宋芷霜, 郭宝芝, 刘爱珍, 丁俊珊

郑州市妇幼保健院妇科(河南郑州 450000)

子宫脱垂是指子宫从正常位置沿阴道下降至宫颈外口达坐骨棘水平以下，甚至可全部脱出于阴道口之外，常伴有阴道前后壁脱垂及膀胱尿道和直肠膨出，是盆底功能障碍性疾病的主要组成部分，严重影响女性生活质量[1]。有数据统计显示，子宫脱垂多发于40～60岁之间，尤以绝经后女性为主，认为与绝经后女性雌激素水平下降，生殖器官缩小，相关支撑结构萎缩相关[2]。近年研究发现，子宫脱垂有年轻化趋势，高达30%，其中有盆底功能障碍性疾病家族史患者发病早、进展迅速，高级别者亲属患病率是一般人群的2.4～5倍，提示遗传易感性在子宫脱垂致病机制中可能占有一定地位[3-4]。硫酸基转移酶(sulfotransferases,SULTs)是机体催化硫酸化反应的关键酶，而硫酸化反应是在各种内源物(甾体激素或神经递质等)和外源物(药物制剂或食品添加剂等)生物转化过程中占有重要地位[5]。目前研究发现至少有9个SULTs家族，其中人类SULTs基因家族主要有SULT1、SULT2、SULT4和SULT 6，对SULT1研究较多，有8个亚家族成员，以SULT1A3和SULT1E1为主[6-7]。研究发现，SULT1E1基因编码蛋白与雌二醇、雌酮及合成雌激素均有较高亲和性，与子宫肌瘤等雌激素依赖性疾病发生发展密切相关[8-9]。本研究前期发现SULT1A3在子宫脱垂患者主韧带组织中表达异常，但其具体相关机制尚不清楚。为此，本研究选取53例子宫脱垂患者和同期无盆腔脏器脱垂和无压力性尿失禁但需行子宫全切术的53例患者作为研究对象探讨SULT1A3在子宫脱垂主韧带组织中的表达情况及临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月至2018年1月于本院收治并行手术治疗(单纯阴式子宫切除术)的53例子宫脱垂(POP-Q分期为Ⅱ～Ⅳ期)患者作为观察组；同期选取无盆腔脏器脱垂和无压力性尿失禁但需行子宫全切术的53例患者作为对照组。

入组标准：(1)所有研究对象均有产道分娩史；(2)所有患者知情，且签署同意书。

排除标准：(1)近6月有雌激素类药物服用史；(2)术后病理结果提示雌激素相关性疾病。

所有研究对象均知情且签署同意书，并已通过本院伦理委员会批准。两组绝经前和绝经后年龄、体质指数及产次等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 标本采集 避开血管，确保切除组织处未见异常肿物及结节，且肉眼未见撕裂、断裂及挫伤等，取接近子宫颈的主韧带组织，大小约1 cm×1 cm×1 cm，用0.9%生理盐水冲洗干净，并将其为分成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm组织块，置于装有RNA保存液的冻存管中，并于-80℃冰箱中保存备用，经HE染色证实该组织为韧带组织。

1.2.2 实时荧光定量聚合酶链反应检测[10]采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组主韧带组织中SULT1A3、雌激素受体-α(estrogen receptor-α,ER-α)和雌激素受体-β(ER-β) mRNA表达水平：第一，总RNA提取，取一小块组织复溶，后将其置于含500 μL Trizol液(美国Thermo公司)以提取冰冻组织总RNA，并用NanoDrop 8000分光光度计对RNA进行定性和定量检测。第二，逆转录，参照逆转录试剂盒(日本TaKaRa公司)说明书合成cDNA，其中逆转录体系(20 μL)包括4 μL 5×primer script buffer、1 μL Random 6 mers、1 μL primer script RT Enzyme、1 μL Oligo dT primer、1 μg总RNA和RNAse Free(补足20 μL)，逆转录条件：37℃ 20 min，90℃ 10 s，获得的cDNA用于PCR扩增。第三，PCR，用Primer Primer5.0设计引物，并通过BLAST验证引物特性，由上海吉凯基因科技有限公司辅助完成；基于Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System(美国ABI公司)，用SYBR Green荧光染料(日本TaKaRa公司) 对PCR扩增反应中循环产物荧光信号进行实时检测，以2-ΔΔCt表示mRNA相对表达水平。

1.3 观察指标 收集并对比各组主韧带组织SULT1A3、,ER-α和ER-β mRNA表达水平，并对观察组随访2年，记录其复发情况。

1.4 判断标准[11]检查患者平卧用力向下屏气处于最大脱垂状态，POP-Q临床分期有5个级别：0度：无脱垂；Ⅰ度:脱垂最远处在处女膜内，距处女膜>1 cm；Ⅱ度:脱垂最远处距处女膜边缘1 cm内，处女膜内或是处女膜外；Ⅲ度:脱垂最远处在处女膜外，距处女膜边缘在1～2 cm内，且

2 结果

2.1 各组主韧带组织SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比较 在观察组和对照组中，与绝经前比较，绝经后主韧带组织中SULT1A3 mRNA水平升高，ER-α mRNA和ER-β mRNA水平降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，观察组主韧带组织中SULT1A3 mRNA水平更高，ER-α mRNA和ER-β mRNA水平更低，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组主韧带组织SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比较

2.2 主韧带组织SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA与子宫脱垂复发的关系 随访2年，53例子宫脱垂患者中10例复发，其中2例为绝经前，8例为绝经后。与未复发者比较，复发者主韧带组织SULT1A3 mRNA水平相对较高，但ER-α mRNA和ER-β mRNA水平则相对较低，差异均有统计学意义(P<0.05)；在复发者中绝经后主韧带组织SULT1A3 mRNA水平高于绝经前，但其ER-α mRNA和ER-β mRNA水平低于绝经前，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3、4。

表3 SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA与子宫脱垂复发的关系

表4 复发者绝经前后SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比较

2.3 SULT1A3 mRNA与ER-α mRNA和ER-β mRNA的关系 经Pearson相关分析得知，SULT1A3 mRNA与ER-α mRNA和ER-β mRNA均呈负相关(P<0.05)，见表5。

表5 SULT1A3 mRNA与ER-α mRNA和ER-β mRNA的关系

3 讨论

盆底功能障碍性疾病是因各种原因导致盆底支持功能薄弱，盆腔器官下移的一种功能障碍性疾病，而子宫脱垂是其主要表现形式，与盆底结缔组织结构及功能完整性被破坏相关[12]。其中位于阔韧带下部，横行于宫颈两侧和骨盆侧壁之间的主韧带是盆底结缔组织的重要组成部分，是固定宫颈位置、防止子宫脱垂的主要结构[13]。目前公认的导致子宫脱垂发生的致病因素主要包括妊娠及分娩所致盆底结构组织损伤、年龄增长所致雌激素水平降低、长期腹压增加与体质指数增加、遗传因素及先天性发育不良等[14-15]。研究发现，导致盆腔器官脱垂尤其是子宫脱垂发生的病因可能是单一的，也可能是多因素联合作用的结果[16-17]。SULT1A3基因位于16号染色体短臂上，是硫酸基转移酶1A家族重要成员之一，存在于胃肠、肺、血小板及脑组织当中，与消化系统和神经系统相关疾病发生发展密切相关[18-19]。近年研究发现，SULT1A3还参与单环酚类化合物的硫化反应，与雌激素及类似物代谢密切相关[20]。

本研究前期发现SULT1A3在子宫脱垂患者主韧带组织中表达异常，但其具体相关机制尚不清楚；为此，本研究选取53例子宫脱垂患者和同期无盆腔脏器脱垂和无压力性尿失禁但需行子宫全切术的53例患者作为研究对象进行探讨发现，观察组绝经前后主韧带组织SULT1A3 mRNA水平均高于对照组，提示SULT1A3主韧带组织表达异常可能是子宫脱垂发生的一个重要危险因素。

通常认为支持结构形态及功能损伤是以子宫脱垂为代表的盆腔器官脱垂的主要致病原因，而雌激素在维持支持结构形态及功能上占有重要地位；雌激素是一类核蛋白，主要通过结合细胞浆受体蛋白在维持盆底支持组织结构、张力、血供及神经再生中发挥着重要作用[21]。本研究检测主韧带组织ER-α mRNA和ER-β mRNA水平发现，与对照组比较，观察组绝经前后主韧带组织中ER-α mRNA和ER-β mRNA水平均明显降低，提示主韧带组织ER-α和ER-β表达水平降低也是子宫脱垂发生的一个重要原因，与既定研究事实吻合；那它与SULT1A3之间是否存在关系，又存在什么关系呢？为此，本研究对SULT1A3 mRNA与ER-α mRNA和ER-β mRNA数据进行了Pearson相关分析，得知SULT1A3 mRNA与ER-α mRNA和ER-β mRNA均呈明显负相关，提示SULT1A3可能通过降低ER-α和ER-β发挥作用。众所周知，ER-α和ER-β水平与绝经密切相关，为此，本研究对比了观察组和对照组绝经前后患者人数，发现两者差异无统计学意义，排除了患者绝经情况分配不均对本研究的影响。本研究还发现，与绝经前比较，观察组和对照组绝经后主韧带组织SULT1A3升高，ER-α和ER-β下降，提示在同一组研究对象中绝经与否也是子宫脱垂发生的一个重要原因。此后，本研究还对观察组患者随访了2年，并记录其复发情况，发现与未复发者比较，复发者主韧带组织SULT1A3 mRNA水平相对较高，但ER-α mRNA和ER-β mRNA水平则相对较低(P<0.05)，与前述结论基本一致，并提示子宫脱垂患者主韧带组织SULT1A3表达情况可直接影响其预后，提醒临床工作者可重点关注主韧带组织SULT1A3高水平患者，看是否可通过基因逆转等新手段解决患者后顾之忧。此外，本研究还发现复发中绝经后患者占比较大(80%，8/10)，且绝经后主韧带组织SULT1A3 mRNA水平高于绝经前，但其ER-α mRNA和ER-β mRNA水平低于绝经前(P<0.05)，与前述部分结论一致，强调绝经情况也是子宫脱垂的一个重要因素，为子宫脱垂研究提供更多的方向。

综上所述，子宫脱垂患者主韧带组织SULT1A3升高，与ER-α和ER-β下降相关，可能是子宫脱垂发生的重要原因之一。但本研究所涉研究对象样本量少，且研究时间较短，后续可通过扩大样本量，并延长研究时间以提高本文结论的可信度。