葛 敏，张苏珍，贺 燕，陶 威

（连云港市畜产品质量监督检验测试中心，江苏 连云港 222001）

随着饲料行业的快速发展，无论是植物性、动物性饲料原料的需求量都在不断增大，饲料产品种类繁多，价格上涨，粗蛋白含量检测这个基本手段也就显得尤为重要。为了确保粗蛋白含量测定结果接近真值，样品的采集、制备、称量、消煮、测定都必须准确而规范。文章就饲料中粗蛋白含量测定的注意要点进行探讨与分析，以期为粗蛋白含量的测定提供帮助。

1 样品的采集

在饲料企业生产中，饲料原料、成品检测时一般都由化验员采集样品，样品采集方法是否规范直接影响到样品检测结果的最终评判。采样是随机的，依饲料原料的种类、状态、数量以及分析目的不同，采样方法也不尽相同。

散装原料应在货堆的前面、中间和后面抽取样品，按货堆高度分层采样，先上后下，各点采样不低于200 g。饲料成品应在出料口采样，每10袋用取样钎采样1次，每次取样不少于200 g。

2 样品的制备

采集的样品要基本代表全部样本。由于饲料在生产过程中的工艺限制，饲料颗粒常常不均匀，所以在检测前要通过粉碎来实现称量样品的均匀性，从而使检测结果更准确。

将采集的样品粉碎后按“四分法”混合，每个样品平均分成二份，一份为检验品，一份为复验品，贴标签并标明样品名称、来源、规格、采样人、采样日期等内容。样品应避光保存，容易腐败的样品需采用冷冻干燥法或低温保存[1]。

不同的样品因为材质不同，在粉碎时要注意不同事项，如棉粕，因为有棉绒，粉碎时就要注意粉碎时间适当延长；鱼粉在称量前也要进行粉碎，并防止骨肉分离；虾壳粉也不是太好粉碎，特别是水分比较大的，若粉碎时间长容易烧坏粉碎机的电机，而且也会影响结果的准确性，可以采用间歇式粉碎。

3 样品的称量

用分析天平称取样品0.5～1 g，准确至0.0002 g，无损失地放入凯氏烧瓶底部，同时进行平行样检测，以反映分析结果的精密度。

4 样品的消煮

样品消煮是蛋白质测定过程中的重要环节，是检测成败的关键[2-3]。在装有样品的凯氏烧瓶中加入混合催化剂6.4 g，硫酸12 mL和两粒玻璃珠，置于可调电炉上加热，开始小火，待样品焦化、泡沫消失后，再加大火力（360～410 ℃），直至呈透明的蓝绿色，继续加热不得低于2 h，样品的蛋白质含量高时可适当延长消煮时间，但过长的消煮时间对蛋白质含量的提高并没有显著影响。中间过程若有黑点残留瓶壁，可轻摇瓶身，将黑渣摇入瓶底硫酸中；对于顽固的黑渣可用少量硫酸冲洗到瓶底，再继续消煮，避免样品消化不完全。在这个过程中，一定要注意安全，小心被烫或被喷，瓶口不要对着他人或自己。

有的样品，如劣质鱼粉、虾壳粉、标准物质等，在消煮过程会产生非常态的大量泡沫，要注意观察，要小火加热至泡沫完全消失，再加大火力。可小火加热至透明的蓝绿色后再加大火力，继续加热不得低于2 h。

5 样品的测定

5.1 系统密闭性检查

整个蒸馏装置所有接口应该使用凡士林密封完全，接气管不得漏气，以保证蒸馏系统的密闭性，使用的试剂和操作的步骤不得有误，从而保证测定效果的准确性。

5.2 空白的测定

称取蔗糖0.5 g，同样品操作，进行空白测定。

在整个操作过程中，空白测定是一个非常重要的环节，好的空白值是保证检测结果准确的前提，空白样品滴定盐酸消耗量以0.05～0.30 mL为宜。测定时若发现空白值过高，应认真查找原因并及时解决。空白值超标一般是由于试验用水等级不够、所用试剂不纯、玻璃器皿不干净等原因造成[4]。

5.3 自我校验

样品测定之前，称取0.2 g 硫酸铵，精确至0.0002 g，直接蒸馏，同样品操作测定，测得硫酸铵含氮量为（21.19±0.20）%，否则应检查接气管是否漏气；加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。硫酸铵测定结果的准确性可以证明系统气密性完好和操作的准确性。

5.4 样品的蒸馏

氨的蒸馏有两种方法：常量蒸馏法和半微量蒸馏法。常量法是将样品分解消煮后全部用于测定，测定结果的准确度、精确度都很高，操作也比较简单，但是需要试剂量多，成本高、污染大，若测定操作失误也没办法重新测定，需要重新消煮样品。半微量法测定的结果精密度稍差一点，但就成本和环境来讲，半微量法是可取的，而且还可以反复测定。

蒸馏时要注意两点：一是反应容器里的溶液总体积要控制，在冲洗加样口时用水要适中，否则反应室溶液太多，蒸馏时溶液温度升高液面随之升高，容易喷进冷凝管内，造成结果偏大。二是要控制蒸汽量和加热温度，蒸汽产生要均匀，防止暴沸；若蒸汽量太大会将反应液喷进冷凝管中，影响结果，可以从三通处稍微放点气，使蒸汽量适中；蒸汽量太小，蒸馏速度慢，蒸馏不完全，并且容易发生倒流，导致本次试验操作失败，要根据实际情况调整加热温度。

5.5 样品的滴定

滴定用盐酸标准溶液的浓度应根据待测物质的蛋白质含量确定，浓度过大易造成结果误差也大，要稀释后再滴定，浓度必须准确。标准溶液在使用前应将溶剂瓶摇晃几次，使凝结到瓶壁上的水珠完全溶入到溶液之中，确保溶液浓度均匀一致。滴定时要排掉滴定管底部的气泡，滴定速度像断了线的水珠，并确保滴定结果准确。滴定后的灰红色应与未蒸馏前的灰红色一致[5]。

日常工作中，应严格遵守操作要求，在每一步操作中应尽量避免氮的损失，消除由于反应不完全对结果的影响，取得较为准确的测定结果。

影响饲料中粗蛋白测定结果的因素很多，笔者根据实践中对饲料中粗蛋白含量测定的工作经验，讨论分析了影响饲料中粗蛋白含量测定结果的几个因素，主要阐述样品采集、制备、称量、消煮、测定过程中的注意事项及操作要点，希望为准确测定饲料中粗蛋白含量提供参考。