.38±8.56)岁；国际妇产科联盟临床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期29例、Ⅲ期19例、Ⅳ期12例；组织学分级：G1级27例、G2级31例、G3级22例；肌层浸润程度：<1/2 52例、≥1/2 28例；有淋巴结转移18例、无淋巴结转移62例。

不典型增生62例，纳入标准：(1)所有病例均经高年资病理医生诊断确诊为子宫内膜不典型增生；(2)无放化疗史；(3)不合并其他系统恶性肿瘤；(4)无自身免疫疾病；(5)临床病历资料完整。年龄42～77岁，平均(60.15±8.21)岁。

增殖期子宫内膜58例。纳入标准：(1)所有病例均经高年资病理医生诊断确诊为增殖期子宫内膜；(2)无放化疗史；(3)不合并其他系统恶性肿瘤；(4)无自身免疫疾病；(5)临床病历资料完整。年龄40～79岁，平均(61.02±8.87)岁。

3组在年龄构成比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会同意，患者对研究知情同意。

1.2 主要试剂 兔抗人SENP1、SENP5、SENP6单克隆抗体(美国Abcam公司)；免疫组化试剂盒(福建迈新生物有限公司)；3%过氧化氢、DAB显色剂、酶标羊抗兔聚合物(北京中杉金桥生物有限公司)。

1.3 方法 术中取病变处标本，经10%中性甲醛固定24 h后进行石蜡包埋，切成4 μm连续切片。切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇溶液脱水、高温高压抗原修复、3%过氧化氢去除内源性过氧化物酶、加入山羊血清，然后分别加入兔抗人SENP1、SENP5、SENP6单克隆抗体，4℃下过夜(反应时间≥8 h)，加入生物学二抗，加入SABC工作液后进行DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水透明，封片后在显微镜下观察。用PBS代替生物学一抗进行阴性对照，以说明书阳性对照样品作为阳性对照。

1.4 结果判别[9]在显微镜下观察切片，当细胞内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性。SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性均主要表达与细胞质内，每个切片随机观察10个高倍镜(400倍)视野，按照阳性细胞所占百分比计分：≤5% 0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，>75% 4分。按照细胞染色程度计分：无着色 0分，淡黄色 1分， 棕黄色 1分，黄褐色3分。将两项结果乘积作为总分，≥4分为阳性，<4分为阴性。

2 结果

2.1 3组组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表达情况比较 子宫内膜腺癌组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于不典型增生组、增殖期子宫内膜组；不典型增生组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于增殖期子宫内膜组(P<0.05)，见表1和图1。

表1 3组组织SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性表达情况比较 例(%)

注:A：SENP1在增殖期子宫内膜组中的表达; B：SENP1在不典型增生组中的表达; C：SENP1在子宫内膜腺癌组中的表达；D：SENP5在增殖期子宫内膜组中的表达;E：SENP5在不典型增生组中的表达; F：SENP5在子宫内膜腺癌组中的表达；G：SENP6在增殖期子宫内膜组中的表达; H：SENP6在不典型增生组中的表达; I：SENP6在子宫内膜腺癌组中的表达

2.2 子宫内膜腺癌组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表达情况与临床病理特征的关系 临床分期Ⅲ+Ⅳ期、组织学分级G3级、肌层浸润≥1/2、有淋巴结转移者SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期、组织学分级G1、G2级、肌层浸润<1/2、无淋巴结转移者(P<0.05)，不同年龄分组SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 子宫内膜腺癌组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性表达情况与临床病理特征的关系 例(%)

2.3 子宫内膜腺癌组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表达的相关性 Spearman相关分析显示，子宫内膜腺癌组织中SENP1蛋白表达与SENP5、SENP6蛋白表达呈正相关(r=0.708,P=0.000;r=0.773,P=0.000)，SENP5蛋白表达与SENP6蛋白表达呈正相关(r=0.632,P=0.000)，见表3～5。

表3 子宫内膜腺癌组织中SENP1、SENP5蛋白表达的相关性 例

3 讨论

近年来研究发现蛋白质泛素化相关修饰是真核生物普遍存在的过程，通过蛋白修饰可以调节靶蛋白的活性、定位、数量，并与其他生物学大分子相互作用参与生命活动过程[10]。蛋白质泛素化相关修饰过程是一个动态可逆的修饰过程，主要包括活化、结合、连接和修饰几个基本步骤，其逆向的去蛋白质泛素化相关修饰过程则由SENPs家族催化完成[11]。研究发现，SENPs家族主要由两大类组成，其中SENP1、SENP2具有C末端异肽酶水解活性，可以对无活性的泛素化相关修饰蛋白前体进行切割，而SENP5、SENP6则主要促进泛素化相关修饰蛋白与靶蛋白的解离过程[12-13]。Wei等[14]研究发现，在前列腺癌组织中存在SENP1的高表达。Burdelski等[15]报道SENP1可以通过激活c-Jun信号通路进而增加细胞周期蛋白cyclin D1的表达，促进肿瘤的发生。目前已有研究发现在骨肉瘤和肝癌中存在SENP5的高表达，SENP5可以通过激活DNA损伤应答激酶的去泛素化相关修饰作用，促进细胞的恶性转化[16-18]。而在白血病患者中则存在SENP5的低表达。SENP6可以促进转录因子叉头盒蛋白去泛素化相关修饰，促进胃癌的发生、发展。但目前三者在子宫内膜腺癌中的表达情况尚未见相关报道[19]。

本研究应用免疫组化法检测子宫内膜腺癌、不典型增生、增殖期子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6表达情况，结果显示子宫内膜腺癌组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于不典型增生组、增殖期子宫内膜组，提示SENP1、SENP5、SENP6在子宫内膜腺癌发生中起到促进作用。结合相关文献分析其原因可能与以下几方面有关：(1)SENP1可能通过激活c-Jun等信号通路增加细胞周期蛋白的表达，促进子宫内膜腺癌的发生[20]；(2)SENP5、SENP6可能通过促进蛋白去泛素化相关修饰，进而促进子宫内膜癌的发生[21]；(3)SENP1可能通过调控β-链蛋白(β-catenin)进而调控wnt信号通路，促进肿瘤的发生和侵袭[19]；(4)SENP6通过抑制泛素连接酶导致抑癌基因失活，促进细胞恶性转变[22]。不典型增生组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于增殖期子宫内膜组则提示子宫内膜腺癌的发生是一个多步骤、长时间的渐进的过程，在这一过程中多种肿瘤相关信号通路被逐渐激活，相关蛋白逐渐改变，因此也涉及到SENP1、SENP5、SENP6蛋白表达阳性率的逐渐升高。近年来尽管子宫内膜腺癌在环境因素、信号通路和癌基因水平均取得了较大进展，但对于分化程度较差、肌层浸润和淋巴道转移的子宫内膜腺癌治疗仍不容乐观，寻找子宫内膜腺癌生物学标志进而辅助诊断和治疗成为临床的热点[23]。本研究对子宫内膜腺癌组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表达情况与临床病理特征的关系进行了分析，结果显示SENP1、SENP5、SENP6蛋白的表达与患者年龄无关，而与子宫内膜腺癌的临床分期、组织学分级、浸润及淋巴道转移相关。目前研究表明肿瘤的浸润和转移是一个主动过程，涉及肿瘤细胞从原发灶游出、肿瘤细胞突破基底膜、进入血管或淋巴管，并游走到其他组织和器官进行生长等过程[24]。本研究结果提示SENP1、SENP5、SENP6可能通过激活某些信号通路促进子宫内膜腺癌的发展、浸润和转移。也提示三者在子宫内膜癌辅助诊断和指导治疗中具有一定价值。进一步分析发现，子宫内膜腺癌组织中SENP1蛋白表达与SENP5、SENP6蛋白表达呈正相关，提示三者可能具有协同作用，其具体机制尚需进一步研究证实。

综上所述，子宫内内膜腺癌组织中存在SENP1、SENP5、SENP6蛋白的异常高表达，其水平与子宫内膜腺癌的临床分期、组织学分级、浸润及淋巴道转移相关，且三者表达呈正相关，SENP1、SENP5、SENP6可能在子宫内膜癌辅助诊断和指导治疗中具有一定价值。