HPLC法测定注射用帕瑞昔布钠与5%葡萄糖注射液配伍后5-羟甲基糠醛的含量

2021-01-22李湘萍杜加秋

临床医药文献杂志(电子版) 2020年85期

张俊，李湘萍，杜加秋

（瀚晖制药有限公司，浙江杭州 310016）

5-羟甲基糠醛是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，该化合物对人体横纹肌和内脏有损害，且可发生聚合导致葡萄糖注射液变色[1]。注射用帕瑞昔布钠说明书中建议的配伍溶剂包含5%葡萄糖注射液，为了确保用药安全，需控制配伍溶液中5-羟甲基糠醛的含量[2-3]。本研究探讨HPLC法测定注射用帕瑞昔布钠与5%葡萄糖注射液配伍后5-羟甲基糠醛的含量，并模拟临床用药对配伍后的溶液放置一定的时间后5-羟甲基糠醛的含量进行测定，报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪[厂家：戴安、岛津]；电子分析天平和pH计[厂家：梅特勒]。

1.2 试药

5-羟甲基糠醛（厂家：中国食品药品检定研究院，批号：111626-201912，含量99.2%）；帕瑞昔布钠杂质A、B、C、D、E，注射用帕瑞昔布钠（规格：40mg；批号：6190401、6190403）均由浙江海正药业股份有限公司提供；5%葡萄糖注射液（厂家：湖南科伦制药有限公司；批号：E18100601-1）；注射器（厂家：玉升医疗器械；批号：20200226）；输液管（厂家：湖南省绿洲惠康发展有限公司；批号：20190601）。甲醇和磷酸为色谱级，磷酸二氢钾为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

精密称取5-羟甲基糠醛对照品适量，用稀释剂（甲醇：水=50:50）溶解并稀释制成1μg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液的配制

取注射用帕瑞昔布钠适量，加5%的葡萄糖复溶；用稀释剂（甲醇：水=50:50）配制成含葡萄糖约5mg/ml的溶液作为供试品溶液。

2.3 色谱条件

苯基键和硅胶柱（型号：YMC Pack Pheny 1；柱长：4.6mm×250mm；直径：5μm）；缓冲盐：0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调节pH至3.0±0.1。流动相A：甲醇-缓冲盐=50:50；流动相B：甲醇-缓冲盐=70:30；梯度洗脱，洗脱程序见表1；检测波长284nm；流速：1.0ml/min；进样体积：10μl；柱温40℃；。供试品溶液的高效液相色谱检测图见图1。

表1 梯度洗脱表

图1 供试品溶液的高效液相色谱检测图

2.4 5-羟甲基糠醛限度的确认

根据《中国药典》2020年版二部中与葡萄糖相关的制剂中5-羟甲基糠醛的最严限度，制定本品与葡萄糖配伍溶液中5-羟甲基糠醛限度为不得过葡萄糖标示量的0.02%[4]，并按此限度开展分析方法验证。

2.5 准确度

分别按照5%葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛限度含量的20%、50%、100%、150%制备准确度溶液，每个水平3份，每份溶液按照“2.3”项下色谱条件测定并计算回收率，结果显示各浓度下的平均回收率分别为108%、104%、102%、102%。方法的回收率良好。

2.6 重复性试验

按照“2.2”项下平行配制6份供试品并进样，按外标法计算，结果6份供试品溶液中，5-羟甲基糠醛含量的平均值为0.006%，相对标准偏差（RSD%）为0.0%，表明本方法重复性良好。

2.7 专属性

精密量取“2.1”项下的对照品溶液和“2.2”项下的供试品溶液适量，按照“2.3”项下色谱条件分别进样稀释剂、对照品溶液、帕瑞昔布钠杂质A、B、C、D、E定位溶液及供试品溶液，结果空白溶液对5-羟甲基糠醛含量测定无干扰，各杂质与5-羟甲基糠醛的分离度均大于1.5。

2.8 定量限与检测限

精密量取“2.1”项下的对照品溶液，逐级稀释并检测，当浓度为0.0079μg/ml时，信噪比在10～20之间，对应含量为1.6×10-4%，为定量限。当浓度为0.0024μg/ml时，信噪比在3～5之间，对应含量为4.8×10-5 %，为检测限。

2.9 线性与范围

取5-羟甲基糠醛适量，用稀释剂依次稀释成定量限、50%、100%、150%、200%限度浓度的溶液，按“2.3”项下色谱条件进行测定，将浓度和峰面积进行线性回归分析，得线性回归方程：y = 1.3237 x - 0.0004，相关系数r为1.0000，故5-羟甲基糠醛在0.0079μg/ml～1.5820μg/ml浓度范围内，具有良好的线性关系。

2.10 配伍溶液中5-羟甲基糠醛含量测定结果

取两批注射用帕瑞昔布钠（批号：6190401、6190402），分别按“2.2”项下的方法用5%的葡萄糖溶液复溶，依次在放置0、6、12、18、24和30h后，稀释至成含葡萄糖约5mg/ml的溶液，按“2.3”项下的色谱条件进行测定并计算5-羟甲基糠醛的含量，结果在30h内，5-羟甲基糠醛的含量均为0.006%，均未超过葡萄糖标示量的0.02%，且未发生明显变化，说明配伍溶液的稳定性良好。