李扶昆

（乐山职业技术学院药学系，四川乐山 614000）

佛手（Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle）为芸香科柑橘属植物，干燥果实可入药，具有和胃止痛、疏肝理气、燥湿化痰之功效[1]。

1 仪器与材料

Bruker-600M核磁共振仪（美国布鲁克公司）；Varian-500 核磁共振仪（美国瓦里安公司）；Agilent 6320 型液质联用仪（美国安捷伦公司）；Hanon P850型旋光仪（济南海能仪器股份有限公司）；LC-3000半制备高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）；Thermo BDS-C18（10mm×250mm，5μm）色谱柱（美国赛默飞公司）；GF-254薄层色谱硅胶板（烟台江友硅胶开发有限公司）；正相硅胶（青岛海洋化工厂）；反相硅胶（德国Merk公司）；葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）；HPLC所用甲醇和乙腈（美国MREDA公司）；实验过程中所用的乙醇、甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等试剂均为分析纯（天津大茂试剂厂）。

佛手药材于2019年10由四川乐山沙湾区蜀景苑佛手柑种植基地提供，并由秦运潭副教授（四川省食品药品学校）鉴定为佛手柑Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle，标本现存放于乐山职业技术学院药物研究中心（编号：CS201910）。

2 提取分离

干燥佛手柑药材5kg，切碎后用90 %乙醇（10L/次）超声提取3次，每次0.5h，减压浓缩3 次提取液，得浸膏180g。在浸膏中加入2L水混悬，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶剂后分别得到石油醚部位（25g），乙酸乙酯部位（40g），正丁醇部位（60g）。

乙酸乙酯萃取部位（40g）首先进行硅胶柱（200～300目，800g）色谱分离，用二氯甲烷-甲醇（10∶1，5∶1，2∶1）梯度洗脱，得到6个粗流分 Fr.1～Fr.6。Fr.2经硅胶柱色谱二次分离，用石油醚-丙酮（3∶1→1∶3）梯度洗脱，得到3个主要流分Fr.2-1～Fr.2-3。Fr.2-2经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱（二氯甲烷：甲醇，1∶1）色谱分离，得到3个主要流分Fr.2-2-1～Fr.2-2-3。Fr.2-2-2经HPLC（乙腈-水，55 %）色谱分离，得到纯化合物3（7mg）；Fr.4经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱（二氯甲烷：甲醇，1∶1）色谱分离，得到3个粗流分Fr.4-1～Fr.4-3。Fr.4-2经二次HPLC（乙腈-水，30 %）色谱分离，得化合物2（4mg）和1（8mg）。Fr.4-1经反相硅胶柱色谱分离，用甲醇-水（10 %、30 %、60 %）梯度洗脱，得到3个主要流分Fr.4-1-1～Fr.4-1-3。Fr.4-1-3经正相硅胶柱（200～300目）色谱分离，石油醚-二氯甲烷-甲醇（4∶4∶1）等度洗脱，得纯化合物4（10mg）。Fr.5析出许多不溶性白色粉末固体，后经二氯甲烷、甲醇洗去杂质，最后得到纯化合物5（15mg）。

3 结构鉴定

化合物1 为浅黄色针状晶体（丙酮），熔点为267～268℃；UV254紫外灯下显亮蓝色暗斑；ESI-MSm/z179[M+H]+，结合13C数据推测出该化合物分子式为C9H6O4。1H NMR（600MHz，CD3OD）δH：7.78（1H，d，J=9.0Hz，H-4），6.94（1H，s，H-5），6.76（1H，s，H-8），6.18（1H，d，J=9.0Hz，H-3）；13C NMR（150MHz，CD3OD）δC：164.4（C-2），112.9（C-3），146.1（C-4），112.6（C-4a），113.1（C-5），144.6（C-6），152.1（C-7），103.7（C-8），150.6（C-8a）。上述波谱数据与文献[2]报道一致，故确定该化合物结构为5，7-二羟基香豆素（esculetin）。

化合物2为无色无定形粉末固体，UV254紫外灯下显暗斑；ESI-MSm/z153[M-H]-，结合13C数据推测出该化合物分子式为C8H10O3。1H NMR（600MHz，CD3OD）δH：6.66（1H，d，J=8.4Hz，H-5），6.63（1H，d，J=2.4Hz，H-2），6.51（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6），3.66（2H，t，J=7.2Hz，H-8），2.65（2H，t，J=7.2Hz，H-7）；13C NMR（150MHz，CD3OD）δC：131.7（C-1），117.0（C-2），146.0（C-3），144.5（C-4），116.3（C-5），121.1 （C-6），39.7（C-7），64.5（C-8）。以上波谱数据与文献[3]报道一致，故鉴定该化合物为3，4-二羟基苯乙醇（3，4-dihydroxyphenylethanol）。

化合物3 为白色片状晶体（甲醇），熔点为178～179℃；UV254紫外灯下显暗斑；[α]20 D+10.6（c0.1，CHCl3）；ESIMSm/z419[M+H]+，结合13C数据推测出其分子式为C22H26O8。1H NMR（500MHz，CDCl3）δH：6.60（4H，s，H-2，2′，6，6′），5.46（2H，s，4，4′-OH），4.75（2H，d，J=4.0Hz，H-7，7′），4.30（2H，dd，J=9.0，7.0Hz，H-9a，9a′），3.92（12H，s，4×OCH3），3.92（2H，m，H-9b，9b′），3.10（2H，m，H-8，8′）；13C NMR（125MHz，CDCl3）δC：147.4（C-3，3′，5，5′），134.5（C-4，4′），132.3（C-1，1′），102.9（C-2，2′，6，6′），86.3（C-7，7′），72.0（C-9，9′），56.6（3，3′，5，5′-OCH3），54.5（C-8，8′）。以上波谱数据与文献[4]报道的（+）-丁香脂素[（+）-syringaresinol]数据一致。

化合物4为黄色粉末固体，UV254下显暗斑；ESI-MSm/z323[M+Na]+，结合13C数据推测出其分子式为C16H12O6。1H NMR（600MHz，DMSO）δH：12.94（1H，s，5-OH），7.53（1H，d，J=2.4Hz，H-2’），7.54（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6’），6.94（1H，d，J=8.4Hz，H-5’），6.88（1H，s，H-3），6.47（1H，d，J=2.4Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.4Hz，H-6），3.90（3H，s，3’-OCH3）；13C NMR（150MHz，DMSO）δC：163.3（C-2），102.9（C-3），181.4（C-4），161.2（C-5），98.9（C-6），164.7（C-7），93.9（C-8），157.2（C-9），102.8（C-10），120.1（C-1’），109.9（C-2’），150.8（C-3’），147.9（C-4’），115.6（C-5’），120.2（C-6’），55.7（3’-OCH3）。以上波谱数据与文献[5]报道一致，故鉴定该化合物为金圣草黄素（chrysoeriol）。

化合物5为白色无定形粉末固体；熔点 283～284℃；5% 硫酸乙醇显色剂显紫红色，Molish反应呈阳性；与β-胡萝卜苷标准品共薄层，在二氯甲烷/甲醇、二氯甲烷/丙酮、石油醚/二氯甲烷/甲醇3种溶剂系统展开其Rf 值均一致，与标准品混合后测定其熔点不下降，故可鉴定该化合物为β-胡萝卜苷（β-daucosterol）。

4 结束语

报道了从栽培佛手柑90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到的5个化合物，其成分类型与已报道的佛手药材中成分类型一致。其中化合物5，7-二羟基香豆素（esculetin）、丁香脂素（syringaresinol）、金圣草黄素（chrysoeriol）为首次从该药材中分离得到。本研究为进一步阐明该药材的物质基础有一定的参考价值，并能为其生物活性及质量控制的深入研究提供化合物。但是，对其药理活性以及质量控制等相关工作需要进一步开展研究。另外，对石油醚萃取部位和正丁醇萃取部位的分离鉴定也有待进一步开展。